DNA double-strand break (DSB) is a serious treat for the cells including mutations, chromosome rearrangements, and even cell death if not repaired or misrepaired. Ku heterodimer regulatory DNA binding subunits (Ku70/Ku80) bound to double strand DNA breaks are able to interact with 470-kDa DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs), and the interaction is essential for DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) activity. The Ku80 mutants were designed to bind Ku70 but not DNA end binding activity and the peptides were treated in breast cancer cells for co-therapy strategy to see whether the targeted inhibition of DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) activity sensitized breast cancer cells to ionizing irradiation or chemotherapy drug to develop a treatment of breast tumors by targeting proteins involved in damage-signaling pathway and/or DNA repair. We designed domains of Ku80 mutants, 26 residues of amino acids (HN-26) as a control peptide or 38 (HNI-38) residues of amino acids which contain domains of the membrane-translocation hydrophobic signal sequence and the nuclear localization sequence, but HNI-38 has additional twelve residues of peptide inhibitor region. We observed that the synthesized peptide (HNI-38) prevented DNA-PKcs from binding to Ku70/Ku80, resulting in inactivation of DNA-PK complex activity in breast cancer cells (MDA-465 and MDA-468). Consequently, the peptide treated cells exhibited poor to no DNA repair, and became highly sensitive to irradiation or chemotherapy drugs. The growth of breast cancer cells was also inhibited. These results demonstrate the possibility of synthetic peptide to apply breast cancer therapy to induce apoptosis of cancer cells.
Objective: To determine whether silence of $PKC-{\alpha}$ expression by small interference RNA (siRNA) might regulate MDR1 expression and reverse chemoresistance of ovarian cancer. Methods: We measured gene and protein expression of MDR1 and $PKC-{\alpha}$ in ovarian cancer cells and assessed their correlation with cell drug resistance. We also examined whether blocking $PKC-{\alpha}$ by RNA interference (RNAi) affected MDR1 expression and reversed drug resistance in drug sensitivity tests. Results: The drug resistance cell lines, OV1228/DDP and OV1228/Taxol, had higher gene and protein expression of MDR1 and $PKC-{\alpha}$ than their counterpart sensitive cell line, OV1228. SiRNA depressed $PKC-{\alpha}$ gene protein expression, as well as MDR1 and protein expression and improved the drug sensitivity in OV1228/DDP and OV1228/Taxol cells. Conclusion: These results indicated that decreasing $PKC-{\alpha}$ expression with siRNA might be an effective method to improve drug sensitivity in drug resistant cells with elevated levels of $PKC-{\alpha}$ and MDR1. A new siRNA-based therapeutic strategy targeting $PKC-{\alpha}$ gene could be designed to overcome the chemoresistance of ovarian cancer.
Purpose: Protein tyrosine kinase(PTK), protein kinase C(PKC), oxidase, as a mediator, have been known to take a role in signal transduction pathway of angiogenesis. The authors confirmed that PKC is the most noticeable mediator for abnormal proliferation of vascular endothelial cells through in vitro study model using the inhibitors, targeting the formation of three co-enzymes. In this study, we would investigate which isoform of PKC play an important role in abnormal angiogenesis of vascular endothelial cell. Methods: In 96 well plates, $10^4$ HUVECs(human umbilical vein endothelial cells) were evenly distributed. Two groups were established; the control group without administration of DMH(1,2-dimethylhydrazine) and the DMH group with administration of $7.5{\times}10^{-9}M$ DMH. RNA was extracted from vascular endothelial cell of each group and expression of the PKC isoform was analyzed by RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction) method. Results: RT-PCR analysis showed that $PKC{\alpha}$, $-{\beta}I$, $-{\beta}II$, $-{\eta}$, $-{\mu}$ and $-{\iota}$ were expressed in vascular endothelial cells of each group. DMH incresed the expression of $PKC{\alpha}$ and $PKC{\mu}$, and decreased $PKC{\beta}I$, $PKC{\beta}II$ expression dominantly. Conclusion: Based on the result of this study, it was suggested that $PKC{\alpha}$ and $PKC{\mu}$ may have significant role in abnormal proliferation of vascular endothelial cell.
HMGN5 is a typical member of the HMGN (high mobility group nucleosome-binding protein) family which may function as a nucleosomal binding and transcriptional activating protein. Overexpression of HMGN5 has been observed in several human tumors but its role in tumorigenesis has not been fully clarified. To investigate its significance for human lung cancer progression, we successfully constructed a shRNA expression lentiviral vector in which sense and antisense sequences targeting the human HMGN5 were linked with a 9-nucleotide loop. Inhibitory effects of siRNA on endogenous HMGN5 gene expression and protein synthesis were demonstrated via real-time RT-PCR and western blotting. We found HMGN5 silencing to significantly inhibit A549 and H1299 cell proliferation assessed by MTT, BrdU incorporation and colony formation assays. Furthermore, flow cytometry analysis showed that specific knockdown of HMGN5 slowed down the cell cycle at the G0/G1 phase and decreased the populations of A549 and H1299 cells at the S and G2/M phases. Taken together, these results suggest that HMGN5 is directly involved in regulation cell proliferation in A549 and H1299 cells by influencing signaling pathways involved in cell cycle progression. Thus, our finding suggests that targeting HMGN5 may be an effective strategy for human lung cancer treatment.
Recent studies have indicated that microRNAs (miRNAs) play an important role in hepatocellular carcinoma (HCC) progression. In this study, we showed that miR-766-3p was decreased in approximately 72% of HCC tissues and cell lines, and its low expression level was significantly correlated with tumour size, TNM stage, metastasis, and poor prognosis in HCC. Ectopic miR-766-3p expression inhibited HCC cell proliferation, colony formation, migration and invasion. In addition, we showed that miR-766-3p repressed Wnt3a expression. A luciferase reporter assay revealed that Wnt3a was a direct target of miR-766-3p, and an inverse correlation between miR-766-3p and Wnt3a expression was observed. Moreover, Wnt3a up-regulation reversed the effects of miR766-3p on HCC progression. In addition, our study showed that miR-766-3p up-regulation decreased the nuclear ${\beta}-catenin$ level and expression of Wnt targets (TCF1 and Survivin) and reduced the level of MAP protein regulator of cytokinesis 1 (PRC1). However, these effects of miR-766-3p were reversed by Wnt3a up-regulation. In addition, PRC1 upregulation increased the nuclear ${\beta}-catenin$ level and protein expression of TCF1 and Survivin. iCRT3, which disrupts the ${\beta}-catenin-TCF4$ interaction, repressed the TCF1, Survivin and PRC1 protein levels. Taken together, our results suggest that miR-766-3p down-regulation promotes HCC cell progression, probably by targeting the Wnt3a/PRC1 pathway, and miR-766-3p may serve as a potential therapeutic target in HCC.
Mesenchymal stem cells (MSCs) are known to differentiate into multiple lineages, making neurogenic differentiation an important target in the clinical field. In the present study, we induced the neurogenic differentiation of cells using histone deacetylase (HDAC) inhibitors and studied their mechanisms for further differentiation in vitro. We treated cells with the HDAC inhibitors, MS-275 and NaB; and found that the cells had neuron-like features such as distinct bipolar or multipolar morphologies with branched processes. The mRNA expressions encoding for NEFL, MAP2, TUJ1, OLIG2, and SYT was significantly increased following HDAC inhibitors treatment compared to without HDAC inhibitors; high protein levels of MAP2 and Tuj1 were detected by immunofluorescence staining. We examined the mechanisms of differentiation and found that the Wnt signaling pathway and downstream mitogen-activate protein kinase were involved in neurogenic differentiation of MSCs. Importantly, Wnt4, Wnt5a/b, and Wnt11 protein levels were highly increased after treatment with NaB; signals were activated through the regulation of Dvl2 and Dvl3. Interestingly, NaB treatment increased the levels of JNK and upregulated JNK phosphorylation. After MS-275 treatment, Wnt protein levels were decreased and GSK-3β was phosphorylated. In this cell, HDAC inhibitors controlled the non-canonical Wnt expression by activating JNK phosphorylation and the canonical Wnt signaling by targeting GSK-3β.
Tyrosine phosphorylation plays an important role in regulating human physiological and pathological processes. Functional stabilization of tyrosine phosphorylation largely contributes to the balanced, coordinated regulation of protein tyrosine kinases (PTKs) and protein tyrosine phosphatases (PTPs). Research has revealed PTPs play an important suppressive role in carcinogenesis and progression by reversing oncoprotein functions. Receptor-type protein tyrosine phosphatase O (PTPRO) as one member of the PTPs family has also been identified to have some roles in tumor development. Some reports have shown PTPRO over-expression in tumors can not only inhibit the frequency of tumor cell division and induce tumor cell death, but also suppress migration. However, the tumor-suppression mechanisms are very complex and understanding is incomplete, which in some degree blocks the further development of PTPRO. Hence, in order to resolve this problem, we here have summarized research findings to draw meaningful conclusions. We found tumor-suppression mechanisms of PTPRO to be diverse, such as controlling G0/G1 of the tumor cell proliferation cycle, inhibiting substrate phosphorylation, down-regulating transcription activators and other activities. In clinical anticancer efforts, expression level of PTPRO in tumors can not only serve as a biomarker to monitor the prognosis of patients, but act as an epigenetic biomarker for noninvasive diagnosis. In addition, the re-activation of PTPRO in tumor tissues, not only can induce tumor volume reduction, but also enhance the susceptibility to chemotherapy drugs. So, we can propose that these research findings of PTPRO will not only support new study ideas and directions for other tumor-suppressors, importantly, but also supply a theoretical basis for researching new molecular targeting agents in the future.
Protein tyrosine kinase(PTK), protein kinase C(PKC), oxidase, as a mediator, take a significant role in signal transduction pathway of angiogenesis. The authors utilized the inhibitors, targeting the formation of three co-enzyme in signal transduction pathway in order to quantify the suppression of abnormal vascular endothelial cell proliferation induced by DMH, to compare the level suppression in each up-regulated growth factors, CTGF, CYR61, $ITG{\beta}1$, FHL2, and to identify the relationship between abnormal cell proliferation and signal transduction pathway. Five groups were established; Control group, Group of DMH, Group of DMH-mixed Herbimycin, inhibitor of protein tyrosine kinase, Group of DMH-mixed Calphostin C, inhibitor of protein kinase C, Group Of Dmh-Mixed 10U Catalase, Inhibitor Of oxidase. The rise of vascular endothelial cell was compared by MTT assay, and four growth factors were analysed with RT-PCR method, at pre-administration, 4, 8, 12, and 24 hours after administration. In comparison of abnormal proliferation of vascular endothelial cell induced by DMH, suppression was noticed in Herbimycin and Calphostin C group, and Calphostin C group revealed higher suppression effect. Nevertheless, Catalase group did not have any suppression. In manifestation of four growth factors, Herbimycin and Calphostin C group presented similar manifestation with control group, except in $ITG{\beta}$. Catalse group had similar manifestation with DMH group in all four growth factors. Abnormal proliferation of vascular endothelial cell induced by DMH have a direct relationship with PTK and PKC, more specifically to PKC. Oxidase was confirmed not to have any relevance.
Minaeian, Sara;Rahbarizadeh, Fatemeh;Zarkesh-Esfahani, Sayyed Hamid;Ahmadvand, Davoud;Broom, Oliver Jay
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제22권5호
/
pp.721-728
/
2012
The human papillomavirus (HPV) is the main cause of cervical cancer in developing countries. Rapid diagnosis and initiation of treatment of the HPV infection are critical. Various methods have been employed to reduce the immunogenicity of antibodies targeting HPV serotypes. Nanobodies are the smallest fragments of naturally occurring single-domain antibodies with their antigen-binding site compromised into a single domain. Nanobodies have remarkable properties such as high stability, solubility, and high homology to the human VH3 domain. In this study, a phagemid library was employed to enrich for nanobodies against the L1 protein of the human papilloma virus. Binding reactivity of the selected clones was evaluated using phage enzyme-linked immunosorbent assay (phage-ELISA). Finally, two nanobodies (sm5 and sm8) with the best reactivity against the Gardasil vaccine and the purified HPV-16 L1 protein were expressed and purified using a $Ni^+$-NTA column. The accuracy of expression and purification of the nanobodies was confirmed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting assays. In vitro studies demonstrated that neutralization was achieved by the selected nanobodies. The ease of generation and unique features of these molecules make nanobodies promising molecules for the new generation of HPV diagnosis and therapy.
세포기질에 존재하는 많은 종류의 단백질들은 N-말단에 존재하는 짧은 펩타이드들에 의해서 trans-golgi network(TGN)의 세포질쪽 막에 타기팅될때 중요한 역할을 수행한다고 보고되고 있다. 본 연구실에서도 이전에 바다달팽이인 군소에서 클로닝된 phosphodiesterase 4의 long-form의 경우 N-말단에 존재하는 20개의 아미노산 서열만으로도 충분히 HEK293T세포의 TGN의 세포질막에 타기팅 되게 하며, 이 펩타이드가 sulfatide와 PI4P에 결합성이 있다는 사실을 in vitro에서 확인하였다. 그래서, 본 연구에서는 sulfatide결합성과 TGN막 타기팅과의 연관성을 연구하고자 하였다. 이를 위해 우선 이전 문헌을 통해 sulfatide결합 펩타이드를 찾았고, 이를 GFP단백질과 융합하여 재조합 단백질(mHSBP-EGFP)을 만들어 세포내 타기팅을 실험해 보았다. 이러한 연구를 수행한 결과, mHSBP-EGFP가 HEK293T세포에서 TGN에 타기팅 되고, sulfatide결합이 망가진 돌연변이는 타기팅이 사라짐을 확인하였다. 또한, mHSBP-EGFP가 TGN에 타기팅 되는 것은 억제제인 antimycin A와 PAO와 adenosine에 의해 억제됨을 확인할 수 있었다. 이러한 사실을 통해, PAO와 adenosine에 민감한 인산화효소들, 그중에 PI4KII의 활성이 mHSBP-EGFP를 TGN으로 위치하게 하는데 중요한 역할을 수행한다고 추론할 수 있다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.