Lee, Min Su;Lee, Ingyeong;Kim, Sam Kyu;Oh, Chang-Sik;Park, Duck Hwan
Research in Plant Disease
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v.24
no.1
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pp.41-51
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2018
Since fire blight disease on apple and pear was produced in Korea in 2015, there were no registered chemicals to control against this disease. Instead, several antibacterial chemicals that were registered for other bacterial diseases such as soft rot and bacterial spot have been authorized by Rural Development Administration (RDA). However, these chemicals are not tested efficacy for fire blight disease except damage by those treatments on apple and pear in Korea. Thus, we evaluated efficiency using in vitro and in planta assays of antibacterial chemicals such as antibiotics and copper compounds including kasugamycin, oxytetracycline, oxolinic acid and streptomycin, and copper hydroxide, copper sulfate, oxine copper and tribasic copper sulfate, respectively. We also tested two kinds of biological agents. As expected, significant antibacterial effect was observed in vitro test of both antibiotics and copper-based chemicals. In planta test based on disease severity including ooze and water-soaked formation on immature pears, bacterial populations on blooms, and blight lesion formation in artificially inoculated shoots, kasugamycin, oxytetracycline and streptomycin have been shown the most efficiency among tested antibiotics. Four copper-based chemicals tested in this study, control effects are little bit lower than agricultural antibiotics but they seem to be available to use in terms of winter season. Biocontrol agents were also shown possibility to treat in eco-friendly farms. In addition, there are no antibiotic resistance genes in Korean isolates against antibiotics, which were selected for suppression of fire blight in this study.
Bacterial colonies which were able to oxidize the manganese were isolated from six soil samples in Byungchon area. Among them, one bacterial strain was selected for this study based on its high manganese oxidation activity. This selected bacterial strain was identified as Pseudomonas sp. MN5 through physiological-biochemical test and analysis of its 16s rRNA sequence. This selected bacterial strain was able to utilize fructose and maltose, but they doesn't utilizing various carbohydrates as a sole carbon source. Pseudomonas sp. MN5 showed a very sensitive to antibiotics such as kanamycin, chloramphenicol, streptomycin and tetracycline, but a high resistance up to mg/ml unit to heavy metals such as lithium, manganese and barium. Optimal manganese oxidation condition of Pseudomonas sp. MN5 was pH 7.5 and manganese oxidation activity was inhibited by proteinase K and boiling treatment. The manganese oxidizing protein produced by Pseudomonas sp. MN5 was purified by ammonium sulfate precipitation, HiTrap Q FF anion exchange chromatography and G3000sw $_{XL}$ gel filtration chromatography. By sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, three manganese oxidizing protein with estimated molecular weights of 15 kDa, 46.7 kDa and 63.5 kDa were detected. Also, it was estimated that manganese oxidizing protein produced by Pseudomonas sp. MN5 were a kind of porin proteins through internal sequence and N-terminal sequence analysis.
Biodegradative threonine dehydratase was purified to homogeneity from Serratia marcescens ATCC 25419 by streptomycin sulfate treatment, Sephadex G-200 gel filtration chromatography followed by AMP-Sepharose 4B affinity chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was 118,000 by fast protein liquid chromatography using superose 6-HR. The enzyme was determined to be a homotetrameric protein with subunit molecular weights of 30,000 by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was inhibited by ${\alpha}-Keto$ acids and their derivatives such as ${\alpha}-ketobutyrate$, pyruvate, glyoxlyate, and phosphoenol pyruvate, but not by ${\alpha}-aminobutyrate$ and ${\alpha}-hydroxybutyrate$. The inhibition of the enzyme by pyruvate and glyoxylate was observed in the presence of AMP. The inhibitory effect of glyoxylate was decreased at high enzyme concentration, whereas the inhibition by pyruvate was independent of the enzyme concentration. The kinetics of inhibition of the enzyme by pyruvate and glyoxylate revealed a noncompetitive and mixed-type inhibition by the two inhibitors with respect to L-threonine and AMP, respectively.
Phenoxazinone synthase catalyzes the oxidative condensation of two molecules of substituted o-aminophenol to the phenoxazinone chromophore of actinomycin. Mutant strain, Streptomyces sp. V-8-M-1 producing higher phenoxazinone synthase, was obtained from Streptomyces sp. V-8 by treatment of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. The phenoxazinone synthase was purified from extract of mutant strain of Streptomyces sp. V-8-M-l by successive steps of streptomycin sulfate, ammonium sulfate precipitation. DEAE-cellulose and Sephadex G-200 column chromatography. Molecular weight of the enzyme was 360,000 daltons. The enzyme was composed of octamer of a single subunit of 45,000 daltons. The Km value and Vmax value for 3-HAA were $14.9{\;}{\mu}M$ and 9.5 mg/U, respectively. The optimal pH and temperature for the enzyme activity were 9.0 and $25~30^{\circ}C$, respectively. Treatment of the enzyme with group specific reagents, phenylglyoxal, p-hydroxymercury-benzoate, Nbromosuccinimide, 5.5'-dithiobis-nitrobenzoic acid and ethylmaleimide resulted in loss of enzyme activity, which shows arginine and cysteine residues are at or near the active site.
The Journal of the Korean Society for Microbiology
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v.5
no.1
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pp.27-31
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1970
Nalidixic acid and six other drugs were studied for in vitro effectiveness against 200 strains of Escherichia coli isolated recently from healthy persons and bactericidal activity of ampicillin against one respective strain of Escherichia coli and Salmonella typhi isolated were also studied. The resutlts obtained by the plate dilution method showed the following percentage of resistance: kanamycin, 2.5%; streptomycin, 12.0%; ampicillin, 13.5%; tetracyclin, 15.5%; chloramphenicol, 17.5%; colistin sulfate, 19.5%. No strains were resistant to nalidixic acid, clearly indicating that nalidixic acid is the most effective drug tested. Ampicillin, measured by test-tube diltion method, was highly bactericidal against Salmonella typhi at the concentration of 2.5mcg/ml and against Escherichia coli at 5mcg/ml.
Serratia marcescens purine nucleoside phosphorylase (PNP) was purfied to homogeneity by streptomycin sulfate treatment, Sephacry HR S-200 gel filtration chromatography and AMP-agarose affinity chromatography. The specific activity of the enzyme was increased 49-fold during purification with an overall yield of 7.0%. The molecular weight was 168kD as estimated by Sephadex G-150 gel filtration chromatography. The S. marcescens enzyme was composed of six identical subunits with subunit molecular weight of 28kD, as estimated by SDS-PAGE. The Km values of S. marcescens enzyme for inosine and deoxyinsoine were 0.38 and 1.20 mM, respectively. The ph optimum was near 8.0, and the enzyme was relatively heat-stable protein. The enzyme was inactivated com-pletely by 0.5 mM of $Cu^{ 2+}$.
국내 감자 연작 재배지에서 수집하여 분리동정한 더뎅이병원균인 Streptomyces scabies의 배양적, 형태적, 생리적 특성을 조사한 결과는 다음과 같다. 이병감자에서 분리된 균들은 병원성 균주와 비병원성 균주들로 구분되었고, 이들 간에는 뚜렷한 차이를 보였는데, 전형적인 병징을 나타내는 병원성균주는 비병원성균주와는 달리, 나선형의 포자사슬, 회색 포자, 멜라닌 색소를 생성하고 D-glucose, L-arabinose, D-fructose, D0mannitol, raffinose, rhamnose, sucrose, i-inositol, D-xylose 등의 탄소원을 이용하였으며, 또한 7% NaCl 및 streptomycin sulfate, crystal violet, olean domycin(10$\mu\textrm{g}$/ml, 100$\mu\textrm{g}$/ml)등의 항생물질에 감수성을 나타내었다.
Mesophyll protoplasts of Nicoliana labacum ($NR^{-}/SR^{+}$) and N glulinosa were electrofused with AC field of 0.5 MHz and 1 kV DC pulse for 2 ms. Fused protoplasts were selected and cultured to the green cell clusters in $MSNO_3$ medium containing 1.2 mg!ml streptomycin sulfate. Four plant lines regenerated from selected colonies showed both parental morphological characteristics of leaf and flower and these plant lines were confirmed as somatic hybrids based on electrophoretic patterns of leaf peroxidase. In XhoI restriction patterns of chloroplast DNA, these hybrid plant lines expressed both parent common restriction sites and parent specific sites. One of these hybrid lines exhibited interspecific pattern of both parental chloroplast genomes. indicating nine both parent common sites, one N labacum specific site and two N glutinosa specific sites. sites.
In previous paper, it was reported that antibiotic substance such as tetracycline and streptomycin were produced by S'. albus subsp. and S'. globosus. And increase of mycelial growth of two strains, antibiotic production, and changes of pH range are extended to approximately 110-130 hrs in fermenting medium, there-after they decreased with culture period exception of pH range. Two Streptomyces spp. required commonly 4-5% starch as carbon sources and 1.5-2.0% soybean meal as nitrogen sources. However, 0.005-0.01M potassium phosphate dibasic, calcium carbonate (6mg/ml in S.albus subsp. and 2mg/ml in S. globosus), 0.01-0.03M, magnesium sulgate and 0.01M ferric chloride showed as optimal concentration for the growth of 2 strains. Mineral compoments such as zinc, manganese, cobalt, sodium and copper at the level of 10$^{-4}$ -10$^{-6}$ M were observed. Especially, zinc ion showed toxicity to the growth of 2 strains at 0.005M. In relation with pH, there is a little difference in mycelial growth with cultural initial pH.
Kim, Tae-jong;Kim, Jong-bae;Lee, Seong-bae;Jeon, Young-soo
Korean Journal of Veterinary Research
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v.29
no.3
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pp.393-405
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1989
This study was carried out to treatment test for bovine mastitis by the determination of adenosine triphosphate (ATP) based on firefly bioluminescence. The results obtained are followed; 1. In the susceptibility test, cephalothin which looks the most effective were sensitive to Staphylococcus sp. (72.3%), Micrococcus sp. (84.2%), Streptococcus sp. (72.7%) and Gram positive bacilli (72.7%), Gram negative bacilli were sensitive to gentamicin (92.3%) and Yeast-like-fungi was the most sensitive to clotrimazole, and nystatin in order. 2. When the number of bacteria, such as Staphylococcus aureus, Candida tropicalis isolated from the mastitis milk were counted by conventional agar plating technique, and compared with the concentration of bacterial ATP, it gave a good linear relationship. The content of ATP per Staphylococcus aureus, cell was 3.1fM and Candida tropicalis showed the high level of A TP (90fM). 3. The ATP assay was applied to the determination of minimal inhibitory concentration (MIC) of various antibiotics. When Staphylococcus aureus was incubated in the presence of different concentration of tetracycline, erythromycin, kanamycin and streptomycin sulfate and the growth was monitored by the conventional agar plating technique and ATP assay, both methods shown the same results that they were 1mcg/ml, 2mcg/ml, 6.25mcg/ml and 8mcg/ml, respectively. 4. For the determination of susceptibility of sensitive and resistant Staphylococcus au reus isolated for the milk with mastitis to tetracycline, erythromycin kanamycin and streptomycin sulfate, the minimum time required for the test was determined by the assay of ATP every 30 minutes during incubation of 3 hours at $37^{\circ}C$. ATP concentration time curve calculated on both resistant and sensitive strains incubated 3 hours as the optimum time for the determination of susceptibilities of various antibiotics exemed. The ATP concentration of each test broth (antibiotic containing), expressed as a percentage of its own control brith (antibioticfree) indicated values of 30% to be indicative of each antibiotic sensitivity. Single time point ATP assay carried out on the various sensitive and resistant of Staphylococcus aureus to antibiotics examined after 3 hours at $37^{\circ}C$ correlated exactly with disc diffusion and MIC. 5. In the cure of intramammary treatment of bovine mastitis in lactating quarters, the cure rate of Staphylococcal mastitis showed to cephalexin (80%), cloxacillin and gentamicin (70%), ampicillin and oxytetracycline (60%), and Streptococcal mastitis showed to cephalexin (85%), penicillin (80%), cloxacillin and oxytetracycline (75%), and ampicillin (70%), but intramammary antimycotic drug (clotrimazol) were only a little effect about fungal mastitis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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