To evaluate the effect of antioxidant on the cytotoxicity induced by oxidative stress of reactive oxygen species (ROS) in cultured human skin melanocytes, colorimeric assay of XTT and tyrosinase activity assay were adopted after human skin melanocytes were preincubated for 2 hours in the media containing various concentrations of superoxide dismutase (SOD) before the treatment of hydrogen peroxide. Light microscopic study was carried out in same cultures. The results of this study were as follows 1. Cell viability of human skin melanocytes was significantly decreased by 30 and $40{\mu}M$ of hydrogen peroxide($H_2O_2$), respectively. 2. XTT50 was determined at $30{\mu}M$ after human skin melanocytes were treated with $10{\sim}40{\mu}M$ of hydrogen peroxide for 6 hours. 3. The cell viability of cultured human skin melanocytes pretreated with SOD was increased than that of cultured human skin melanocytes treated with $H_2O_2$ dose-dependently. 4. In tyrosinase activity of human skin melanocytes, the cell treated with SOD showed brown stain compared with $H_2O_2$ treated cells, dark stain. 5. In light microscopy, cultured human skin melanocytes exposed to $H_2O_2$ showed morphological changes such as the decreased cell number and cytoplasmic processes, compared with control. 6. In light microscopy, cultured human skin melanocytes pretreated with SOD showed the increase of cell number and cytoplasmic processes compared with $H_2O_2-treated$ group. From these results, it is suggested that oxidative stress of ROS such as $H_2O_2$ has cytotoxicity by showing the decreased cell viability, the increased tyrosinase activity and mophological changes of the decreased cell number and cytoplasmic processes. While, antioxidant like SOD was effective in the prevention of oxidative stress-mediated cytotoxicity by the increased cell viability, decreased tyrosinase activity and the protection of degenerative morphological changes in cultured human skin melanocytes.
The superoxide anion radical$(O_2)$ poses a threat to macromocules and cell organelles of the living cells. This toxicity damage to all groups of proteins results in loss of enzyme function concerned with metabolism and ion transport, and peroxidation of unsaturated fatty acids and cholesterol results in a change of permeability characteristics of the membrane, and oxidative of nucleic acids results in genomic damage and thereby cause mutation, potential carcinogenesis and somatic damage that produce cellular aging Superoxide dismutase(SOD) has received substantial attention as a potential therapeutic agent. It has been investigated as a possible agent for the prevention of ontogenesis, the reduction of cytotoxic effect of anticancer drugs, and protection against damage in ischemic tissue. It is suggest that $O_2$ is concerned with cellular aging, thereafter we need to investigate herb that activated to SOD.
Expression of human Cu.Zn-superoxide dismutase (SOD) with activity comparable to human erythrocyte enzyme was achieved in E. coli B21(DE3) by using the pET-17b expression vector containing a T7 promoter. Recombinant human SOD was found in the cytosol of disrupted bacterial cells and represented > 25% of the total bacterial proteins. The protein produced by the E. coli cells was purified using a combination of ammonium sulfate precipitation, Sephacryl S-100 gel filtration and DEAE-Sephacel ion exchange chromatography. The recombinant Cu,Zn-SOD and human erythrocyte enzyme were compared using dismutation activity, SDS-PAGE and immunoblotting analysis. The mass of the subunits was determined to be 15,809 by using a electrospray mass spectrometer. The copper specific chelator. diethyldithiocarbamate (DOC) reacted with the recombinant Cu,Zn-SOD. At $50{\mu}M$ and $100{\mu}M$ concentrations of DOC, the dismutation activity was not inhibited for one hour but gradually reduced after one hour. This result suggests that the reaction of DOC with the enzyme occurred in two distinct phases (phase I and phase II). During phase I of this reaction, one DOC reacted with the copper center, with retention of the dismutation activity while the second DOC displaced the copper, with a loss of activity in phase II.
A human Cu, Zn-superoxide dismutase (Cu, Zn-SOD) was fused with a Tat PTD of HIV-1 to produce a novel anti-aging ingredient, Tat-SOD for cosmeceuticals. Test of stability and evaluation of transduction efficacy and enzymatic activity suggest Tat-SOD is an effective active ingredient for anti-aging treatment.
본 연구에서는 강력한 항산화제로 알려진 셀레늄의 방사선방호효과를 연구하였다. 렛드에 셀레늄을 14일간 경구투여 후 10 Gy의 방사선을 전신조사하였다. 그리고 1일, 3.5일, 7일, 21일 후에 혈구 성분 및 SOD(Superoxide Dismutase)와 소장의 변화를 관찰하였다. 방사선조사군에 비해 셀레늄 투여 후 방사선조사군에서 조혈면역계의 손상을 경감시키는 유의한 방호 효과가 있었다(p<0.05). 그리고 셀레늄이 항산화 효소인 Superoxide Dismutase(SOD)의 활성을 증가시키는 유효한 성분이며, 방사선 조사에 의한 소장움 세포의 apoptosis 발현을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 이 결과를 바탕으로 셀레늄은 방사선으로부터 생명체를 보호하는 필수 성분이라 생각한다.
Park, Myoung-Ryoul;Ryu, Sang-Soo;Yoo, Nam-Hee;Yu, Chang-Yeon;Yun, Song-Joong
한국약용작물학회지
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제13권5호
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pp.270-275
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2005
Superoxide dismutases (SOD) are metalloenzymes that convert $O_2^-\;to\;H_2O_2$. Rehmannia glutinosa is highly tolerant to paraquat-induced oxidative stress. The primary objective of this study was to characterize regulation of SOD gene expression in R. glutinosa in response to oxidative stresses and hormones. A full-length putative SOD clone (RgCu-ZnSOD1) was isolated from the leaf cDNA library of R. glutinosa using an expressed sequence tag clone as a probe. RgCu-ZnSOD1 cDNA is 777 bp in length and contains an open reading frame for a polypeptide consisted of 152 amino acid residues. The deduced amino acid sequence of the clone shows highest sequence similarity to the cytosolic Cu-ZnSODs. The two to three major bands with several minor ones on the Southern blots indicate that RgCu-ZnSOD1 is a member of a small multi-gene family. RgCuZnSOD1 mRNA was constitutively expressed in the leaf, flower and root. The expression of RgCu-ZnSOD1 mRNA was increased about 20% by wounding and paraquat, but decreased over 50% by ethylene and $GA_3$. This result indicates that the RgCu-ZnSOD1 expression is regulated differentially by different stresses and phytohormones at the transcription level. The RgCu-ZnSOD1 sequence and information on its regulation will be useful in investigating the role of SOD in the paraquat tolerance of R. glutinosa.
The amounts of ascorbic acid in chloroplasts treated with light and light+paraquat (PQ) were reduced by 81 and 82% of initial level, respectively at 24 hr at incubation. And those treated with dark and dark+PQ were decreased by W and 55% of the original level, respectively. Malondialdehyde (MDA) contents at 24 hr of dark and dark+PQ treatment were increased by 6 and 31% of the initial level, respectively. When chloroplasts were treated with light and light+PQ, MDA contents after 24 hr were increased by 88 and 146% of the initial level, respectively. SOD activities treated with light and light+PQ were increased by 10 and 20% of the initial level, respectively for 3 hr and thereafter reduced by 46 and 49% of the original level, respectively at 24 hr. However, the SOD activities treated with dark and dark+PQ were decreased by 37 and 30% of the initial level, respectively. It is considered that PQ triggers the oxidation of ascorbic acid, the induction of lipid peroxidation and the inactivation of SOD under light so that PQ has inhibitors effect on the pathway of plant metabolism. Key word: ascorbic acid, malondialdehyde, superoxide dismutase, paraquat, lipid peroxidation.
경남 김해에서 수확되는 부추의 가공에 기초자료로 활용하기 위하여 초벌 2벌, 3벌, 4벌, 5벌에 재배되는 부추의 성분들을 분석하였다. 부추의 엽록소 함량은 2벌 762.54, 3벌 775.09, 4벌 763.71, 5벌 798.47mg%로 5벌에서 가장 많이 함유되어 있었다. 무기질 함량은 초벌 부추에서 철, 칼륨, 구리의 함량은 각 10.61, 627.13, 0.14mg%로써 가장 높았으며 수확횟수가 증가함에 따라 감소하였고 칼슘, 망간, 인, 아연, 나트륨의 함량은 각 117.34, 1.27, 92.61, 0.73, 21.52 mg%로 5벌에서 가장 높은 간을 나타내었다. 중금속오염을 나타내는 납은 검출되지 않았다. SOD 유사활성은 2벌 1600, 3벌 1357.32, 4벌 1317.65, 5벌 1291.71unit/g으로 2벌에서 가장 높은 값을 나타내었으며 수확이 거듭될수록 활성이 낮아지는 경향을 보였다.
Flavonoids are class of polyphenolic compounds widely distributed in the plant kingdom, which display a variety of biological activities, including antiviral, antithrombotic, antiinflammatory, antihistaminic, antioxidant and free-radica 1 scavenging abilities. The antioxidant enzyme (AOE) system plays an important role in the defense against oxidative stress insults. To determine whether flavonoid, myricetin can exert antioxidative effects not only directly by modulating the AOE system but also scavenging free radical, we investigated the influence of the flavonoid myricetin on cell viability, different antioxidant enzyme activities, ROS level and the expression of different antioxidant emzyme in B16F10 murine melanoma cells. Myricetin in a concentration range from 6.25 to $50\;{\mu}M$ decreased superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) enzyme activities, but catalase (CAT) activity was increased. In the myricetin-treated group, ROS levels were decreased dose-dependently. Antioxidant enzyme expression was measured by RT-PCR. Myricetin treatment of B16F10 cells increased catalase expression. Expression levels of copper zinc superoxide dismutase (CuZn SOD) were not affected by exposure of myricetin. Manganese superoxide dismutase (Mn SOD) and GPx expression levels decreased slightly after myricetin treatment. In conclusion, the antioxidant capacity of myricetin was due to CAT and free-radical scavenging.
두툽상어 (Scyliorhinus torazame)부터 분리된 항산화 효소 Cu,Zn-superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD 또는 SOD1)의 핵산 염기서열 및 추정 아미노산 서열을 대상으로 분자 계통학적 분석을 실시하였다. 종래 알려져 있는 척추동물의 Cu,Zn-SOD 서열들을 포함하여 neighbor-joining (NJ), maximum parsimony (MP), maximum likelihood (ML) 및 Bayesian 분석 등을 포함한 다양한 계통 분석을 수행하였으며, 이를 통해 연골어류인 본 어종의 척추동물 분류군 내에서의 계통적 위치를 추정하고자 하였다. 다양한 분자 계통수로부터 얻어진 대부분의 consensus tree들에서 분석에 사용한 분류군들은 종래 알려진 분류학적 위치와 비교적 잘 일치하였고, 이중 두툽상어는 같은 연골어류종인 blue shark와 높은 유연관계를 나타내면서 보다 진화한 경골어류들과는 확연히 구분되는 분지를 형성하였다. 특히 핵산 염기서열을 바탕으로 한 neighbor-joining 분석에서 두툽상어는 경골어류와 양막동물에 비해 보다 원시형태의 척추동물 Cu,Zn-SOD 유전자의 한 형태를 보유하고 있는 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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