• Fisheries and Aquatic Sciences
• /
• 제1권2호
• /
• pp.209-215
• /
• 1998

Trypsin-like enzyme was purified from shrimp hepatopancreas through Q-Sepharose ionic exchange, benzamidine Sepharose-6B affinity, and Superdex 75 gel chromatography. Purity of trypsin-like enzyme was increased 69-fold with $44\%$ yield. The enzyme consisted of a single polypeptide chain with a molecular weight (M.W.) of 32 kDa judged by sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The enzyme was completely inactivated by serine enzyme inhibitors such as soybean trypsin inhibitor (SBTI), tosyl-L­lysine chloromethyl ketone (TLCK), and leupeptin. However, the enzyme was not affected by tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) which is a chymotrypsin specific inhibitor. The enzyme had no activity against benzoyl-tyrosine ethyl ester (BTEE) which is a chymotrypsin specific substrate. The enzyme showed high activity on the carboxyl terminal of Phe, Tyr. Glu, Arg, and Asp. However. no activity was detected against the carboxyl terminal of Pro, Trp, Cys, Gly, Val, and Ala.

• EDISON SW 활용 경진대회 논문집
• /
• 제5회(2016년)
• /
• pp.86-89
• /
• 2016

The Zika virus, which is a member of the flavivirus genus, poses a serious threat to humanity because there is no vaccine or cure. Zika is suspected to cause microcephaly, and it is rapidly spreading throughout parts of Brazil. Surprisingly, there are no known protein structures for the virus which are essential for drug and vaccine development. This paper investigates the Zika virus's nonstructural proteins with template-based modeling by using GalaxyTBM/Refine/SC. GalaxyDock was used to examine the effectiveness of various known serine protease inhibitors in inhibiting the Zika viral protease. In testing five inhibitors, Kunitz soybean trypsin inhibitor showed the strongest binding affinity (-10.082 kcal/mol). This paper provides a rudimentary foundation for further drug discovery research regarding the Zika virus.

• 한국식품과학회지
• /
• 제30권5호
• /
• pp.1012-1017
• /
• 1998

진품콩에 함유된 lipoxygenase, urease, trypsin inhibitor, 탄닌, 피트산을 60, 80, $100^{\circ}C$로 열처리 하는 중의 함량변화를 조사하였다. lipoxygenase-1은 $60^{\circ}C$로 가열할 경우 100 분까지 활성이 있었으나, $80^{\circ}C$, $100^{\circ}C$에서는 20분과 10분 후에 활성이 없어졌다. lipoxygenase-2와 lipoxygenase-3의 활성은 없었다. urease활성은 $60^{\circ}C$로 100분을 가열하여도 초기와 비슷하였으나, $80^{\circ}C$에서는 20분, $100^{\circ}C$에서는 10분만에 완전히 불활성화 되었다. 트립신 저해제는 $60^{\circ}C$에서는 비교적 서서히 파괴되어 100분 후에는 58.6%가 활성이 없어졌으며, $80^{\circ}C$와 $100^{\circ}C$의 경우는 가열 초기에 급격히 파괴되지만, $20{\sim}30$분 후부터는 파괴 속도가 느려지면서 $80^{\circ}C$에서 100 분간 가열한 후에는 78.1%, $100^{\circ}C$에서 50분간 가열한 후에는 91.9%가 활성이 없어졌다. 열처리한 진품 콩에 있는 탄닌 함량은 열처리 중 다소 증가되었다. 피트산 양은 $60^{\circ}C$로 열처리 할 때 증가되었고, $80^{\circ}C$에서는 거의 변화가 없었고, $100^{\circ}C$로 50분 가열하였을 때는 감소하였다.

• 생명과학회지
• /
• 제29권7호
• /
• pp.774-778
• /
• 2019

성숙 콩[Glycine max (L.) Merr.] 종자에는 단백질, 지방, 탄수화물의 3대 영양소와 아이소플라본 등 다양한 기능성 성분이 함유되어 있다. 그러나, Kunitz Trypsin Inhibitor (KTI) 단백질, 렉틴 단백질, 난소화성 올리고당인 stachyose 성분이 함유되어져 있어 품질과 기능성을 저하시키고 있다. 본 연구는 콩 및 콩 제품의 품질과 기능성을 저하시키는 KTI 및 렉틴 단백질과 stachyose의 성분 함량과 관련된 유전자들이 모두 열성으로 작용하는 콩 계통(triple recessive genotype)을 선발하기 위하여 진행되었다. 3개의 모본(개척2호, PI200508, 14G20)을 이용한 육종집단으로부터 성숙 종자에서KTI 및 렉틴 단백질이 없으면서 stachyose의 함량이 일반콩보다 현저히 적은 triple recessive 유전자형(titilelers2rs2) 개체를 선발하였다. 선발된 계통의 초장은 51 cm 정도였으며 백립중은 31.0 g으로 대립이었으며 종피색 및 제색은 노란색이었다. Stachyose의 함량(g/kg)은 일반콩(13.5 g/kg)보다 훨씬 낮았다(3.8 g/kg). 본 연구를 통하여 선발된 계통은 KTI 단백질과 렉틴 단백질이 동시에 없으며 stachyose의 함량이 낮은 다양한 콩 품종 육성을 위한 중간모본으로 이용될 수 있을 것으로 사료되었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
• /
• 제12권8호
• /
• pp.1251-1257
• /
• 1999

Two experiments were conducted to determine the effects of roasting and extrusion on nutritional value of conventional and low-inhibitor soy beans for nurser-age pigs. In Exp. 1, 100 weaning pigs (7.5 kg average initial BW) were used in a 35-d growth assay to determine the effects of processing method (roasting in a Rast-A-Tron$^{TM}$ raster vs extrusion in an Insta-Pro$^{TM}$ extruder) on the nutritional value of Williams 82 soybeans with (+K) and without (-K) gene expression for the Kunitz trypsin inhibitor. Treatments were 48% soybean meal with added soybean oil, +K roasted, +K extruded, -K roasted and -K extruded. All diets were formulated to contain 3.5 Mcal DE/kg, with 0.92% lysine for d 0 to 14 and 0.76% lysine for d 14 to 35 of the experiment. The lysine concentrations were 80% of NRC (1988) recommendations to accentuate difference in response to protein quality and lysine availability. For d 0 to 14, pigs fed extruded soybeans (+K and -K) had greater ADG (p<0.001), ADFI (p<0.09) and gain/feed (p<0.01) than pigs fed roasted soybeans. For d 14 to 35 and overall, the same effects were noted, i.e., pigs fed extruded soybeans had greater ADG, ADFI and gain/feed than pigs fed roasted soybeans (p<0.03). Also, pigs fed -K soybeans were more efficient (p<0.008) than pigs fed +K soybeans. In Exp. 2, 150 weanling pigs (7.0 kg average initial BW) were used in a 35-d growth assay. All diets were formulated to contain 3.5 Mcal DE/kg, with 1.25% lysine for d 0 to 14 and 1.10% lysine for d 14 to 35 of the experiment. The lysine concentrations were formulated to be in excess of NRC recommendation to determine if differences in nutritional value of the soybean preparations could be detected in protein-adequate diets. For d 0 to 14 (p<0.06), 14 to 35 (p<0.03) and 0 to 35 (p<0.02), pigs fed extruded soybeans had greater ADG and gain/feed than pigs fed roasted soybeans. Apparent digestibilities of DM, N and GE were greater for diets with extruded soybeans than diets with roasted soybeans and diets with soybean meal and soybean oil were intermediate. The response to extrusion processing was greater with -K than +K soybeans, with pigs fed extruded -K soybeans having the greatest growth performance and nutrient digestibilities and lowest skin-fold thickness of any treatment. In conclusion, extrusion yielded a full-fat soy product of greater nutritional value than roasting. Also, selection against genetic expression of the Kunitz trypsin inhibitor improved nutritional value of the resulting soybean preparations.

• 한국수산과학회지
• /
• 제23권1호
• /
• pp.12-24
• /
• 1990

멘헤이든의 장기에서 황산암모늄염석, 친화성크 로마토그라피(Benzamidine-Sepharose 6B), 이온교환크로마토그라피 (DEAE-Sephacel), 겔여과크로마토그라피(Sephadex G-75)등의 정제과정을 거쳐 2종의 trypsin-유사효소를 정제하고 다른 혈압육어 trypsin의 성질과 비교 검토할 수 있는 효소학적 성질에 관하여 분석하였다. 이들 두 효소는 trypsin에 대한 선택성 합성기질인 $N\alpha$-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide ( BA-p-NA)를 분해하고, 이미 알려져 있는 trypsin 저해제 tosyl Iysyl chloromethyl ketone(TLCK), soybean trypsin inhibitor(SBTI), benzamidine, leupetin, antipain 등에 의하여 현저히 저해를 받으므로서 serine계의 trypsin임이 확증되었다. 이들 두 효소의 분자량은 겔여과법과 SDS-polya-crylamide 전기영동법에 의하여 trypsin A가 약 25,000, trypsin B가 약 26,200이었으므로 이미 밝혀진 혈압육어의 trypsin 중에서는 비교적 작았다. 이들 효소는 다른 혈압육어들에 비하여 염기성아미노산에 속하는 arginine과 Iysine이 다소 적었든 반면, 중성아미노산인 glycine과 alanine, 그밖에 tryptophan이 조금 많았다. 한편, 이들 효소는 BA-p-NA 기질에 대하여 $60^{\circ}C$전후, pH $8\~11$에서 최대활성을 보였으며, 산성 pH의 조건과 $40^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 극히 불안정하였다. 이들 두 효소의 BA-p-NA에 대한 Km 정수는 trypsin A가 $1.4\times10^{-4}M$, trypsin B가 $4.3\times10^{-5}M$였다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
• /
• 제43권3호
• /
• pp.359-366
• /
• 1996

연구배경 : 기관지천식 등의 알레르기 질환의 병인에 호산구는 중요한 역할을 하며 화학주성의 연구는 새로운 변조성분에 대한 호산구의 반응을 평가하는데 in vivo 실험에 앞서 유용한 방법론으로 쓰이고 있다. 탈과립화된 비만세포와 활성화된 T 림프구가 기관지 천식의 병태생리에 관계하며 tryptase는 비만세포의 활성화후 분비되는 단백분해효소 중 하나로써 호산구의 화학주성과 활성화에 영향을 미칠 것으로 생각된다. 본 연구의 목적은 단백분해효소의 대표격인 trypsin과 chymotrypsin이 호산구의 화학주성과 활성화에 어떤 역할을 하는지 알고자 함에 있다. 방법 : 호산구의 분리는 혼합된 과립구로부터 호중구를 제거하는 면역자기방법으로 하였고 화학주성은 multi-well micro-Boyden chamber로 정량하였으며 ECP 유리정량은 fluoroimmunoassay를 이용하였다. 결과 : 호산구는 trypsin에 화학주성을 보였고 최대의 반응이 $1000{\mu}g/ml$에서 $56.52{\pm}14.50$/HPF로 양성대조군인 PAF에 필적하였다. 반면 chymotrypsin에 대해서는 화학주성을 보이지 않았다. Trypsin으로 처리한 호산구의 ECP 분비능은 trypsin 10, 100, $1000{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군에 비하여 각각 2.7, 3.7, 6배 높았다. Soybean trypsin inhibitor로 전처치하였을 때 ECP의 분비능은 감소되었으며 $1000{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군과 유의차이가 없었다. 결론 : trypsin은 호산구에 화학주성을 일으킬 수 있으며 호산구를 활성화하여 호산구 과립단백의 하나인 ECP를 분비하게 한다고 사료된다. 반면 chymotrypsin은 호산구에 대한 직접적인 작용은 없는 것으로 보인다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제41권8호
• /
• pp.563-567
• /
• 1998

Computer aided molecular modeling can help to predict the three dimensional structure of the polypeptide without the sample. The study on soybean Bowman-Birk protease inhibitor (SBI) is valuable, because it has been recently known that SBI possesses anticarcinogenic activities and immune-stimulating properties. SBI has several isoinhibitors, whose isolation and characterization were reported in 1990. Among these, DII inhibits trypsin only. The different inhibitory specificities cannot be explained only by their different primary sequences, but is possible with further assistance by the study on their different three dimensional structures. The study on the three dimensional structure of DII using homology method is reported in this paper.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제42권4호
• /
• pp.310-316
• /
• 1999

대두가공제품 중에 존재하는 Bowman-Birk protease inhibitor(BBPI) 함량을 protease 저해활성 측정 및 경합 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)로 살펴보았다. 항체제조를 위한 BBPI는 ion exchange chromatography와 전기영동 후 gel slicing 방법으로 시판 soybean trypsin-chymotrypsin inhibitor로부터 순수, 분리하였다. 순수분리한 BBPI를 면역원으로 rabbit anti-BBPI antibody를 조제하였으며 단백질 농도별 titration방법으로 BBP에 비교적 선택적으로 결합하는 항체임을 확인하였다. 이를 이용한 경합 ELISA 방법으로 BBPI를 정량하기 위한 표준 정량곡선을 작성하였으며 시료용액중의 BBPI 함량이 $0.03{\sim}30\;{\mu}g/ml$ 범위일 경우에 정량적인 분석이 가능하였다. 대두품종별 chymotrypsin 저해활성은 $8,462{\sim}12,428\;U/g$이었으며 BBPI 함량은 $482{\sim}692\;mg%$ 이었다. 시판 대두 가공제품 중에서 5종의 콩나물은 건물량 기준으로 $10,695{\sim}13,249\;U/g$의 chymotrypsin 저해활성과 $529{\sim}803\;mg%$의 BBPI 함량을 나타내었으며 일부 두부제품에서도 68.9 mg%정도의 BBPI가 검출되었다. 그 밖의 두유, 된장, 고추장 및 간장 등의 대두발효식품, 탈지대두박 등에서는 chymotrypsin 저해활성 및 BBPI가 거의 검출되지 않았다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
• /
• 제24권1호
• /
• pp.88-95
• /
• 2011

An experiment was conducted to determine the standardized ileal digestibility (SID) of amino acids (AA) in four sources of full-fat soybeans (FFSB) and in one source of soybean meal (SBM). The FFSB had different concentrations of trypsin inhibitor units (TIU) and included two sources of conventional FFSB, and two sources of a soybean variety that was selected for a reduced concentration of the Kunitz trypsin inhibitor. The conventional FFSB was either low temperature-processed (LT-FFSB-CV; 37.7% CP, 35.4 TIU/mg) or high temperature-processed (HT-FFSB-CV; 40.5% CP, 4.4 TIU/mg). The low-Kunitz FFSB was also either low temperature-processed (LT-FFSB-LK; 36.2% CP, 23.5 TIU/mg) or high temperature-processed HT-FFSB-LK; (38.2% CP, 4.0 TIU/mg). The SBM contained 47.5% CP and 3.20 TIU/mg. Twelve weanling barrows (initial BW: $11.1{\pm}1.3\;kg$) were fitted with a T-cannula in the distal ileum. Pigs were allotted to a replicated $6{\times}6$ Latin square design with six diets and six periods per square. Five diets were prepared using each of the soybean sources as the only source of AA in the diet. An N-free diet was also included in the experiment to measure basal endogenous losses of AA. The two low temperature-processed FFSB had lower (p<0.05) AID and SID values for all indispensable AA than the two high temperature-processed FFSB and SBM. The SID values for all indispensible AA except Trp were greater (p<0.05) in LT-FFSB-LK than in LT-FFSB-CV, but the SID of AA in HT-FFSB-CV and HT-FFSB-LK were not different. The SID of AA in SBM were not different from the SID in HT-FFSB-CV and in HT-FFSB-LK. Results of this experiment show that a reduction of the TIU from 35.4 to 23.5 TIU/mg will improve the SID of AA, but this reduction is not sufficient to completely ameliorate the negative impact of trypsin inhibitors. Results also show that the SID of AA in high temperature-processed FFSB is similar to that in de-hulled SBM.