유류오염 토양에서 난분해성 물질인 PAH (polycyclic aromatic hydrocarbon)들을 잘 분해하는 균주 중 SOD (superoxide dismutase) 활성이 높은 균주인 Sphingomonas sp. KS 301의 SOD특성을 알아보기 위하여 Ammonium sulfate 침전, DEAE-Sepharose 크로마토그래피, Superose-12 겔 여과 크로마토그래피, Uno-Q1 이온교환 크로마토그래피를 이용하여 SOD 단백질을 정제하였다. Sphingomonas sp. KS 301은 DEAE-Sepharose 크로마토그래피로 분석한 결과, 기존의 알려진 세균들과는 달리 서로 다른 5가지의 SOD 활성을 가지고 있는 것으로 나타났으며 본 연구에서는 그중 SOD III를 부분 정제하였다. 정제한 SOD III는 Mn type 및 Fe type Escherichia coli SOD와 비교했을 때 비활성도(specific activity)가 5배로 높게 나타났다. SOD III의 분자량은 SDS-PAGE에서는 23 kDa으로 측정되었으며 Superose-12겔 여과 크로마토그래피 후 native 상태의 분자량은 71 kDa으로 정제한 SOD는 3개의 소단위체로 구성되어 있는 것으로 보여진다. 정제한SOD III의 최적 pH는 7.0 이었고 $20^{\circ}C$에서 최적의 활성을 보였다. 또한 SOD의 종류를 알 수 있는 억제물질 $NaN_{3},\;H_{2}O_{2},\;KCN$를 이용한 억제효과를 살펴보았더니 $NaN_{3}$에만 억제되어 Mn type의 SOD임을 알 수 있었다. 또한 이 효소의 아미노 말단의 아미노산 서열은 Psudomonase ovalis 및 Vibrio cholerae의 SOD와 가장 유사하였다.
프로디지오신은 Serratia marcescens, Vibrio psychroerythrus, Hahella chejuensis 등이 생산하는 일반적인 pyrrolylpyrromethane 골격을 특징으로 하는 붉은색 색소이다. 프로디지오신은 항암, 면역억제, 항진균, 항말라리아, 살조 활성을 갖는 것으로 보고되어있다. 프로디지오신은 다양한 활성이 비해 생산율이 현저히 낮고, 생합성 조건이 까다롭다. 이로 인해 판매 가격이 높고, 활용성이 낮다. 본 연구는 Serratia의 배양 조건에 따른 생산 효율을 높이기 위한 다양한 연구를 진행하였다. 본 연구에서는 16S rDNA 유전자 서열 분석 및 생리학적 특성을 기반으로 prodigiosin을 생성하는 박테리아 균주 PDGS120915를 부산의 경미하게 오염된 하천수에서 분리하여 Serratia sp.의 균주로 확인하였다. PDGS120915의 붉은색 색소를 산성에탄올을 이용하여 직접 추출하고 특성분석을 실시한 결과 프로디지오신 화합물로 확인되었다. 색소 생성은 25℃, pH 7 및 0% NaCl 농도 조건에서 14시간 동안 배양했을 때 최적을 생성을 보였다. 또한 우리는 fructose와 beef extract 같은 탄소 및 질소원을 처리하면 프로디지오신 생산이 각각 약 6배와 4배 증가한다는 것을 발견하였다. 미네랄에서는 KCl이 프로디지오신 생산 증대에 가장 효과적이었다. 카세인은 또한 프로디지오신 생산에 가장 적합한 공급원이었다.
Grapefruit seed extract(GFSE)의 여러가지 미생물에 대한 항균력과 물김치 저장 효과를 검토한 결과는 다음과 간다 1. GFSE의 세균류에 대한 항균력에서 Vibrio속은 50ppm, Bacillus cereus와 Staphylococcus aureus는 30ppm, Serratia속은 10ppm 이상에서 균의 증식이 억제되었다. 2. 세균중 패혈증 원인균으로 알려진 Vibrio vulnificus에 대한 항균성은 nutrient broth에서 GFSE 30ppm 농도까지는 증식을 확인할 수 있었으나 50ppm 이상의 첨가에서는 72시간까지 균의 증식을 볼 수 없었다. 그리고 $5\%$ skim milk에서의 본 균에 대한 GFSE 살균력을 실험한 결과 $5.2\times10^5$에서 저장 120시간 후에는 GFSE농도 0, 10, 30, 50 및 100ppm에서 각각 $9.6\times10^3,\;5.3\times10^3,\;5.6\times10^2$, 48, 35/ml로 감소되어 GFSE농도 50ppm 이상에서는 살균효과가 있음을 알 수 있었다. 3. 곰팡이류에 대한 항균력은 Aspergillus parasiticus가 100ppm, Asperillus versicolor 50, Penicillium funiculosum 100, Pyrenochaeta terrestris 30 그리고 Trichodema viride는 30ppm까지 증식하였으나 그 이상의 농도에서는 증식이 억제되었다. 4. 물김치에 GFSE를 각각 50, 100ppm 첨가하여$5^{\circ}C$와 $20^{\circ}C$에서 저장하면서 pH변화를 확인한 결과 $5^{\circ}C$에서는 20일과 25일, $20^{\circ}C$에서는 17일과 20일까지 pH변동이 거의 없어 물김치의 보존기간을 연장시킬 수 있었다.
Applications of probiotics to shrimp ponds were carried out to determine their effects on water quality. Fermented solutions consisting of Bacillus spp. and Nitrosomonas spp. were applied to a 4 ha shrimp (Fenneropenaeus chinensis) pond from July to September, 2000. In the pond treated with probiotics, daily variations of DO and pH, and concentrations of DIN and DIP were lower than those in the ponds without probiotic treatment. Concentration of phytoplankton was less variable and the number of species was more variable in the probiotic-treated pond than those in the control pond. Variation of bacterial numbers and the number of Vibrio spp. were lower in the treated pond than those in the control pond. It is confirmed that the probiotics can be used to improve water quality of the shrimp ponds.
The bacteriolytic enzyme produced from Bacillus subtilis SH-1 was purified and characterized, and its molecular weight was determined. The bacteriolytic enzyme activity was increased about 66.5 times via purification with recovery yield of 18.5%. The optimum pH and temperature of this enzyme were 9.0 and 50$\circ$C. The enzyme was stable within a pH range of 6.0-10.0 and unstable above 60 . The molecular weight of the enzyme was estimated to be 23,000 dalton in a form of monomer with no other subunits. Effect of the enzyme on the lysis of bacteria engaged in food posion was tested. The lysis degree was below 31% against Gram negative bacteria and above 48% in Gram positive bacteria. The values higher than 73% were obtained against Vibrio sp. and Listeria sp. As the turbidity of dissolved peptidoglycan clecreases, the free amino group levels were increased. And, based on hydrolysis of casein, this enzyme was thought to be an endopeptidase.
Antimicrobial activity of the essential oil extracted from plants Artemisia princeps var. orientalis, Thuja orientalis and Chamaecyparis obtusa were tested against selected pathogenic bacteria and fungi of fish. At the concentrations above 500ppm, ingibitory effect of the oil of A. princeps var. orientalis was at its peak against Aeromonas hydrophila ATCC 14715, A. hydrophila CF-2, A. salmonicida ATCC 14174 and A. salmonicida EL-1 but the bacteria Edwardsiella tarda KBF-1, Vibrio anguillarum ATCC19264, V. ordalii ATCC33509 and Streptococcus sp. were insensitive. Likewise, the oil extract of T. orientalis showed the highest inhibitory activity against V. ordalii ATCC33509, E. tarda ECK-1, and E. tarda KBF-1 at 300ppm; however the activity was highest at 500ppm or A. hydrophila ATCC14715, A. hydrophila CF-2, A. salomonicida ATCC14174, A. salmonicida EL-1 and Streptococcus sp. SF-1. With increasing dose of C. obtusa oil, the inhibitory activity became more and more effective against A. hydrophila CF-2, A. salomonicida ATCC14174, E. tarda ECK-1 and Streptococcus sp. SF-1, but A. hydrophila ATCC14174, A. salmonicida EL-1, E. tarda KBF-1, V. anguillarum ATCC19264, V. ardalii ATCC33509 and gram positive bacteria (Streptococcus sp.) were somewhat resistant. A. princeps var. orientalis, T. orientalis and C. obtusa were also tested against Saprolegnia sp. at the oil concentrations of 10, 100, 500, 1,000, 1,500 and 2,000ppm. The inhibitory effect of the oil on the inhibit the mycelial growth of Saprolegnia sp. at 10ppm and completely inhibited at over 500ppm.
장염 패혈증균으로 알려진 Vibrio vulnificus는 비교적 최근에 알려진 호염성균으로 이 균이 잠복된 어패류를 생식하면 사람에게 패혈증을 일으키며 높은 사망률을 나타내고 있다. 또한 이 균은 주로 해양환경에 서식하며 수온이 높은 하절기에 발생되고 있다. 본 실험에서는 전남 해안지역에서 해수, 개펄, 수족관내의 어패류와 주방환경의 시료원에서 장염 패혈증균의 분리율과 해수와 개펄의 이화학적인 성상과 일반 미생물 수, Vibrio균 수, Coloform 세균수의 분포를 조사한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 즉 조사된 총 314건의 시료원 중에서 37.9%의 Vibrio 균종의 분리율을 보였으며 V. vulnificus가 7.1%, V parahemolyticus가 9.6%, V. alginolyticus가 12.4%, V. sp.가 8.9%가 나타났다. 또한 V. vulnificus의 시료원별 분리율은 해수에서 33.3% 개펄에서 55.6%, 수족관내 어패류에서 1.7%, 주방환경에서 6.3%로서 개펄에서 가장 높은 분리율을 보였다. 각 지역별 V. vulnificus의 분리율은 대략3.6%에서 11.4%의 범위를 가지고 있었으며 무안, 해남에서 10% 이상의 높은 분리율을 보였다. 그러나 지역별의 분리율 차이는 크게 인정되지 않는 경향이었다. 어패류에 있어서 V. vulnificus의 분리율은 1.7%였으며 주방환경에서는 6.3%였다. 어종별에 따른 차이는 인정할 수가 없었고 행주와 도마에서 높은 분리율을 보였다. 전남 각 지역별의 해수의 이화학적 성상은 염도가 $13.3{\sim}24.8%$, pH는 $7.64{\sim}8.36$, COD는 $0.8{\sim}12.6ppm$, 총인은 $0.003{\sim}0.175ppm$, 총질소량이 $0.219{\sim}1.634ppm$의 범위를 가지고 있었다. 개펄의 이화학적 성상은 총 유기물량이 $2.12{\sim}8.26%$, COD량이 $0.539{\sim}1.562ppm$, 총인은 $0.012{\sim}0.203ppm$, 총질소량이 $0.244{\sim}1.738ppm$의 범위로 나타났다. 한편 해수의 총세균수는 $4.5{\times}10^3{\sim}3.5{\times}10^5\;CFU/ml$, Vibrio 균수는 $1.8{\times}10^2{\sim}4.6{\times}10^3\;CFU/ml$, Coliform 세균수는 $1.9{\times}10^1{\times}3.7{\times}10^2\;CFU/100ml$이었으며, 개펄의 총 세균수는 $4.8{\times}10^3{\sim}5.2{\times}10^5\;CFU/ml$, Vibrio 균수는 $1.9{\times}10^2{\sim}8.4{\times}10^4\;CFU/ml$, Coliform 세균수는 $7.2{\times}10^1{\sim}9.9{\times}10^2\;CFU/100ml$으로 나타났다.
Kim, Su Kyoung;Kim, Myung Seok;Park, Myoung Ae;Kim, Su mi;Jang, In Kwon;Kim, Seok Ryel;Cho, Miyoung
환경생물
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제35권4호
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pp.461-467
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2017
Shrimps infected with WSSV(White Spot Syndrome Virus) generally exhibit white spots in their inner space of carapaces as an acute clinical sign. In an effort to identify the correlation between this acute clinical sign and the condition, the index factors (RNA/DNA concentration and ratio, trypsin activity) were analyzed. A total 580 farmed Fenneropenaeus chinensis and 130 Lithopenaeus vannamei were collected from western and southern fifteen outdoor ponds in Korea. The status of the white spot pathology was divided into four stages (stage 0, stage I, stage II, and stage III), in accordance with the clinical signs as to the size and area of white spots. A significant decrease in RNA concentration and RNA/DNA ratio for multi-infected fleshy prawn (WSSV and vibrio sp.) occurred during the stage III (the whole carapace is covered with a white spot). In particular, RNA/DNA ratio was significantly lower as $1.47{\pm}0.04$ than other groups. A similar trend was also found in the single infection (WSSV), but the decrease was less than the multi-infection. In the species comparison, both species were vulnerable to the multi-infection, but L. vannamei was more sensitive than F. chinensis(ANOVA, p<0.05): A significant decrease in RNA concentration and RNA/DNA ratio was first found in stage II for the former species, while it was found in stage III for the latter species. Trypsin activity was also showed a similar tendency with nucleic acid variation. Multi-infected shrimp showed drastically decrease of trypsin activity. According to the results, clinical signs of the white spot under carapace have an only physiological effect on shrimp if they covered entirely with white spots.
The Serranidae is high-quality fish species with good meat quality and is traded at high price, and is attracting attention in South Korea as a cultured species that creates high added value. However, the high-density fish farming for mass production increases the risk of mass mortality due to infectious diseases, leading to enormous economic losses. Therefore, in order to safely prevent and protect farmed fish from serious infectious diseases, it is necessary to conduct disease monitoring on a regular basis. In this study, Hyporthodus septemfasciatus, Epinephelus moara, and the hybrid longtooth grouper (E. moara ♀×E. lanceolatus ♂) were collected once a month from fish farm of Garorim and Aquabiotech Co., Ltd for a total of six months, from July to December 2023. We investigated infections of five species of bacterial diseases, including Flavobacterium columnare, six species of viral diseases, including LCDV (lymphocystis disease virus), and parasitic pathogens in grouper farms. As the result, Vibrio vulnificus and V. harveyi were detected in H. septemfasciatus in August, in the case of viral diseases, NNV was detected in H. septemfasciatus from July to August using RT-PCR or PCR. Finally, In the case of parasitic diseases, Tricodina sp. was detected in E. moara and the hybrid longtooth grouper from August to December.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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