Measurement of compositions and somatic cells in raw milk by chemical methods usually requires a lot of time, skilled labor and expensive analytical equipments. Recently, near-infrared reflectance spectroscopy (NIRS), which is a rapid, cost-effective and non-destructive technique, has been extensively used for safety and quality evaluation in the field of dairy products. However, less study has been performed to evaluate the effect of transmitted light on milk quality during NIRS analysis. Therefore, the objective of this study was to analyze the changes in milk quality using transmitted light. Raw milk samples collected from dairy farm from Siga prefecture in Japan were analyzed for fat, protein, lactose, solids not fat, total solids, milk urea and citric acid using the Milko scan 4000. Somatic cells in raw milk samples were counted by the Fossomatic 5000. Transmittance spectra of 50 ml raw milk samples were obtained by the Lax-Cute lighter in the 400 nm or less, 689 nm, 773 nm, 900 nm and 979 nm. As a result, milk fat as well as somatic cell count was increased by 2.6% and 9.0%, respectively. The other compositions were, however, changed within the relative error of the measurement. Further studies are needed to apply raw milk quality evaluation using the UV band by accumulating more samples and more data.
This study was designed to examine the ability of the bovine (MII) oocytes cytoplasm to support several mitotic cell cycles under the direction of differentiated somatic cell nuclei of bovine, porcine, mouse and human. Bovine GV oocytes were matured in TCM-199 supplemented with 10% FBS. At 20h after IVM, recipient oocytes were stained with 5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ Hoechst and their 1st polar body (PB) and MII plate were removed by enucleation micropipette under UV filter. Ear skin samples were obtained by biopsy from an adult bovine, porcine, mouse and human and cultured in 10% FBS added DMEM. Individual fibroblast was anlaysed chromosome number to confirm the specificity of species. Nuclear transferred (NT) units were produced by electrofusion of enucleated bovine oocytes with individual fibroblast. The reconstructed embryos were activated in 5 $\mu$M ionomycin for 5 min followed by 1.9 mM 6-dimethylaminopurine (DMAP) in CR1aa for 3 h. And cleaved NT embryos were cultured in CR1aa medium containing 10% FBS on monolayer of bovine cumulus cell for 8 days. Also NT embryo of 4~8 cell stage was analysed chromosome number to confirm the origin of nuclear transferred somatic cell. The rates of fusion between bovine recipient oocytes and bovine, porcine, mouse and human somatic cells were 70.2%, 70.2%, 72.4% and 63.0%, respectively. Also, their cleavage rates were 60.6%, 63.7%, 54.1% and 62.7%, respectively, there were no differences among them. in vitro development rates into morula and blastocyst were 17.5% and 4.3% in NT embryos from bovine and human fibroblasts, respectively. But NT embryos from porcine and mouse fibroblasts were blocked at 16~32-cell stage. The chromosome number in NT embryos from individual fibroblast was the same as chromosome number of individual species. These results show that bovine MII oocytes cytoplasm has the ability to support several mitotic cell cycles directed by newly introduced nuclear DNA.
The present study compared the developmental potential, telomerase activity and transcript levels of X-linked genes (ANT3, HPRT, MeCP2, RPS4X, XIAP, XIST and ZFX) in the bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos derived from different age and cell cycle of female donor nucleus. In experiment 1, the fusion rate, cleavage rate to 2-cell stage, developmental rate to blastocyst stage, and the mean number of total and ICM cells was slightly increased in embryos cloned with fetal fibroblasts compared to those with adult fibroblasts, but there was no significantly (p<0.05) differences. Telomerase activity was also similar in blastocysts cloned with fetal and adult fibroblasts. Up-regulated RPS4X and down-regulated MeCP2, XIAP, and XIST transcript level were observed in blastocysts cloned with adult fibroblasts, compared to those with fetal fibroblasts. In experiment 2, the fusion rate, cleavage rate to 2-cell stage, developmental rate to blastocyst stage, and the mean number of total and ICM cells was significantly (p<0.05) increased in embryos cloned with fetal fibroblasts at early G1 phase of the cell cycle, compared to those of fetal fibroblasts at late G1 phase. DNMT1 transcript was observed to significantly (p<0.05) increased in the fetal fibroblasts at 3 hrs after trypsin treatment of confluent culture. Further, level of telomerase activity and transcribed X-linked genes was also significantly (p<0.05) higher in the early G1 SCNT blastocysts than those of late G1. The results imply that fetal fibroblasts at early G1 phase induces the enhanced developmental potential and up-regulated telomerase activity and X-linked gene, but aberrant transcript pattern of X-linked genes may be displayed in the SCNT embryos.
Four microsatellite DNA loci BM1818, BM1258, BM1443 and BM1905 associated with the somatic cell counts (SCC) in cow milk were analyzed for genetic variation in 240 Beijing Holstein cows. The PCR amplified products of microsatellites DNA were detected by non-denatured polyacrylamide gel electrophoresis. The number of alleles for BM1818, BM1258, BM1443 and BM1905 were 4, 5, 8 and 6 in Beijing Holstein cows, respectively. The allele size ranges for BM1818, BM1258, BM1443 and BM1905 were 274 bp to 286 bp, 92 bp to 106 bp, 154 bp to 170 bp and 187 bp to 201 bp, respectively. The polymorphism information content/effective number of alleles/heterozygosity for BM1818, BM1258, BM1443 and BM1905 were 0.3869/1.7693/0.4348, 0.5923/2.9121/0.6566, 0.7114/3.9012/0.7437 and 0.5921/2.8244/0.6459. These data showed the microsatellite DNA locus BM1443 has the highest variability, followed by BM1258, BM1905 and BM1818. The results of the least squares means analysis showed as follows: the least squares mean of SCC for BM1818 284 bp/284 bp was significantly lower than that for BM1818 286 bp/286 bp (p<0.05). The least squares mean of SCC for BM1258 100 bp/100 bp was significantly lower than that for BM1258 102 bp/102 bp, 106 bp/106 bp, 106 bp/104 bp, 106 bp/102 bp, 106 bp/100 bp, 104 bp/100 bp (p<0.05). The least squares mean of SCC for BM1443 166 bp/160 bp and 166 bp/166 bp was significantly lower than that for BM1443 170 bp/160 bp, 160 bp/157 bp, 165 bp/160 bp (p<0.05). The least squares mean of SCC for BM1905 187 bp/187 bp was significantly lower than that for BM1905 197 bp/195 bp, 193 bp/187 bp (p<0.05).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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