돼지로부터 분리한 Staphylococcus hyicus subsp hyicus 489주의 protein A 존재여부와 함량을 indirect hemagglutination 및 enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)법으로 조사하였다. Indirect hemagglutination text에 의하여 cell-bound protein A 및 extracellular protein A 보유균은 489주 중 각각 87.7% 및 36.0%로 나타났다. ELISA법에 의한 이들 균의 protein A함량 측정에서 전균주의 extracellular protein A는 1ng/ml미만이었으며, cell-bound protein A함량은 대부분의 균주에서 1ng/ml 미만이었고 11주가 25~108ng/ml 수준이었다.
To produce the recombinant fibronectin-binding protein(FnBP) for development of subunit vaccine against Staphylococcus aureus. The fnbp gene was amplified from the chromosomal DNA of S aureus KNU 196 strain using the polymerase chain reaction, and cloned into pGEX-4T-2. Then, the recombinant FnBP fused with glutathione-S-transferase was produced in E coli, purified by affinity chromatography, and identified its antigenicity and immunogenicity by Western blot. The recombinant FnBP produced in this study is considered to have the same property of native FnBP purified from S aureus, and is expected to be useful as a candidate for S aureus subunit vaccine.
The complete nucleotide sequence of pKH4, a small multidrug resistance (smr) plasmid isolated from multidrug resistant Staphylococcus aureus SA5, was determined. Sequence analysis has revealed that pKH4 has two open reading frames for Rep and Smr proteins. The comparison of the amino acid sequence of Smr protein of pKH4 with those of other Smr proteins of various Staphylococcus showed that Smr protein of pKH4 is a new member of the SMR family.
This study was conducted to investigate protein and carbohydrate utilization of Micrococcus varians, Staphylococcus carnosus and Staphylococcus xylosus. Sensitivity to pH, sodium chloride, potassium sorbate and sodium nitrite of these strains was also determined. In Chinese-style beaker sausage manufacturing, the growth rate of these strains during the curing period ($20^{\circ}C$ and $30^{\circ}C$) was evaluated. The results indicated that no strains could hydrolyze azo-casein and sarcoplasmic protein and only S. xylosus could hydrolyze gelatin at $30^{\circ}C$. All of these strains could oxidize and ferment fructose and mannitol. S. carnosus and S. xylosus could slightly oxidize lactose and utilize citrate. Arabinose was oxidized by S. xylosus and sorbitol was oxidized by S. carnosus. Growth of M. varians was restricted at pH 5.0 and S. carnosus and S. xylosus were restricted at pH 4.5. S. xylosus and S. carnosus were able to grow with 0.1~0.5% potassium sorbate, 50~200 ppm sodium nitrite or 1~15% sodium chloride. S. xylosus had a higher growth rate than the other strains. Staphylococcus species grew well during curing period of Chinese-style beaker sausage then followed by Micrococcaceae.
황색포도상구균은 병원에 의한 감염, 혈류 감염을 포함하는 중요한 병원체이다. 특히, 포도상구균의 혈액 수집의 신속한 동정과 메치실린 내성이 일어나게 되면 폐혈증으로 추측되어 진다. 본 저자는 적은 양의 핵산을 등온증폭반응에 적응시켜 증폭산물을 SYBR Green I을 결합하여 염기서열에 특이적으로 검출할 수 있는 새로운 방법을 제시하고 있다. 그리고 이 독특한 유전자 증폭방법은 등온의 상태에서 하나의 효소만으로 증폭이 가능하다. 포도상구균-등온증폭반응은 황색포도상구균에 특이적인 protein A를 암호화하는 spa 유전자와, 메치실린 내성인 pennicillin-binding protein-2를 암호화하는 mecA 유전자를 타겟으로 하여 MRSA와 MRSE를 검출하였다. 본 연구에서는 등온증폭법을 사용하여 황색포도상구균과 표피포도상구균의 임상샘플을 검출하였다. 황색포도상구균과 표피포도상구균을 10배위 정량 희석하여 시리즈별로 샘플을 만들어 실험을 수행하였다. 칩을 기반으로 하는 LAMP법은 포도상구균 감염여부를 쉽고, 빠르고, 정확하게 민감도 있는 검출을 가능하게 해 주었고, 샘플을 측정할 수 있는 한계값을 넘는 상황에 특이적으로 적용할 수 있다.
Partial nucleotide sequence (nt 1-1842) of chloramphenicol resistance plasmid pKH7 has been reported previously and residual nucleotide sequence (nt 1843-4118) of pKH7 was determined and then the complete nucleotide sequence of pKH7 was obtained. pKH7 consists of 4118 bp and has three ORFs. Besides Rep and CAT proteins described in previous paper, Pre protein which mediates site-specific recombination in Staphylococcus aureus was found to be on pKH7. R $S_{A}$, a site-specific recombination site of Pre protein, and palA, a specific lagging-strand conversion signal, was also found in pKH7. Amino acid sequence of Pre protein of pKH7 was compared with those of other antibiotic resistant Staphylococcus aureus plasmids.s.
Using the monomolecular film technique, we compared the interfacial properties of Staphylococcus simulans lipase (SSL) and Staphylococcus aureus lipase (SAL). These two enzymes act specifically on glycerides without any detectable phospholipase activity when using various phospholipids. Our results show that the maximum rate of racemic dicaprin (rac-dicaprin) hydrolysis was displayed at pH 8.5, or 6.5 with Staphylococcus simulans lipase or Staphylococcus aureus lipase, respectively The two enzymes interact strongly with egg-phosphatidyl choline (egg-PC) monomolecular films, evidenced by a critical surface pressure value of around $23\;mN{\cdot}m^{-1}$. In contrast to pancreatic lipases, $\beta$-lactoglobulin, a tensioactive protein, failed to inhibit Staphylococcus simulans lipase and Staphylococcus aureus lipase. A kinetic study on the surface pressure dependency, stereoselectivity, and regioselectivity of Staphylococcus simulans lipase and Staphylococcus aureus lipase was performed using optically pure stereoisomers of diglycerides (1,2-sn-dicaprin and 2,3-sn-dicaprin) and a prochiral isomer (1,3-sn-dicaprin) that were spread as monomolecular films at the air-water interface. Both staphylococcal lipases acted preferentially on distal carboxylic ester groups of the diglyceride isomer (1,3-sn-dicaprin). Furthermore, Staphylococcus simulans lipase was found to be markedly stereoselective for the sn-3 position of the 2,3-sn-dicaprin isomer.
Staphylococcus xylosus SC-22으로 생성된 lipase을 분리. 정제하여 특성을 조사하였다. Staphylococcus xylosus SC-22의 배양액을 ammonium sulfate (30~80%), Sepadex G-100 및 DEAE-Sephacel chromatography의 정제과정을 거친 결과, specific activity가 756.6 units/mg protein으로 19.3배 정제도었으며 수율은 17.2%로 나타났다. 정제효소의 분자랴은 47kDa, 정제된 효소의 특성은 최적온도은 4$0^{\circ}C$, 최적 pH는 8.0이었으며, pH 안정성 범위는 pH 6.0~10.0부근에서 비교적 안정하였다. Alkaline lipase의 활성은 C $u^{2+}$와 P $b^{2+}$에 의해 완전히 저해되었으며, F $e^{3+}$ 에 의해 50% 효소활성이 저해되었으나, $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, $Na^{+}$에 의해 저해를 받지 않았다.
본 연구는 Lightcycler (Roche)를 이용한 Real-Time PCR(LC-PCR)기법을 통하여 원유시료에서 신속, 정확하게 황색포도상구균을 검출하는 기법을 개발하고자 하였다. coagulase 전구체를 coding하는 113 bp의 coa 유전자의 증폭, melting curve 분석 및 DNA염기서열을 분석하여 황색포도상구균 특유의 유전자 검출하는 기법을 개발하였다. 또한 분리된 균주중 메치실린에 내성을 나타내는 균주를 검출하고자 penicillin-binding protein, PBP2a (mecA)를 coding 하는 209 bp의 mecA 유전자의 증폭, melting curve 분석 및 DNA염기서열을 분석하여 메치실린내성 황색 포도상구균을 real-time PCR 기법으로 검출하는 기술을 개발하였다. 본 실험에 따르면 647개의 원유시료중 6개의 시료에서 황색포도상구균이 검출되었으며 이중 2개의 시료에서 분리된 황생포도상구균이 메치실린내성 황색포도상구균임을 확인하였다. 또한 DNA 검출한계는 10 fg으로 기존 PCR에 비해 매우 감도가 우수한 것을 확인하였다. 또한 3개의 원유시료에서 돼지나 소의 삼출성 피부염의 원인균인 Staphylococcus chromogenes가 분리되었다.
Staphylococcus xylosus는 일반적으로 포유동물의 피부에 존재하며 식품가공설비와 의료기기 등에서도 발견이 보고되었다. 본 연구에서는 강력한 생물막 생성 특성을 가지는 Staphylococcus xylosus S170의 전체 유전체 서열을 분석하여 보고한다. 이 유전체는 2,910,005 bp 크기, 2,674개의 단백질 코딩 서열과 22개의 rRNA, 57개의 tRNA유전자를 포함한다. 본 연구에서 제공하는 유전체 정보는 생물막 관련 유전자 분석으로 생물막 형성 기작을 좀 더 잘 이해하는데 도움이 될 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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