The culture filtrate of Streptomyces sp. B25, which was identified in this experiment, was tested for the control of tobacco mosaic virus (TMV) with the susceptible tobacco cultivar, NC 82, under the field conditions following the preliminary examination of its characters for TMV control. Control efficacy of the culture filtrate against TMV infection continued over 50% up to 6 days after treatment, and its systemic effect was about 30% of the direct effect. In field conditions control efficacy of the culture filtrate against TMV infection was 95.3 % at 2 weeks after TMV inoculation, and decreased to 58.3 % at 3 weeks after inoculation. Five fold-dilution of the culture filtrate showed about half of the control efficacy by the stock culture filtrate. Analysis of the antibiotic material responsible for the inhibition of TMV infection through nuclear magnetic resonance experiments revealed that the antibiotic is antimycin $A_1$, which is firstly reported as an anti-phytoviral antibiotic in this experiment.
본 연구는 팽이버섯의 병재배용 폐배지를 이용하여 폐상퇴비를 제조하고 퇴비의 이화학성 및 미생물을 분석한 내용이다. 폐상퇴비의 유기물 함량은 43.29%, 유기물함량/질소비는 27.00, 전질소함량은 1.60%, 수분함량은 46.48%, 염농도는 0,64%, $P_2O_5$는 1.32%, $K_2O$ 1.18%로 나타났다. 퇴비내 존재하는 미생물의 수는 $1.6{\times}10^{10}$(cfu/g)으로 나타났으며, 이들 미생물을 동정한 결과 대부분이 Bacillus sp.으로 나타났고 주로 B. lentimobus, B. coagulans, B. brevis, Clostridium thermocellum, Escherichia coli 등이 존재하였고, 방선균류는 주로 Streptomyces thermovulgaris, S. thermofuscus 등 Streptomyce sp.가 주종이며, Micropolyspora faeni도 존재하였다. 곰팡이류는 Aspergillus sp. 나 Penicillum sp. 등이 존재하는 것으로 확인되었다.
A strain of Streptomyces sp. (YS-221-B) extracellularly produced an inhibitory substance for $\alpha$-D-Glucosidase. The substance was purified 96-fold from culture filtrate by dialysis, heat treatment, adsorption on active carbon, Bio-Gel P-10 and Sephadex G-75 column chromatography with yield of 9.2%. The substance was stable in pH range from 7.0 to 11.0 at 37$^{\circ}C$, and a treatment at 10$0^{\circ}C$ for 20 min diminished only 15% of the original activity. The inhibitor was not inactivated by the treatment of $\alpha$-, $\beta$-amylases, glucoamylases, trypsin and chymotrypsin but inactivated by pyoteases from Streptomyces griseus and Tritirachium album.
DEAE sephacel anion chromatography 및 SP sepharose cation chromatography에 의해 Streptomyces violaceoruber 유래 alginate lyase의 정제를 수행하여 비활성 14.59 units/mL 정제배율 40.64배를 나타내었다. Tricine SDS-PAGE에 의한 단일밴드를 확인하였고, 분자량은 23.3 kDa으로 결정되었다. 정제효소에 의해 sodium alginate를 가수분해하여 1차 activated carbon column chromatography와 2차 bio gel P-2 gel filtration에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC와 FACE를 통해 중합도를 확인하고 Timell's method에 의해 hetero type M/G-oligosaccharide 중합도 6, 8로 결정되었다. B. animalis, B. bifidum, B. breve, B. infantis, B. longum와 L. acidophilus, L. casei, L. reuteri에 생육활성에 대한 중합도 6, 8의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS media에 탄소원으로 중합도 6, 8를 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 D.P. 6 M/G-oligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 표준 MRS배지와 비교하여 4.25배, D.P. 8에서 6.44배의 상대활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타내었으며, B. bifidum의 경우에서도 D.P. 6에서 3.27배, D.P. 8에서 5.4배의 상대활성을 나타내었다. 이외에도 B. animalis, B. breve그리고 L. casei에 있어서도 D.P. 8의 경우 3배의 상대활성을 나타내었으나, L. reuteri에 대한 D.P. 8의 경우에서는 표준 MRS media와 비교하여 0.29배로 감소하였다. 결과적으로 D.P. 8의 올리고당이 D.P. 6의 올리고당보다 생육활성에 크게 기여하는 것으로 나타났다.
사과 재배에 피해를 주고 있는 사과 겹무늬썩음병, 탄저병, 라이족토니아병을 복합적으로 방제하기 위한 기초연구로서 각 병원균에 대하여 우수한 길항력을 동시에 가지는 길항미생물을 선발하고 Streptomyces sp. S-1110으로 동정하였다. 분리된 길항미생물은 배양상등액으로 길항물질을 분비하였으며 우수한 열안정성과 pH 안정성을 가지는 특성이 있었으며 각 병원균에 대한 감수성이 조금씩 달라서 2 종 이상의 길항물질이 동시에 생산되어 길항작용을 하는 것으로 추정되었다. 또한 분리균이 생산하는 길항물질을 사과 과실에 직접접종된 사과 겹무늬썩음병과 탄저병의 방제를 위해 실험한 결과 높은 방제력을 보였다. 따라서 분리된 길항미생물은 사과 과수원 및 저장소에서 동시에 수종의 질병방제에 쓰일 수 있는 천연 복합방제제의 개발을 위한 기초 균주로의 가치가 높은 것으로 판단된다.
To search and develop the compounds exhibiting antifungal activities against the mycelial phase of Candida albicans, approximately 2,900 microorganisms isolated from soil were examined for antifungal activity. Among them, a strain with preferential activity against the mycelial phase of Candida albicans was isolated and identified as Streptomyces sp. A393. Isolation and purification of compounds A393 showing antifungal activity against the mycelial phase of C. albicans were performed using XAD-7 column chromatography, silica gel chromatography, preparative thin- layer silica gel chromatography, and HPLC. The molecular weights of compounds isolated from Streptomyces sp. A393 were determined as 774, 790, 804 and 820. These compounds appeared to have a structure of macrolide antibiotics, oligomycin A, B, C and E. Especially, oligomycin E, which is formerly reported to have no antifungal activity, showed antifungal activity against the mycelial phase of Candida albicans.
In the continued search for inhibitors of enoyl-acyl carrier protein (ACP) reductase, we found that four acylbenzenediol sulfate metabolites from Streptomyces sp. AN1761 potently inhibited bacterial enoyl-ACP reductases of Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, and Mycobacterium tuberculosis. Their structures were identified as panosialins A, B, wA, and wB by MS and NMR data. They showed stronger inhibition against S. aureus FabI and S. pneumoniae FabK with $IC_{50}$ of 3-5 ${\mu}M$ than M. tuberculosis InhA with $IC_{50}$ of 9-12 ${\mu}M$. They also exhibited a stronger antibacterial spectrum on S. aureus and S. pneumoniae than M. tuberculosis. In addition, the higher inhibitory activity of panosialin wB than panosialin B on fatty acid biosynthesis was consistent with that on bacterial growth, suggesting that they could exert their antibacterial activity by inhibiting fatty acid synthesis.
난분해계 물질을 분해할 수 있는 균주 개발에 유용한 클로닝백터를 개발하기 위하여, Pseudomonas putida 로부터 유래한 R 플라스미드 pKU10 을 HindIII 로부터 부분소화하여 약 8.5 kb 의 새로운 플라스미드 pKU11 을 조립하고, 여러 숙주세포에서의 안정성 및 catechol 2, 3-dioxygenase 유전자의 클로닝 을 통해 난분해계 유전자클로닝 백터로의 유용성을 조사하였다. pKU11 은 높은 농도의 ampicilin 과 tetracyclin 에 대해서 내성을 나타내었고, P. putida TN1307 에 도입되었을 때 수세대 동안 안정되게 발현되었지만, Pseudomonas 이외의 숙주세포로서 E. coli 와 Achromobacter gr. D. V. 에 도입되었을 낮은 형질전환빈도와 불안정성을 나타내었다. pKU11 의 copy 수는 8 개로 조사되었고, pKU11 에 xylene 분해에 관련된 catechol 2, 3-dioxygenase 유전자를 클로닝 하였을 때 P. putida TN 1307 에서 잘 발현하였다. 따라서 pkU11 은 난 분해계 유전자를 클로닝하는에 Pseudomonas 에서 유용한 벡터로서 쓰일 수 있을 것으로 사료된다.
여러 종류의 mannanase를 생산하는 Cellulosimicrobium sp. YB-43으로부터 mannanase B를 암호하는 manB 유전자와 효소의 특성이 보고된 바 있다. Mannanase C (ManC)로 명명한 효소의 유전자가 manB 유전자의 하류에 위치한 것으로 예상되어 이를 중합효소 연쇄반응으로 클로닝하여 manC 유전자의 염기서열을 결정하였다. ManC는 448 아미노산 잔기로 구성된 것으로 확인되었으며 glycosyl hydrolase family 5에 속하는 mannanase와 상동성이 높은 활성영역과 탄수화물 결합영역(CBM2)이 존재하였다. ManC의 활성영역은 Streptomyces sp. SirexAA-E (55.8%; 4FK9_A) 및 S. thermoluteus (57.6%; BAM62868)의 mannanase와 아미노산 배열의 상동성이 55% 이상으로 가장 높았다. Signal peptide 영역이 제거되고 카르복실 말단에 hexahistidine이 연결되도록 제조한 His-tagged ManC (HtManC)의 유전자를 재조합 대장균에서 발현하여 균체 파쇄액으로부터 HtManC를 정제하였다. HtManC은 $65^{\circ}C$와 pH 7.5에서 최대 활성을 보였으며 pH 7.5~10범위에서 활성에 큰 변화가 없었다. HtManC는 locust bean gum (LBG)과 konjac에 대한 분해 활성이 guar gum과 ivory nut mannan (ivory nut)에 비해 높았다. 최적 반응조건에서 LBG를 기질로 하여 반응 동력학적 계수를 측정한 결과 Vmax와 Km이 68 U/mg과 0.45 mg/ml로 나타났다. HtManC에 의한 만노올리고당(MOS)과 mannan의 분해산물을 TLC로 관찰한 결과 mannobiose 보다 중합도가 큰MOS로부터 mannobiose와 mannotriose가 주된 분해산물로 생성되었다. 또한 LBG, konjac과 ivory nut의 분해산물로 mannobiose와 소량이 mannose가 공통적으로 관찰되었다.
Ryu, Min-Ji;Baek, Eun-Ki;Kim, Soyeon;Seong, Chi Nam;Yang, Inho;Lim, Kyung-Min;Nam, Sang-Jip
Biomolecules & Therapeutics
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제29권1호
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pp.98-103
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2021
The demand for natural substances with anti-melanogenic activity is increasing due to the recent interest in skin whitening. Intensive investigation on the culture broth of Streptomyces sp. SCO-736, a marine bacterium from the Antarctica coast, has led to the isolation of a new natural product named antaroide (1). The chemical structure was established through the interpretation of MS, UV, and NMR spectroscopic data. Antaroide is a nine-membered macrolide with lactone and lactam moieties. To investigate its applicability in skin whitening cosmetics, its anti-melanogenic activity in B16F10 murine melanoma cells was examined. As a result, antaroide displayed strong inhibitory activities against melanin synthesis and also attenuated the dendrite formation induced by the α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH). Antaroide suppressed the mRNA expression of the melanogenic enzymes such as tyrosinase, TRP-1 and TRP-2. This suggests that it may serve as a transcriptional regulator of melanogenesis. Collectively, the discovery of this novel natural nine-membered macrolide and its anti-melanogenic activity could give new insights for the development of skin whitening agents.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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