Kim, Soo-Jung;Lee, Jee-Young;Kim, Chung-Ho;Choi, Yang-Do
Applied Biological Chemistry
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v.38
no.5
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pp.387-392
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1995
To study the regulatory expression mechanism of soybean glycinin gone, Gy2, the 5' upstream region of the gene was searched for the presence of putative regulatory elements by nucleotide sequencing. It revealed various kinds of regulatory sequence elements commonly found in plant storage protein genes. There were canonical promoter sequences, TATA box (TATAAT) and AGGA box (GAAT) which are common in the 5' upstream region of the plant genes. The embryo factor binding sequence, RY repeat, CACA sequences, ${\alpha}$-conglycinin enhancer-like sequences were also found. To delineate the function of these sequences, 5' upstream deletion mutants of Gy2 were prepared and fused to the ${\alpha}$-glucuronidase (GUS) gene. Each chimeric construct was transferred into soybean protoplasts for transient assay, which led to the identification of the sequences between -281 and -223, -170 and -122, of Gy2 promoter as negative regulatory elements, and the sequences between -223 and -170, -122 and -16 as positive regulatory elements. These results are consistent in transformed tobacco plants as well. The serially deleted promoter fragments fused to the GUS were transformed into Nicotiana tabacum by Agrobacterium tumefaciens using the binary vector system. GUS activity of Gy2 promoter deletion constructs was detected only in seeds but not in leaves with different levels of expression as in transient assay. These results suggest that the glycinin Gy2 promoter drives a tissue-specific expression in transgenic tobacco plants.
Immature embryos of Glycine max L. was cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with 1 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D). After 6 to 8 weeks of culture, immature embryos produced somatic embryos. Of somatic embryos, two cotyledonary embryo (14%), one cotyledonary embryo (37%), fused cotyledonary embryo (43%), and stunted globular embryos (6%) were observed. The procambial strand of cotyledons originated from circular procambial tissues of lower hypocotyl. The circular procambial tissues were independently divided into one or two procambial strand at the edge of cotyledonary-node, and then connected to each cotyledon to form somatic embryos with one or two cotyledons. When cotyledon was a fused type, the circular procambial strand in lower hypocotyl was continuously connected to the cotyledon. Also, somatic embryos with two cotyledons developed a functional shoot apex with the tunica-corpus structure. In contrast, somatic embryos with one or fused cotyledon formed an abnormal shoot apex without the tunica-corpus structure or with non-dome shape in the inter-cotyledonary area. These results indicated that the variation of cotyledon in somatic embryos is closely related to procambial differentiation and shoot apical meristem development.
Kim, Young Jin;Park, Tae Il;Kim, Hyun Soon;Suh, Sug Kee;Kim, Hag Sin;Yun, Song Joong
Journal of Plant Biotechnology
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v.6
no.2
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pp.91-96
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2004
The use of liquid-medium-based procedure relative to the solid media led to a 4.5-fold increase in the number of cotyledon-stage embryos. The most efficient system for multiplication and regeneration of somatic embryos was CP6 procedure with the media MSD40/MSD20/MSM6AC/FNL0S3S3GM. However, the rate of regeneration was lower. About 71% of the embryos with dicotyledon were continued to develop the roots after desiccation treatment and 92% of the germinated embryos produced shoots in 10 days. Of the four morphologically different types of embryos, dicotyledonous ones showed a high frequency of conversion, while only a few with fused and horn type cotyledon developed shoots. Mature somatic embryos were desiccated in empty petri dishes for 12-72 h. Embryo survival rate was the highest after 12 h of desiccation, but maximal germination was observed at 24 h. After desiccation, they were placed on MS medium without growth regulators for germination. Germinating embryos were transferred to small pots with vermiculite for plant regeneration. The etiolating the plants during the growth was resolved to add 1% activated charcoal on hormone-free MS medium.
In order to detect the occurrence of aflatoxins in some suspecious Korean foodstuffs, 54 samples of Meju (a naturally inoculated soybean substrate for soy sauce and paste fermentation), 125 samples of Doenjang (a Korean-style fermented soybean paste), both produced at household level, and 31 samples of peanut were collected from 8 major cities of South Korea and subjected to assay by the official method of AOAC. The results were as follows: 1) Frequencies for the occurrence of aflatoxins in Meju, Doenjang and peanut were 7.4%(4/54), 8.8%(11/125) and none (0/31), respectively, in which Meju and Doenjang samples from Daegu and Busan showed the high ratio of the presence. 2) A Doenjang sample from Busan was found to contain the highest content of aflatoxins, of which $B_1,\;B_2,\;G_1\;and\;G_2$ were 66 ppb, 13 ppb, non-detectable and 5 ppb, respectively, while other samples detected were for $G_2$ only. 3) The identity of aflatoxin $B_1$ isolated from the Doenjang sample from Busan was confirmed by thin-layer chromatographic behavior, derivative formation and chicken embryo bioassay.
Seed coat anthocyanin can be purified by soaking 3 times in methanol solution supplemented with one percent of HCl. Anthocyanin content was very wide range in collected lines and average anthocyanin content of black seed coat lines was 15.07 permillage, but that of white mottled on brown seed coat lines was 0.31 permillage. In black seed coat lines green seed embryo type has more anthocyanin in amount compare to yellow seed embryo. Anthocyanin accumulation was promoted in late maturing lines compare to early maturing lines. Positive correlations were observed among 100 seed weight, days to flowering, days to growing and anthocyanin content, but negative correlation between days from flowering to maturity and anthocyanin content. Collected black seed coat lines were divided into two maturity groups. Group VI which has longer than group V in days to maturity accumulated more anthocyanin compare to group V. When the seeding date was May 15, highest anthocyanin content was observed.
This study was conducted to obtain the fundamental information on the relationship between sugar content variation and other major characteristics in colored-soybean strains collected in Korea. Sugar content varied from 8.3% to 12.1%, and averaged to be 10.1% in collected colored-soybean strains. On the basis of maturity, soybean growth types were distributed 0.5%, 1%, 5.7%, 16%, 19%, 22%, 14%, and 19% in maturity group 0 (less then 115 days), group I(116 to 123 days), group II (124 to 131 days), group III (132 to 139 days), groupIV(140 to 147 days), group V (148 to 155 days), group Ⅵ(156 to 163 days), and group Ⅶ(over 164 days), respectively. Most of colored-soybean strains were in the middle and late maturity group(maturityIII group toⅦ). Sugar content was tended to be higher in soybean seeds of late than early maturity group. Difference in sugar content was not present according to the seed coat color, whereas strains with bloom seed was higher in sugar content than those with non-bloom seed. Higher seed sugar content was shown in green seed embryo than yellow one. Total sugar content was correlated negatively with protein content (-0.29$^{**}$), positively with oil content (0.21$^{**}$) and growth period(0.36$^{**}$) in all collected colored-soybean strains, and within respective maturity group except early maturity group strains, total sugar content was correlated significantly with protein, oil, ADV, and other characteristics.stics.
Lipoxygenase activity of soybean seeds of approximately 507 genotypes as well as its inheritance and selection efficiency in early breeding generation was measured in the Department of Agronomy, Seoul National University to facilitate breeding for low lipoxygenase activity of soybean. Average seed lipoxygenase activity of 507 cultivars and strains was 350 unit (unit: $\Delta$0.01 /min. /mg at 234nm) and ranged from 50 to 670 unit. There was no difference in mean lipoxygenase activity according to apparent seed characters such as seed coat and embryo color. But early mature soybean genotypes had fairly low lipoxygenase activity. Lipoxygenase activity was inherited quantitatively, in which additive effect was greater than dominant one and proportion of gene with positive effects was similar to that with negative ones. Estimated narrow- and broad-sense heritabilities were 0.78 and 0.86 for lipoxygenase activity, respectively. Heritability measured from selection in early breeding lines for high or low lipoxygenase activity was 64~76% or 54~62%, respectively. And selection for high lipoxygenase activity increased by 29.7~44.7%, whereas that for low ones decreased by 21.8~27.3%, respectively, when compared to random population. Clear effect in selecting of lipoxygenase activity was present in early generation.
In order to determine and to reduce the differences between biochemical test method for the seed viability with T.T.C. (2, 3, 5. Triphenyl tetrazolium Chloride) reagent and germinator method, the topographical diagram of red colored formazan was carried out in 15-16 parts differences. From this resulted information, the classification of the typical staining reaction given for 3 species were derived into 3-4 parts for the germinable in normal seedling, the same as the following results. 1. Corn (Gram inaceae) * Entier embryo stained in bright red color. * Both extremities of scutellum unstained * Both extremities of scuttlium, coleorhiza and non-critial portions of radicle unstained. 2. Soybean (Leguminosae) *Seed completely stained in red color. *Minor unstained areas on cotyledons. *Extreme tip of radicle unstained; minor unstained areas on cotyledons 3. Radish (Cruciferae) *Seed completely stained. *Minor unstained areas on cotyledons. *Outer cotyledon mostly unstained: inner cotyledon completely stained Extreme tip of radicle unstained: large portion of outer cotyledon unstained.
For study about introduce of gene connected with disease and transformation system of gingseng, chitinase gene cloned from soybene and disease resistant gene were carried out for expression and transformation of plant using Agrobacterium. The disease resistance gene(DR-49), 35S-35S-AMV, has been constructed. The disease resistance gene and chitinase gene were introduced into the binary vector pRD 400, which were mobilized into Agrobacterium tumefaciens faciens strain MP 90 and LBA 4404 harboring disarmed Ti-plasmid. As a result of induce transformants using ginseng embryo and petiole, multi shoots were formed on MS medium supplemented 1 mg/ι 2,4-D and 0.5 mg/ι kinetin. Also transformation by cotyledonwas effective on MS medium supplemented 1 mg/ι 2,4-D and 0.5 mg/ι kinetin, transformation percent of disease resistant gene and chitinase gene were showed 18%, 14% respectively. As transformed tissue is under pre-embryoid condition, normal shoot is required through the process of matured embryo.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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