• Archives of Pharmacal Research
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• 제16권2호
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• pp.155-157
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• 1993

DNA transfection conditions were investigated by calcium phosphate-DNA co-precipitation in SK-N-BE(2)C human neuroblastoma cells. The DNA plasmid of TH2400CAT was used in which rat tyrosine hydroxylase gene was inserted into chloramphenicol acetyltransferase reporter gent. The transfection efficiency was 25-30% and the method was simple and reproducible. So, the method will be a good tool for transient transfection analysis.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제17권11호
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• pp.640-647
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• 2016

형광 간섭 현상을 최소화시켜 상대적으로 민감한 측정이 가능한 aequorin기반 luminescence기술은 $G_{{\alpha}16}$ 단백질 도입을 통해 세포 내부의 칼슘 이동 신호를 감지하여 G 단백질 결합 수용체(G protein-coupled receptor, GPCR)의 기능 분석을 가능하게 하는 세포 기반 분석 기술로 수용체 및 G 단백질 유전자 전달의 최적화 과정이 필수적이다. 본 연구를 위해 corticotropin releasing factor receptor subtype 2(CRF2) 수용체를 모델 시스템으로 CRF2와 $G_{{\alpha}16}$ 단백질이 구축된 세 가지 안정화 세포주를 제작하였고, 이들을 이용한 서로 다른 세 가지 조건의 임시 발현 세포주에서 작용제(sauvagine)와 길항제(K41498)의 반응성을 분석하여 최적의 유전자 전달 방법을 도출하고자 하였다. 그 결과 sauvagine 및 K41498의 농도에 따른 반응에서 CRF2-$G_{{\alpha}16}$ 안정화 세포주가 임시 발현 세포주보다 10배 이상의 유효신호 비율을 나타내었고(z'=0.77) 임시 발현 세포주의 경우 $G_{{\alpha}16}$의 안정화 발현 이후에 CRF2를 전달하는 경우가 다른 임시 발현 조건보다 2배 이상 높은 효율을 보였다(z'=0.84). 따라서 임시 유전자 전달 기술을 GPCR 세포 기능 분석 시스템에 활용할 경우 $G_{{\alpha}16}$ 단백질에 대한 안정화 세포주를 우선적으로 구축하고, 목표하는 다양한 수용체들을 단계적으로 발현시키는 것이 최선의 방법이라 판단된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제6권4호
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• pp.581-589
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• 1993

A plasmid vector, $RSVLTR/{\beta}G2$, containing lacZ gene under the control of the RSVLTR promoter were transfected into chicken embryo fibroblasts by three different transfection methods. Calcium phosphate, lipsome and DEAE-dextran techniques were applied for transfection of chicken cells. A histochemical assay with X-gal was used as a simple method for screening transfected cells. Plasmid $RSVLTR/{\beta}G2$ was expressed proficiently in the chicken embryo fibroblast. Calcium phosphate-DNA precipitate transfection resulted in the highest efficiency for transient expression of $RSVLTR/{\beta}G2$. Transfected cells formed colonies on the 9th day of incubation indicating stable transformation of the inserted plasmid.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권12호
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• pp.2056-2060
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• 2007

Transcription factor GATA-3 is the critical transcription factor for Th2 cell differentiation. In spite of its importance in Th2 cell differentiation, the molecular mechanism for its action in Th2 differentiation is poorly understood. Previous studies have suggested that GATA-3 may be involved in the chromatin remodeling in the Th2 cytokine locus. To determine whether GATA-3 exerts its effect on its target sites in the extrachromosomal status, cell transfection assay was performed. In this assay, 800 bp IL4 promoter-luciferase constructs linked with GATA-3 target sites were transfected into the M12 B cell line, D10 mouse Th2 cell lines, and human T lymphoma Jurkat cell lines with or without the GATA-3 expression vector. The GATA-3 effects on its target sites were minimal in the extrachromosomal status, supporting the previous propositions that GATA-3 functions at the chromatin level by remodeling chromatin structure.

• 한국양식학회지
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• 제11권4호
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• pp.457-463
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• 1998

미꾸라지(Misgrunus mizolepis)의 DNA로부터 클론된 핵기질 부착부위(MAR)를 포함하는 발현벡터인 pUC19N6-luc 벡터를 구성하였다. 이를 물고기 CHSE-214 세포주에 electroporation으로 transfection 시킨 후 유전자의 발현율, 벡터의 copy 수 및 염색체내 삽입 양상을 luciferase 활성도 분석, PCR 및 Southern blotting를 통해 분석하였다. 대조군 발현벡터에 luciferase 유전자는 전형적인 transient 발현양상을 나타내는데 비해, 미꾸라지 MAR가 포함된 pUC19N6-luc 벡터의 luciferase 유전자의 발현은 transfection 후 5일째부터 급격히 증가하는 양상을 보였다. Transfection된 CHSE-214 세포내에서 pUC19N6-luc 벡터는 대조군 벡터에 비해 높은 copy 수를 유지하였으나, 염색체내 삽입은 거의 비슷한 시간에 일어났다. 결론적으로 transfection 후 시간경과에 따른 pUC19N6-luc 벡터내의 luciferase 유전자의 발현 증가에 미치는 MAR의 효과는 벡터 copy수 증가 때문이 아니라, 염색체내 삽입후 형성되는 전사활성구조의 형성에 기인하는 것으로 판단된다.

• 대한의생명과학회지
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• 제10권2호
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• pp.137-142
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• 2004

The peroxisome proliferator-activated receptor $\gamma$ (PPAR${\gamma}$) is the molecular target for a class of drugs, the antidiabetic thiazolidnediones (TZDs). The heterodimer of PPAR${\gamma}$ with retinoid X receptor (RXR) plays a central role in the regulation of adipogenesis and insulin sensitization. We synthesized two chemicals, DANA87 and DANA88, sharing structural characteristics with TZDs. Given this structural similarity, it was hypothesized that DANA87 and DANA88 may act as PPAR$\gamma$ ligands. In transient transfection assays, DANA87 and DANA88 caused slight increases in the endogenous expression of a luciferase reporter gene containing the PPAR responsive element in 3T3-L1 preadipocytes. However, DANA87 and DANA88 significantly inhibited troglitazone-induced reporter gene activation when cells were treated with a combination of DANA87 or DANA 88 and troglitazone, one of the TZDs that activate PPAR$\gamma$. These results suggest that DANA87 and DANA88 are not only weak agonists of PPAR${\gamma}$ transactivation, but also competitively antagonize troglitazone-induced PPAR$\gamma$ reporter activity.

• Journal of Acupuncture Research
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• 제26권3호
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• pp.39-48
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• 2009

목적 : 이 연구는 봉약침의 주요성분인 멜리틴이 NF-${\kappa}$B의 활성억제를 통하여 세포자멸사를 유도하고, 전립선 암세포주인 DU-145 세포의 성장을 억제하는지를 확인하고 멜리틴의 NF-${\kappa}$B 활성억제기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : 멜리틴을 처리한 후 DU-145의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-1 assay를 시행하였고, 세포자멸 사의 관찰에는 DAPI stairung assay를 통한 세포형태관찰을 시행하였으며, 염증관련유전자 발현 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고, 세포자멸사와 연관된 NF-${\kappa}$B의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA와 luciferase assay를 시행하였으며, DU-145에서 멜리틴과 NF-${\kappa}$B의 상호작용을 관찰하기 위해 transient transfection assay를 시행 시 세포생존율과 NF-${\kappa}$B의 활성 변동을 측정하였다. 결과 : DU-145 세포에 멜리틴을 처리한 후, 전립선암세포의 성장, 세포자멸사의 유발, 염중관련유전자 발현 및 NF-${\kappa}$B의 활성, NF-${\kappa}$B의 p50 치환 후 NF-${\kappa}$B의 활성과 DU-145 세포 증식에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 세포자멸사가 유도되어 세포성장이 억제되었다. 2. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 염증관련유전자 발현 및 NF-${\kappa}$B의 활성에 유의한 감소를 나타내었다. 3. DU-145 세포에서 NF-${\kappa}$B의 p50와 IKK들을 치환하여 작용기를 없애고 멜리틴을 처리하였을 경우에도 세포활성 및 NF-${\kappa}$B의 활성의 유의한 감소를 나타내었다.

• Journal of Acupuncture Research
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• 제27권3호
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• pp.1-13
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• 2010

목적 : 이 연구는 봉약침의 봉독과 그 주요성분인 멜리틴이 NF-${\kappa}B$의 활성억제와 세포자멸사 관련 단백질의 발현 조절을 통하여 세포자멸사를 유도함으로써 전립선 암세포주인 PC-3 세포의 성장을 억제하는지를 확인하고 해당 기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : 봉독이나 멜리틴을 처리한 후 PC-3의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-1 assay, CCK-8 assay를 시행하였고, 세포자멸사 조절단백질의 변동 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고, 세포자멸사와 연관된 NF-${\kappa}B$의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA를 시행하였으며, PC-3에서 봉독이나 멜리틴과 NF-${\kappa}B$의 상호작용을 관찰하기 위해 transient transfection assay를 시행하여 세포생존율과 NF-${\kappa}B$의 활성 변동을 측정하였다. 결과 : PC-3 세포에 봉독이나 멜리틴을 처리한 후, 전립선암세포의 성장, 세포자멸사의 유발, 세포자멸사 관련 단백질의 발현, NF-${\kappa}B$의 활성, NF-${\kappa}B$의 p50, $IKK{\alpha}$, $IKK{\beta}$ 치환 후 NF-${\kappa}B$의 활성과 PC-3 세포 증식에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. PC-3 세포에서 봉독이나 멜리틴을 처리한 후 세포자멸사가 유도되어 세포성장이 억제되었고, 세포자멸사 관련 단백질 중 분리된 PARP, caspase-3, -9는 유의한 증가를, Bcl-2, XIAP, cXIAP2는 유의한 감소를 나타내었다. 2. PC-3 세포에서 봉독이나 멜리틴을 처리한 후 NF-${\kappa}B$의 활성은 유의한 감소를 나타내었다. 3. PC-3 세포에서 NF-${\kappa}B$의 p50, $IKK{\alpha}$, $IKK{\beta}$를 치환하여 작용기를 없애고 봉독이나 멜리틴을 처리하였을 경우에도 NF-${\kappa}B$의 활성이 유의한 감소를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 봉독이나 멜리틴이 NF-${\kappa}B$의 활성 억제를 통하여 인간 전립선암세포주인 PC-3의 세포자멸사를 유발함으로써 증식억제 효과가 있음을 입증한 것으로, 전립선암의 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 도움이 될 것으로 기대된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 2003년도 Annual Meeting of KSAP : International Symposium on Pharmaceutical and Biomedical Sciences on Obesity
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• pp.89-89
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• 2003

Exposure of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) causes a variety of biological and toxicology effects, most of which are mediated by aryl hydrocarbon receptor (AhR). The ligand-bound AhR as a heterodimer with AhR nuclear translocator (ARNT) binds to its specific DNA recognition site, the dioxin-responsive element (DRE), and it results in increased transcription of CYP1A1 gene. Retinoic acid (RA) regulates the transcription of various genes for several essential functions through binding to two classes of nuclear receptors, the retinoic acid receptor (RAR) and retinoid X receptor (RXR). Constitutive androstane receptor (CAR) also regulates the transcription of gene. In this study, we have examined how RAR, RXR and CAR regulated CYP1A1 in rainbow trout hepatoma cell (RTH 149) using luciferase reporter gene assay system. We did transient transfection with CYP1A1 luciferase reporter gene and treated with TCDD, all-trans RA, 9-cis RA and phenobarbital. Treatment of all-trans RA, 9-cis RA or phenobarbital decreased the TCDD induced transcription of CYP1Al. When we did transient cotransfection with CYP1A1 luciferase reporter gene and RXR, as increase of RXR concentration, the TCDD induced transcription of CYP1A1 was decreased. Transfection with CAR also decreased the TCDD induced transcription of CYP1A1 in RTH 149 cells.

• 한국환경독성학회:학술대회논문집
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• 한국환경독성학회 2003년도 추계국제학술대회
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• pp.179-179
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• 2003

Exposure of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) causes a variety of biological and toxicology effects, most of which are mediated by aryl hydrocarbon receptor (AhR). The ligand-bound AhR as a heterodimer with AhR nuclear translocator (ARNT) binds to its specific DNA recognition site, the dioxin-responsive element (DRE), and it results in increased transcription of CYP1A1 gene. Retinoic acid (RA) regulates the transcription of various genes for several essential functions through binding to two classes of nuclear receptors, the retinoic acid receptor (RAR) and retinoid X receptor (RXR). Constitutive androstane receptor (CAR) also regulates the transcription of gene. In this study, we have examined how RAR, RXR and CAR regulated CYP1A1 in rainbow trout hepatoma cell (RTH 149) using luciferase reporter gene assay system. We did transient transfection with CYP1A1 luciferase reporter gene and treated with TCDD, all-trans RA, 9-cis RA and phenobarbital. Treatment of all-trans RA, 9-cis RA or phenobarbital decreased the TCDD induced transcription of CYP1A1. When we did transient cotransfection with CYP1A1 luciferase reporter gene and RXR, as increase of RXR concentration, the TCDD induced transcription of CYP1A1 was decreased. Transfection with CAR also decreased the TCDD induced transcription of CYP1A1 in RTH 149 cells.