차가버섯의 균사체 생장과 세포외 다당체 생산을 위한 최적의 배양조건을 조사하고, 세포내 외 다당체의 항보체 활성과 대식세포의 lysosomal enzyme 활성을 관찰하였다. 균사체 생장과 세포외 다당체 생산을 위한 최적 pH, 온도, 및 교반속도는 각각 5.5, $25^{\circ}C$, 150 rpm으로 나타났으며, 배양기간은 11일째 최대 균사체 생장(10.89 g/l)과 세포외다당체 생산(1.25 g/l)을 보였다. 항보체 활성은 세포내 외 다당체의 처리 농도가 높을수록 활성이 증가함을 보였고, 대식세포의 lysosomal enzyme 활성은 $100{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군에 비해 세포내 다당체는 약 2.2배, 세포외 다당체는 약 2배 정도 증가하였다.
잔나비불로초 배양에 적합한 생물반응기를 선발하기 위하여 4종류의 생물반응기 형태별 균사체 생장특성과 다당체 생산량을 비교하였다. 균사체 생산량은 기포통기형 생물반응기($7\;g/{\ell}$) > 풍선형 생물반응기($6.2\;g/{\ell}$) > 교반형 생물반응기($6\;g/{\ell}$) > 컬럼형 생물반응기($5\;g/{\ell}$) 순으로 나타났으며, 기포통기형 생물반응기에서 가장 높은 세포외 다당체($1\;g/{\ell}$)와 세포 내다당체(2.7%)를 생산하여 기포통기형 생물반응기가 잔나비불로초 균사체 배양에 가장 적합한 것으로 나타났다. 세포외 다당체의 분자량도 생물반응기의 형태별에 따라 다르게 나타났으며, 기포통기형 생물반응기에서 가장 높은 분자량을 나타냈다. 기포통기형 생물반응기에서의 적정한 공기공급율은 0.05부터 0.1 vvm 사이로 나타났다. 특히 잔나비불로초 균사체는 배양하면서 배지의 점도가 높아져 점차 공기 공급량을 높여 주는 것이 좋은 것으로 판단된다.
애기졸각버섯의 균사를 액내 진탕 배양법으로 배양하여 항종양성 성분을 생성시키고 이 성분의 특징을 밝히기위하여 위의 방법으로 배양된 균사체를 증류수로 가온 추출하였으며 그 추출물을 이온 교환수지 및 겔여과크로마토그라피법으로 정제하였다. 이 정제과정에서 분리된 5개의 분획에 대하여 각각 항종양 실험을 시행하였던 바, 그 정제의 정도에 비례하여 항암작용이 증가하였으며, 최종 분획 E를 1회 10mg/kg용량으로 백서에 투여하였을 때 75%의 종양 억제율을 나타내었으며, 다당류 81% 및 단백질 4%를 함유하고 있었다. 이 성분은 백서의 복강내 마크로훼이지의 수를 증가시켰으며 이 성분을 laccaran으로 명명한다.
1. 검정곰팡이 (Aspergillus niger)를 실험재료로 하여 동조적으로 액침배양한 결과 포자의 발아로 부터 균사의 생장, 생식기관의 성숙 및 무성포자의 형성까지를 재현시킬 수 있었다. 2. 각 분화과정에서의 균체로 부터 고인산화뉴를레오티드를 추출하여 P.E.I. Cellulose TLC법으로 전개시켰다. 3. 포자형성 직전의 균체로 부터 얻은 추출물 중에 구아노신테트라포스페이트 $(GP_4)$가 존재함을 확인하였다. 4. 분화과정에 따른 균체로부터 추출한 유리아미노산의 총량은 포자형성 직전에 급격히 증가함을 알았다. 5. 정낭과 경자가 완성된 균체에 8-아자구아닌과 시클로헥시미드를 처리한 바 포자형성이 억제되었다. 6. 전낭과 경자가 완성된 균체에 이노신산과 구아닌산을 처리한 바 포자형성이 촉진되었다.
This study relates to low and medium molecular weight isoflavone-${\beta}$-D-glucan produced by submerged liquid culture of Agaricus blazei, a method of producing the isoflavone-B-D-glucan using autolysis enzyme of Agaricus blazei mycelia, and use of the isoflavone-B-D-glucan for anti-cancer and immunoenhancing effect. In acordance with one aspect of the present study, it deals with a method of producing isoflavone-${\beta}$-D-glucan, which comprises the followings; 1) culturing and separating mushroom mycelia, 2) producing low-medium molecular weight isoflavone-${\beta}$-D-glucan from high molecular weight one. The cytotoxicity on human cnacer cell line (Caco-2, MCF-7), the expression of Cyclin D, Bcl-2, Bax protein, p21 protein, p53 protein in MCF-7 cells assessed by SDS-PAGE and immunoblotting, and other immuno related factors such as TNF-${\alpha}$ and IL-1B activities were examined. Structural identification of isoflavone-${\beta}$-D-glucan which showed cytotoxicity against cancer cell and immunoenhancing effects was carried by separation with DEAE-cellulose column chromatography, TLC, HPLC, IR, NMR. Clinical test for the cancer patients (n=119) for 6 month was carried out, and immunoenhancing factors (NK. cell number, ratio of T4/T8) were checked. We concluded the identified isoflavone-${\beta}$-D-glucan has immuno enhancing effects and could be useful for cancer chemoprevention.
Cordycepin (3'-deoxyadenosine) is a nucleoside analog known for its diverse range of biological activities. This study investigated the effect of different types of sawdust on the production of the bioactive compound cordycepin. The results of the study showed that different types of wood sawdust affected the biosynthesis of cordycepin and a significant increase was observed when the conventional SDB medium was replaced with 1% NaOH treated pine sawdust. To optimize cordycepin production from Paecilomyces tenuipes in a medium containing 1% NaOH-pretreated pine sawdust, we employed Response Surface Methodology (RSM) in its Box-Behnken design (BBD) canonical form. The optimal conditions were determined as follows: a particle size of 109.5111-mesh (140 ㎛) for 1% NaOH-pretreated pine sawdust, an input weight of 21.1679 g/L, and an incubation time of 73.8423 hours. According to our model, this combination is expected to yield a maximum cordycepin content of 896.1428 ㎍/mL. Experimental validation of this prediction was performed using the suggested optimal conditions, resulting in an average cordycepin content of 922.6771 ㎍/mL across three replicates, thus confirming the model's accuracy.
강원도 양양군 일원 야산의 뽕나무에서 자생하고 있는 상황버섯 형태의 자실체를 채집하고, 그 자실체로부터 Phellnus속의 한 균주를 분리동정하였으며, 액체배양에 의하여 분리 균사체의 대량생산을 위한 배양조건, 배지조성 및 배양장치의 영향을 조사하였다. 자실체는 표면이 검으며 거칠고, 갓의 안쪽은 황갈색으로 평평하였으며, 자실층이 두터웠고(5-7 cm), 말굽형으로 조직이 매우 단단하여 전형적인 상황버섯의 형태를 나타내었다. 또, 조직 일부를 water agar에 이식하여 순수분리한 결과, 분리된 균사체는 황갈색으로, PDA 평판배지에서 자갈색의 색소를 분비하였으며, 균사는 clamp connection을 형성하지 않았고, 많은 branch가 있었다. 또 laccase, tyrosinase 및 peroxidase activity를 가지고 있어, 본 균주는 Phellinus속의 한 균주로 확인되었다. 플라스크 배양에서 균사체 생성을 위한 최적배양조건은 접종비 5%(v/v), 배지액량 70 mL, 교반속도 150rpm, 초기 pH 6, 배양온도 $30^{\circ}C$ 및 배양기간은 8일이었다. 또, 반응표면분석에 의한 최적 배지조성은 glucose 12.12 g/L, sucrose 12.12 g/L, yeast extract 11.15 g/L, malt extract 11.15 g/L, $KH_2PO_4$ 0.855 g/L 및 $CaCl_2$ 0.855 g/L 이었으며, 배양 4일 및 8일 후 균사체량은 각각 1.95 및 9.89 g/L 이었고, 최대 비생육속도 $0.020\;hr^{-1}$, 생산성은 1.25 g/L/day이었다. 그러나 서로 다른 3종의 배양장치를 사용한 결과, 3 L air-lift fermentor에서 통기량 2.5 vvm으로 4일간 배양하였을 때, 약 7.5g/L의 균사체를 얻을 수 있었으며, 이때, 최대 비증식속도는 $0.033\;hr^{-1}$, 생산성은 1.9g/L/day로, 같은 기간내 플라스크 배양시 보다 각각 1.7 및 4.2배가 향상된 결과를 얻을 수 있었다.
The production of the entomopathogenic and phytotoxic cyclic depsipeptide beauvericin (BEA) was studied in submerged cultures of Fusarium oxysporum KFCC 11363P isolated in Korea. The influences of various factors on mycelia growth and BEA production were examined in both complete and chemically defined culture media. The mycelia growth and BEA production were highest in Fusarium defined medium. The optimal carbon and nitrogen sources for maximizing BEA production were glucose and $NaNO_3$, respectively. The carbon/nitrogen ratio for maximal production of BEA was investigated using response surface methodology (RSM). Equations derived by differentiation of the RSM model revealed that the production of BEA was maximal when using 108 mM glucose and 25 mM $NaNO_3$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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