• 한국수정란이식학회지
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• 제16권2호
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• pp.139-144
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• 2001

본 연구는 숫소 개체별, 정자의 형태, 정자의 전처리 및 난자의 투명대부착과 미부착별로 현미조작에 의해 난자의 세포질내 단일정자를 주입했을 때 웅성전핵 형성율과 체외발생율을 조사하였다. 1. 숫소 개체별 정자를 이용하여 ICSI를 하였을 때 웅성전핵 형성율은 각각 73.9∼87.0%였고 체외발생율은 33.3∼60.9%를 나타냈다. 2. 신선 및 동결정자와 미부절단 정자와 두부, 미부손상 정자를 이용하여 ICSI를 하였을 때 웅성전핵 형성율은 각각 82.0%, 78.0% 42.2%, 51.1%였고, 체외발생율은 56.0%, 42.0%, 17.8%, 22.2%로서 신선정자를 이용했을 때가 다른 처리군에 비해 높은 전핵형성율과 체외발생율을 나타냈다. 3. 정자를 heparin, BFF, His, Ca Ionophore, I + caffeine 액으로 처리후 ICSI를 하였을 때 전핵 형성율은 66.7∼82.2%였고, 체외발생율은 33.3∼60.6%로서 I + caffeine 처리법이 다른 처리군에 비해 높게 나타났다. 4. 투명대 부착 난자 및 미부착 난자로 ICSI를 하였을 때 전핵형성율은 각각 80.0%, 72.0%였고, 체외발생율은 46.0%, 36.0%로서, 토명대부착 난자가 투명대 미부착 난자에 비해 높은 웅성전핵 형성율과 체외발생율을 나타냈다.

• 한국가축번식학회지
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• 제24권2호
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• pp.143-154
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• 2000

본 연구는 생식보조기법을 시행한 불임환자로부터 얻은 난자를 일반적인 수정법과 세포질내 정자직접주입법으로 수정을 유도한 다음 정상수정에 실패한 난자에 대한 미세소관과 염색체의 형태학적 차이를 laser scanning confocal microscope를 이용하여 비교분석하고자 실시하였다. 일반적 수정법 혹은 세포질내 정자직접주입법 실시 후 18시간째에 해부현미경 하에서 난자를 관찰하였을 때 전핵형성에 실패한 미수정란, 한 개의 전핵 또는 3개이상의 전핵의 형성이 관찰된 이상수정란으로 구분하여 연구를 실시하였다. 미세소관의 관찰을 위해서 (-tubulin antibody를 반응시킨 후 형광물질이 부착된 2차항체와 반응시킨 후 관찰하였으며 염색체의 관찰을 위해서는 propidium iodide로 염색한 다음 confocal microscope 하에서 관찰하였다. 연구결과 대부분의 난자는 수정과정중에 있었으나 일부의 난자에서는 특정단계에서 정지되어 있는 것이 관찰되었다. 즉, 감수분열 중기에서 정자의 침입이 이루어지지 않은 경우, 정자의 침입은 이루어졌으나 sperm aster 형성이 불완전한 경우, 웅성 및 자성전핵의 형성에 실패한 경우 및 전핵의 위치가 불완전한 경우 등이 관찰되었고 이들 난자의 경우 높은 비율로 미세소관과 염색체의 이상이 관찰되었다. 이상의 연구결과로 미루어 볼 때 생식보조기법의 시술과정에서 채취되는 난자의 수정실패의 원인은 세포골격기관 특히 미세소관의 이상과 염색체의 이상에 기인되는 것으로 사료되면 이러한 세포골격 구성물질의 이상에 대해서는 추후에 세포조직학적 또는 분자생물학적 분석이 필요하다고 하겠다.

• 한국가축번식학회지
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• 제24권4호
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• pp.439-449
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• 2000

본 연구에서는 정자와 외래유전자인 EGFP 유전자를 공배양한 후 정자직접 주입술로 난자를 수정시켜 EGFP 유전자의 발현을 조사하였다. 정자는 외래유전자의 도입이 용이하도록 동결융해, 0.03% Tween-20과 0.02%의 Triton X-100의 처리를 통하여 정자두부의 원형질막을 제거하여 공시하였다. 수정된 난자는 소 난관상피세포가 포함된 CR1aa 배양액에서 공배양을 통하여 체외발달시켰으며, 난자의 발달에 따라 EGFP 유전자의 발현을 형광 현미경 하에서 조사하였다. 원형질막이 제거된 정자로부터 수정란의 정상수정을 확인하기 위하여 18시간째 2PN 2PB를 조사한 결과, 발생율은 각각 DTT 처리구 44.6%, DTT와 Twen-20 처리구 48.4%, DTT와 동결융해 처리구 44.4%, 그리고 DTT와 Triton X-100 처리구 42.9%였다. 수정란의 초기 배 분할율은 DTT 처리구 49.1 %, DTT와 Tween-20 처리구 58.5%, DTT와 동결융해 처리구 43.9% 그리고 DTT와 Triton X-100 처리구 48.4%였으며, 배반포 형성율은 DTT 처리구 10.2%, DTT와 Tween-20 처리구 13.0%, DTT와 동결융해 처리구 6.8% 그리고 DTT와 Triton X-100 처리구 6.5%였다. 이들 발달된 수정란 중 도입된 EGFP 유전자의 발현율은 DTT 처리구 3.8%, DTT와 Tween-20 처리구 11.1%, DTT와 동결융해 처리구 13.8% 그리고 DTT와 Triton X-100 처리구 8.9%로 나타났으며, 대부분의 발현은 모자이크 형태로 관찰되었다. 따라서 본 연구의 결과에 의하면 소에서 원형질막을 제거한 정자와 외래유전자의 공배양과 이 정자의 난자내 직접도입법에 의해 외래유전자를 가진 형질전환 소 수정란과 형질전환 소 생산이 가능할 것으로 생각된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권1호
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• pp.95-99
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• 1997

Irreparable obstructive azoospermic patients can be treated successfully with microsurgical epididymal sperm aspiration(MESA) or testicular sperm extraction (TESE) by intracytoplasmic sperm injection(ICSI). Obstructive azoospermic patients generally have normal spermatogenesis. The aim of this study was to see if any spermatozoa could be retrieved from non-obstructive azoospermia and to assess the efficacy of ICSI with TESE in germinal failure. 42 non-obstructive azoospermic patients revealed no spermatozoa at all in their ejaculates, even after centrifuge. The histology of 42 patients revealed 15 Sertoli cell only Syndrome, 4 maturation arrest and 23 severe hypospermatogenesis. All patients underwent extensive multiple testicular biopsy for sperm retrieval. These patients were scheduled for ICSI using testicular spermatozoa. In 25 out of 42 non-obstructive azoospermic patients, spermatozoa were recovered from multiple testicular biopsy specimen and 11 ongoing pregnancies were achieved. There are usually some tiny foci of spermatogenesis which allow TESE with ICSI in non-obstructive azoospermia. Also these patients may have sufficient sperm in the testes for ICSI, despite extremely high FSH level and small testes.

• 대한수의학회지
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• 제40권2호
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• pp.403-414
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• 2000

To improve the semen production, the selenium(Se) and vitamin E(Vit. E) were administrated into Hanwoo young sire for intensification an antioxidant system and the taurine were supplemented into semen extender for improving the semen characteristics. The 16 heads ranging from twenty to thirty two months of age were randomly assigned to control group, Se-admistrated group(Se-group), Vit. E-administrated group(Vit. E-Group) and Se and Vit. E administrated group(Se and Vit. E-group). Se and Vit. E dministrated 3 times every 30 days by intramuscular injection. The administration of Se, Vit. E, and Se and Vit. E didn't affect on semen volume, sperm concentration, and total sperm number among all groups(p>0.05). Adiministration of Se improved sperm motility and viability. Motility of Se-group and control were 26.01% and 19.20%, respectively(p<0.05). Viability of Se-group(47.07%) was higher than control group(35.73%), Vit. E group(36.55%)(p<0.05). The administration of Se and Vit. E didn't affect sperm capacitation and acrosome reaction. The 100mM taurine supplement into semen extender increased the motility of frozen/thawed semen in the Vit. E-group(p<0.05) and had a beneficial effects on decreasing abnormality of frozen/thawed semen in all groups(p<0.05). These results indicate that Se administration improve sperm motility and viability, and the taurine supplement into semen extender decrease abnormality in Hanwoo young sire.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제51권3호
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• pp.205-212
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• 2024

Objective: Cyclophosphamide (CP) is an alkylating agent commonly used in cancer treatment. It is known to have detrimental effects on the reproductive system, including the potential to cause infertility. Recently, herbal remedies have gained traction as a complementary approach to addressing these side effects. In this study, our goal was to investigate whether the aqueous-alcoholic extract of Withania somnifera (WS) could mitigate the adverse impacts of CP on testicular tissue. Methods: Animals were randomly assigned to one of the following groups: control, WS (500 mg/kg), CP (100 mg/kg), CP+WS pre-treatment, and CP+WS post-treatment. WS was administered orally through gavage for 1 month. We assessed sperm parameters, testicular histopathology, and the expression of the Bax and Bcl2 genes in the experimental groups. Results: Sperm parameters (including count, viability, and motility), the number of spermatogonia, the seminiferous tubule diameter, and Bcl2 gene expression, significantly decreased after CP injection (p<0.05). Conversely, the number of immotile sperm and Bax gene expression significantly increased (p<0.05). Treatment with WS, especially when administered as a pre-treatment, ameliorated the sperm parameters, histological alterations, and the expression of apoptosis-related genes (p<0.05). Conclusion: The data suggest that WS may mitigate the detrimental effects of CP on testicular tissue by reducing apoptosis. Consequently, WS has the potential to be used as an adjunctive therapy to reduce the complications associated with CP treatment.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제35권2호
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• pp.131-141
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• 2008

목 적: 무정자증 불임부부에서 신선 (fresh) 고환정자 (testicular spermatozoa)와 냉동보존-융해(cryopreserved-thawed) 고환정자를 사용한 난자세포질내 정자주입술 (intracytoplasmic sperm injection, ICSI)의 결과를 비교하고자 하였다. 연구방법: 신선 고환정자 및 냉동보존-융해 고환정자를 사용하여 ICSI 시술을 시행하기로 계획된 총 109주기 (66명)를 대상으로 하였고 신선 고환정자를 사용하기로 계획한 군 (신선 고환정자군, fresh group)에는 92주기 (61명)이 포함되었고 냉동보존-융해 고환정자를 사용하기로 계획한 군 (냉동보존-융해 고환정자군, cryopreserved-thawed group)에는 17주기 (13명)가 포함되었다. 양 군간에 수정률, 착상률, 임신률, 유산률 등 ICSI 시술의 결과들을 비교하였고 통계학적 분석은 Mann-Whitney U 검정 및 Fisher의 정확한 검정을 적절하게 사용하였다. 결 과: 신선 고환정자를 사용하여 ICSI 시술을 시행하기로 계획된 총 92주기 중 9주기에서 고환정자를 추출할 수 없어 시술 주기가 취소되었다. 냉동보존-융해 고환정자군과 비교하여 신선 고환정자군에서 수정률이 높은 경향을 보였고 ($58.0{\pm}27.8%$ vs. $45.9{\pm}25.0%$, p=0.076) 양질의 배아 수는 통계적으로 유의하게 높았다 ($0.9{\pm}1.2$ vs. $0.2{\pm}0.5$, p=0.002). 그러나 임상적 임신율, 착상률, 유산율은 양 군간에 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 결 론: ICSI 시술을 위하여 냉동보존-융해 고환정자를 사용하는 경우 수정률 및 배아의 질이 감소하지만 임신율, 착상률, 유산율에는 영향을 미치지 않는 것으로 사료된다. 또한, ICSI 시술이전에 고환정자를 확보하고 냉동보존-융해 고환정자를 사용한다면 난자채취 당일 정자를 확보하지 못하여 주기를 취소하는 경우나 여성배우자의 불필요한 과배란유도를 줄일 수 있으며 반복적인 고환정자추출술로 인한 고환기능의 손상을 줄일 수 있는 유용한 방법으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제44권1호
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• pp.52-55
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• 2017

The aim of this study was to report a successful pregnancy using completely immotile frozen-thawed spermatozoa selected by laser. A single laser shot was used to detect the presence of viable immotile spermatozoa in fresh and frozen-thawed testicular spermatozoa. The viability rate was 55.8% after the laser detection, and cryopreservation was carried out immediately. The thawing test was performed on the day of oocyte pick-up, and no motile sperm were observed after extending the culture for another 4 hours, while a survival rate of 39.8% was detected using the laser. In all, five mature oocytes were injected, resulting in four cases of normal fertilization (80%) on day 1. Further, two high-quality day 3 embryos were transferred, which resulted in a singleton pregnancy. Our study demonstrates that completely immotile spermatozoa are worth cryopreserving for further intracytoplasmic sperm injection, which provides a new insight into male fertility preservation in cases of completely immotile spermatozoa.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제39권3호
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• pp.69-76
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• 2015

In a conventional sense, dried-spermatozoa are all dead and motionless due to the lost of their natural ability to penetrate oocytes both in vivo and in vitro. However, their nuclei are completely able to contribute to normal embryonic development even after long-term preservation in a dried state when the dried-spermatozoa are microinjected into the oocytes. In this sense, dried spermatozoa must still be alive. Thus, defining spermatozoa as alive or dead seems rather arbitrary. Several drying method of sperm including freeze-drying, evaporative/convective-drying and heat-drying were represented in this review. Although the drying protocol reported here will need further improvement, the results suggest that it may be possible to store the male genetic resources.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제19권4호
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• pp.253-258
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• 2015

Spermiation was stimulated in the mature grass puffer, Takifugu niphobles, with an injection of human chorionic gonadotropin (HCG) or carp pituitary extract (CPE). Spermatocrit and sperm density were reduced, but milt production was increased in both the HCG and CPE treatment groups relative to those in the control group (P < 0.05). These results should be useful for increasing the fertilization efficiency in grass puffer breeding programs.