Streptococcus mutans is the most important causative bacteria of dental caries among the oral bacteria. Lactococcus lactis 1370 was isolated from the oral cavity of child. The effect of Lactococcus lactis 1370 on the formation of artificial plaque by Streptococcus mutans was studied. 1. The insoluble substances and bacteria were much more attached on the wall of disposable cuvette in the culture of Streptococcus mutans than in the combined culture of Streptococcus mutans and Lactococcus lactis 1370. 2. The mean weight of produced artificial plaque on the wires in the beaker was 131.7 mg in the culture of Streptococcus mutans only, whereas being reduced to 6.4 mg in the combined culture of Streptococcus mutans and Lactococcus lactis 1370 (p<0.05). The viable cell didn't show the significant difference between them after culturing. 3. When Streptococcus mutans was cultured in the media containing culture supernatant of Lactococcus lactis 1370 cultured in M17 broth containing 0.5% yeast extract and 5% sucrose, the mean weight of produced artificial plaque was 8.0 mg on the wires, whereas being 125.4 mg in the media without culture supernatant of Lactococcus lactis 1370 (p<0.05). The viable cell didn't show the significant difference between them after culturing. 4. When Streptococcus mutans was cultured in the media containing soluble polymer produced by Lactococcus lactis 1370, the mean weight of produced artificial plaque was significantly reduced compared with being cultured in the media without soluble polymer (p<0.05). The viable cell didn't show the significant difference between them after culturing. 5. The soluble polymer produced by Lactococcus lactis 1370 was glucan. 6. The glucan produced by Lactococcus lactis 1370 was water-soluble glucan containing ${\alpha}$-1,6-glucose linkage as the main linkage. These results suggest that the artificial plaque formed by Streptococcus mutans is inhibited by water-soluble glucan produced by Lactococcus lactis 1370.
L. helveticus YM-1과 Str. lactis ML$_3$를 환원탈지유 배지에 혼합배양시켜 단백질 가수분해 활성과 산발효 촉진물질을 검토하였다. 두 균을 8시간 동안 배양한 결과 단백질 가수분해 활성은 현저한 차이를 나타냈으며, 배양액중의 우유 단백질 가순분해물을 측정하여 tyrosine 양으로 환산했을 때 L.helveticus YM-1은 105$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$, Str. lactis ML$_3$는 30$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$였다. 탈지유에 Str. lactis ML$_3$의 배양여액을 첨가하여 L. helveticus YM-1을 배양했었을 때 L. helveticus YM-1의 산 발효를 거의 촉진시키지 못하였으며, 반대로 L. helveticus YM-1의 배양여액을 첨가하여 Str. laclis ML$_3$을 배양했었을 때는 Str. lactis ML$_3$의 산발효를 크게 촉진시켰다. Str. lactis ML$_3$의 산발효 촉진물로는 L. helveticus YM-1이 우유 단백질을 가수분해하여 생산한 분자량 4300 정도의 peptide이며, 이 peptide를 산으로 가수분해한 결과 lysine, arginine, glutamic acid가 주로 많이 존재하였다. 또한 유리 아미노산으로 탈지유에 첨가하여 Str. lactis ML$_3$를 배양했을 때 여러 아미노산 중에서 histidine, glutamic acid, phenylalanine이 산생성을 가장 촉진하였고 isoleucine은 오히려 저해하였다.
치아우식증은 치아구조의 국소적, 침윤적, 분자적인 붕괴로 특징지워지는 치아 경조직에 대한 세균성질환이다. 이런 치아 우식증의 주 원인균인 S. mutans의 치태형성과 증식에 대해 아동의 구강에서 분리된 L. lactis 51의 작용을 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 비커 와이어 검사에서 S. mutans와 L. lactis 51의 혼합배양시 S. mutans 단독배양에 비해 치태의 무게가 감소하였다. 2. S. mutans는 S. mutans와 L. lactis 51의 혼합 배양에 비교하여 S. mutans 단독배양시에 생균수가 감소하였다. 3. S. mutans와 L. lactis 51은 M17Y broth에서 단독 및 혼합배양시 배양 12시간 때까지 증가하다가 24시간 때에 감소 하였으나, M17YS broth에서는 S. mutans와 L. lactis 51의 혼합배양시 S. mutans의 생균수가 시간이 지남에 따라 감소하였다. 4. L. lactis 51의 배양 상청액은 S. mutans의 치태형성과 증식에 대해 억제 작용을 하지 못하였다. 5. M17YS broth에서의 L. lactis 51 배양 상청액 성분의 thin layer chromatography에서 자당과 과당이 계속 검출되었다. 이상의 결과를 종합하면 구강에서 분리된 L. lactis 51는 S. mutans의 인공치태 형성과 증식을 억제시키는 것으로 사료된다.
Behavior of Listeria monocytogenes in Skim milk during fermentation by Lactobacillus bulgaricus YI-2 and Streptococcus lactis FYI-1 were determined. Autoclaved skim milk was inoculated with ca. 10$^{3}$ L. monocytogenes (Strain LM91-1 or LM 96-2) cells/ml, and with 5.0, 1.0, 0.5 or 0.1% of a milk culture of either L. bulgaricus TI-2 or S. lactis FYI-1. Skim milk containing ca. 10$^{3}$ L. monocytogenes was incubated at 37 or 42$\circ $C for 15 h with L. bulgaricus YI-2, and at 21 or 30$\circ $C for 15 h with S. lactis FYI-1. Cultured skim milks were stored at 4$\circ $C in the refrigerater. Samples were plated on Oxford Agar with oxford antimicrobic supplement to enumerate L. monocytogenes and on either modified MRS agar to enumerate lactic acid bacteria. L. monocytogenes survived the 15-h fermentation with S. lactis FYI-1 in all combinations of level of inoculum and temperature of incubation, but inhibition of growth ranged from 94 to 100%. When incubated with over the 1.0% of L. bulgaricus, L. monocytogenes inhibited or disappeared in fermented skim milk from 9 h after incubation. Especially, incubation at 42$\circ $C with 5.0% L. bulgaricus YI-2 as inoculum appeared to be the most effective inhibitory combination for strain LM 91-1, causing 100% inhibition in growth based on maximum papulation attained. In most instances of incubated with L. bulgaricus YI-2, growth of the pathogene appeared to be completely inhibited when the pH dropped below 4.38.
L.helveticus YM-1 과 Str.lactis ${ML}_3$를 탈지유, 배양여액및 함성배지에 단독및 혼합배양 하였을때 산생성량과 당이용성 그리고 상관관계를 검토하였다. 자기자신의 배양여액보다 상대편의 배양여액에서, 단독배양보다 혼합배양의 경우가 산생성 촉진효과가 컸었다. 유당의 이용성은 12시간 배양했을때 Str. lactis ${ML}_3$ 의 경우 0.4%, L.helveticus YM-1은 0.85%. 혼합배양시는 1.05%였다. L.helveticus YM -1의 단독배양과 두균의 혼합배양의 경우 8시간후 배지에 생성된 포도당은 0.22%와 0.10%를 나타낸 다음 점차 감소하였다. L.helveticus YM-1에 의해서 생성된 포도당은 Str.lactis ${ML}_3$의 산생성을 촉진한다고 생각된다.
Streptococcus lactis ATCC 11454 의 protoplast 생성 및 재생에 관하여 조사하였다. Protoplast의 생성은 용균효소로써 리소짐 단독처리 만으로 충분히 가능하였으며 균체의 배양은 20mM DL-트레오닌을 첨가한 배지를 사용하는 것이 좋았으며 생육시기와 리소짐 농도등이 중요한 영양인자였다. 배지조성의 최적화 및 protoplast를 배지에 접종하는 방법을 변형시킴으로써 약 20%정도의 재생효율을 얻을 수 있었다.
Three lactic acid bacteria (C-1 K-3 and T-1 strain) were isolated from Nuruk and characterized subsequently. They were useful strains for production of lactic acid and their growth was inhibited at 10% ethanol pH 4 These strains were identified as lactococcus lactis subsp. lactis NR C-1 Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenterides NR K-3 and pediococcus pentosaceus NR T-1 respectively by morphological physiological and biochemical characterization Lac lactis subsp lactis NR C-1 showed the highest lactic acid productivity. Leu measenteroides subsp mesenteroides NR K-3 showed stable lactic acid productivity and its growth was inhibited at pH 4. P pentosaceus NR T-1 had lower lactic acid productivity than the other two bacteria but it could not grow at 10% ethanol pH 4 The lactic acid productivity of these three strains in MRS broth were higher than that in Skim milk media the optimum pH and temperature for the lactic acid production of the three strains were 30-32$^{\circ}C$ and pH 6.0∼6.8 Glucose was the optimal carbon souorce for the lactic acid production. In terms of antagonism lac lactis subsp lactis NR c-1 showed somewhat inhibitory efects against some Gram positive rod and cocci such as Lactobacillus brevis and Streptococcus mitis. And Leu mesenteroides subsp mesenteroides NR K-3 showed the inhibitory effects against Streptococcus mitis but P. pentosaceus NR T-1 didn't show any inhibitory effects against tested strains.
Streptococci의 배양중의 염의 농도나 배지내 질소원의 조성 등이 쓴 맛 펩타이드의 형성에 깊이 관여한다고 알려진 세포내 및 세포외 프로테이나제(ICP, ECP)의 역가에 미치는 영향을 조사하기 위해 Streptococcus lactis $ML_8$ 및 Streptococcus cremoris $ML_4$ 두 균주를 NaCl 농도 $0{\sim}4%$, 배지 질소원중 카제인 함량을 $0{\sim}100%$로 달리한 조건에서 배양하고 그 때의 생육도와 균체내 및 균체외 프로테이나제의 역가를 측정하고 또한 같은 균체수에서의 프로테이나제 역가를 비교하기 위해 $10^{10}$ 세포당 효소의 역가도 계산하였다. 배지중 NaCl농도가 증가함에 따라 균체의 생육과 ECP의 역가는 감소했으나 ICP의 경우 $10^{10}$ 세포당 역가는 오히려 증가하였다. 이는 배지중 NaCl이 세포벽과 세포막에 관련된 ECP의 역가에만 직접 영향을 미치고 ICP의 역가에는 큰 영향을 미치지 않음을 시사하는 것으로 생각되었다. 배지의 질소원중 미분해 단백질인 카제인의 함량을 높게 하였을 때 균체의 생육은 낮았으나 효소 생산계 촉진에 의해 ECP의 역가는 두 균주 모두 높아졌다.
Dental caries is caused by cariogenic biofilm, an oral biofilm including Streptococcus mutans. Recently, the prevention of dental caries using various probiotics has been attempted. Lactococcus lactis HY 449 is a probiotic bacterium. The aim of this study was to investigate the effect of L. lactis HY 449 on cariogenic biofilm and to analyze its inhibitory mechanisms. Cariogenic biofilm was formed in the presence or absence of L. lactis HY 449 and L. lactis ATCC 19435, and analyzed with a confocal laser microscope. The formation of cariogenic biofilm was reduced in cultures spiked with both L. lactis strains, and L. lactis HY 449 exhibited more inhibitory effects than L. lactis ATCC 19435. In order to analyze and to compare the inhibitory mechanisms, the antibacterial activity of the spent culture medium from both L. lactis strains against S. mutans was investigated, and the expression of glucosyltransferases (gtfs) of S. mutans was then analyzed by real-time RT-PCR. In addition, the sucrose fermentation ability of both L. lactis strains was examined. Both L. lactis strains showed antibacterial activity and inhibited the expression of gtfs, a nd t he d ifference b etween both strains did not show. In the case of sucrose-fermenting ability, L. lactis HY 449 fermented sucrose but L. lactis ATCC 19435 did not. L. lactis HY 449 inhibited the uptake of sucrose and the gtfs expression of S. mutans, whereby the development of cariogenic biofilm may be inhibited. In conclusion, L. lactis HY 449 may be a useful probiotic for the prevention of dental caries.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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