• 한국양식학회지
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• 제10권4호
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• pp.425-433
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• 1997

황해산 두족류 6종(참갑오징어, Sepia esculenta ; 쇠갑오징어, Sepiella japonica : 한치꼴뚜기, Loligo chinensis : 살오징어, Todarodes pacificus : 참꼴뚜기, Loligo beka : 낙지, Octopus minor)의 안구단백질을 추출하여 항원-항체 교차반응을 실시하였다. 쇠갑오징어, 살오징어와 낙지의 안구단백질로 항혈청(antiserum)을 제작하였으며 갑오징어목, 살오징어목 및 낙지목에 속하는 두족류 6종의 안구단백질을 항원(antigen)으로 사용하였다. 갑오징어목 속하는 쇠갑오징어 및 참갑오징어에서 항원-항체 반응 양상이 매우 뚜렷하였으며 종간 비교에 기준이 될 수 있고 또한 유의성있는 침강선을 볼 수 있었다. 또한 gel filtration chromatography 방법으로 살오징어의 안구단백질을 분획하여 crystallin을 분리하였으며, 주 분획을 SDS-PAGE 전기영동 방법으로 분자량을 추정해 본 결과 약 20-35 KDa 였다.

• 산업기술연구
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• 제28권B호
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• pp.59-63
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• 2008

Rapid production of therapeutic proteins such as angiostatin and endostatin angiogenic inhibititors has been highly demanded for cancer treatment. In this regard, recombinant human angiostatin and endostatin were successfully expressed as soluble forms by maltose binding protein (MBP)-mediated fusion expression in Escherichia coli. PCR amplified, angiostatin and endostatin genes from human placenta cDNA library were inserted into an expression vector pMAL-c2e to construct prokaryotic expression vectors, pMAL-c2e/AS and pMAL-c2e/ES, respectively. Recombinant angiostatin and endostatin were efficiently expressed in E. coli origami (DE3) after IPTG induction and protein expression were confirmed by SDS-PAGE analyses. The expressed recombinant proteins were purified near homogenity using an amylose affinty column chromatography. In contrast that previous E. coli expressions were all insoluble, our results first time demonstrated that MBP fused human angiostatin and endostatin were soluble in E. coli.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제47권5호
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• pp.624-629
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• 2009

분자진화방법을 이용하여 불용성 단백질을 가용성 단백질로 개량하고자 할 때 가장 중요한 과정은 발현 단백질의 세포 내 폴딩 및 용해도를 어떻게 측정하고 선별할 수 있는가에 있다. 본 연구에서는 ampicillin에 저항성을 가지는 beta-lactamase를 목적 단백질과 접합 형태로 발현하여 목적 단백질의 용해도를 측정 및 선별할 수 있는 방법을 구축하였다. 이를 위하여 먼저 beta-lactamase C-말단에 목적 단백질을 링커를 이용하여 접합단백질 형태로 발현시킬 수 있는 발현 시스템을 구축하였고, 구축된 발현시스템이 대장균의 ampicillin의 저항성을 향상시킴을 확인하였다. 구축된 발현시스템에 용해도가 비교적 높은 adenine deaminase와 aspartate aminotranseferase, 용해도가 매우 낮은 GlcNAc-2-epimerase 세가지 단백질의 유전자를 클로닝하여 Ampicillin 농도에 따라 목적 단백질의 용해도가 세포 성장에 미치는 영향을 조사하였다. Ampicillin 농도 $200{\mu}g/mL$에서 가용성 단백질인 adenine deaminase와 aspartate aminotranseferase의 접합 단백질 발현은 세포 성장을 보이는 반면, 불용성 단백질인 GlcNAc-2-epimerase 접합 단백질 발현은 세포 성장을 저해함을 확인하였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제37권2호
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• pp.151-158
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• 1994

Aleurone layers of normal and vp1 mutant maize kernels were extracted and centrifuged at 100,000g to yield a cytosol fraction. Binding of [3H]ABA cis, trans (＋)ABA to a soluble macromolecular components present in the cytosol was demonstrated by Sephadex chromatography and non-denaturing PAGE. The binding component was of high molecular weight and seems to be an aggregate of proteins. A rapid DEAE-cellulose filter method for assaying bound [3H]ABA to a soluble protein was adapted. Binding assays were performed with cytosol that had been preheated or incubated with several enzymes, indicating that heat and protease treatments disrupted the binding. This suggested that binding occurred to proteins. Some properties of the ABA binding proteins were described. The [3H]ABA binding were reduced dramatically when unlabeled ABA was added as a competitor, suggesting a specific binding of [3H]ABA. Gel filtration profiles and autoradiogram of [3H]ABA binding showed no difference in the binding components of Vp1 and vp1/vp1 mutant cytosol, indicating that Vp1 protein is not a sole ABA binding protein.

• 생명과학회지
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• 제9권2호
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• pp.146-152
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• 1999

본 연구에서는 대장균 트립토판 중합효소(tryptophan synthase) $\alpha$ 소단위체의 폴딩에 있어 24번 잔기의 역할을 보고자 하였다. 24번 잔기인 트레오닌이 메티오닌, 알라닌, 세린, 류신 또는 리신으로 치환된 단백질를 대장균내에서 과량 발현시켜 수용성 구조의 양과 비수용성인 inclusion body양을 조사하였다. 그 결과 메티오닌이나 류신으로 치환된 $\alpha$ 소단위체는 트레오닌이 있는 소단위체와 마찬가지로 수용성 구조가 대부분을 차지하였다. 반면, 세린이나 알라닌 또는 리신으로 치환된 단백질들은 많은 양이 inclusion body로 발현되었다. 이 결과는 트립토판 중합효소 $\alpha$ 소단위체의 폴딩에 있어서 24번 잔기가 관여하고 있음을 제시하고 있다.

• 한국식품과학회지
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• 제39권4호
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• pp.438-446
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• 2007

콩 발효식품인 청국장은 어느 정도는 그 기능성 때문에 많은 사람들이 선호하고 있다. 청국장의 발효 과정은 발효미생물이 분비하는 단백질 분해 효소를 포함하는 여러 효소들에 의해 이루어지기 때문에 발효기간 동안 청국장의 단백질체 분석은 발효의 최적화를 이루기 위해서 그리고 청국장에 생성되는 기능성물질 생성 과정을 이해하는 데 도움이 된다. 청국장의 수용성 단백질을 phenol/chloroform 추출 방법으로 분리하여 2-D gel 분석에 방해되는 물질들을 제거하였다. 각 발효 단계에서 단백질 분석을 하였을 때 20시간 안에 대부분의 단백질들이 작은 분자로 분해되었고 수용성 단백질에는 미생물 유래 단백질들이 점차 증가하였다. 청국장의 단백질 프로파일은 natto의 것과는 매우 다른 양상을 2-D gel 상에서 보였다. 각 gel에서 50개의 단백질을 임의로 선발하여 MALDI-TOF MS 분석을 하고 PMF로 단백질을 동정하였다. 결과는 콩이나 발효 미생물들의 유전체 정보가 부족하여 청국장에서 9종 natto에서 15종의 단백질만을 동정할 수 있었다. MS/MS 분석을 통한 아미노산 서열 분석을 통해 얻은 정보를 가지고 BLASTP 검색엔진으로 database를 검색한 결과 제한된 수의 단백질이 낮은 신뢰도 범위에서 동정되었다. 그렇지만 청국장과 같이 복잡한 단백질체를 분석하기에는 본 연구에서 고안한 전체 단백질 분리 기술과 2-D gel 분석적 접근은 단백질을 전체적으로 분석함에 있어 훌륭한 방법이다. 앞으로 청국장의 단백질 변화에 대한 연구는 의미 있는 변화를 보이는 소수의 단백질을 선발하고 이들에 대해 집중적으로 질량분석 하여 단백질을 동정하는 것이 필요하다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1998년도 공동 춘계학술대회
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• pp.51.1-51
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• 1998

No Abstract, See Full Text

• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제30권2호
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• pp.73-83
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• 2000

Polyethylene glycol (PEG) is a water soluble, biocompatible, non-toxic polymer and PEGylation is a well established technique for the modification of therapeutic proteins and peptides. PEG-protein drugs have been extensively studies in relation to therapies for various diseases: cancer, inflammation and others. The covalent attachment of PEG to proteins and peptides prolonged plasma half-life, reduced antigenicity and immunogenicity, increased thermal and mechanical stability, and prevented degradation by enzymes. Several chemical groups for general and site specific conjugation have been exploited to activate PEG for amino group, carboxyl group, and cysteine groups. PEGylation of many proteins and peptides have been studied to enhance their properties for the potential uses. Also, the different positional isomers in several PEG-proteins have shown the difference in vivo stability and biological indicating that the site of PEG molecule attachment is one of the important factor to develop PEG-proteins as potential therapeutic agents.

• Applied Biological Chemistry
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• 제23권1호
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• pp.23-30
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• 1980

분리된 간세포핵을 $[{\gamma}-32P]$ ATP와 5분간 $37^{\circ}C$ 에서 배양한 뒤 Chromatin 단백질의 32P labelling을 관찰했다. 32P labelling의 pattern을 48시간 단식상태 및 48시간 굶긴 쥐에게 탄수화물 농도가 높은 먹이를 준 다음 12시간 경과한 쥐와 streptozotocin으로 당뇨병을 유발시킨 쥐에 인슈린을 투여한 뒤 6시간 경과한 쥐의 세포핵으로부터 추출한 핵단백질을 sodium dodecyl sulfate 전기영동으로 조사하였다. 48시간 굶은 쥐의 간세포핵의 경우에서는 0.14M NaCl에 용해하는 단백질의 인산화 수준은 정상적으로 먹이를 준 쥐에 비하여 분자량이 $41,000{\sim}200,000$ daltons 사이의 단백질에서는 감소되었다. 48시간 굶긴 쥐에서 본 인산화 감소를 12시간 내에 역전시켜 정상적으로 먹이를 준 쥐에서 관찰한 인산화 수준에까지 끌어 올렸다. 폐놀용해성 핵단백질의 인산화 수준은 분자량이 59,000 daltons보다 큰 5단백질에서 48시간 굶긴 쥐에서 정상적으로 먹이를 준 쥐의 결과와 비교하였을 때 낮았다. 아울러 단식은 히스톤의 인산화도 감소되었다. Streptozotocin으로 당뇨병을 유발시킨 쥐에게 인슈린 주사를 준 다음 6시간 경과한 쥐의 인산화 수준은 0.14M NaCl 용해성 핵단백질중 분자량이 130,000 daltons 단백질과 페놀용해성 단백질의 경우에는 155,000 daltons 단백질에서 인슈린을 주지 않은 당뇨병을 가진 쥐와 비교하였을 때 증가를 보였다. 그러나 히스톤의 인산화 수준에는 큰 변화가 나타나지 않았다. 여기에 나타난 실험결과가 0,14M NaCl 용해성 핵단백질과 $H_1$ 히스톤의 인산화와 탈인산화가 다른 핵단백질에 선행해서 일어난다는 가능성을 시사해 주고 있다. 그리고 인슈린 신호가 핵단백질의 인산화와 관련이 있는 반면 그루카곤(glucagon)은 핵단백질의 탈인산화와 상관관계가 있음은 매우 흥미있는 사실이다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제39권sup2호
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• pp.231-237
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• 2009

Purpose: Cytolethal distending toxin (CDT) is a family of heat-labile cytotoxins produced by several gram-negative mucosa-associated pathogens, including Aggregatibacter actinomycetemcomitans. CDT is well known to be capable of inducing growth arrest, morphological alterations, and eventually death in various cells. CDT belongs to a tripartite $AB_2$ toxin (CdtB: the enzymatic A subunit; CdtA and CdtC: the heterodimeric B subunit). Previous studies proposed that CdtA and CdtC together bind to a cell surface receptor and glycolipids act as a receptor for A. actinomycetemcomitans CDT (AaCDT). In this study, recombinant CdtA and CdtC proteins of AaCDT were co-expressed in a bacterial expression system and tested for their affinity for $GM_1$ ganglioside. Methods: The genes for CdtA and CdtC from A. actinomycetemcomitans Y4 were utilized to construct the expression vectors, pRSET-cdtA and pET28a-cdtC. Both CdtA and CdtC proteins were expressed in Escherichia coli BL21(DE3) and then purified using hexahistidine (His6) tag. The identity of purified protein was confirmed by anti-His6 antibody and monoclonal anti-CdtA antibody. Furthermore, the affinity of recombinant protein to $GM_1$ ganglioside was checked through ELISA. Results: Recombinant CdtA and CdtC proteins were expressed as soluble proteins and reacted to anti-His6 and monoclonal anti-CdtA antibodies. ELISA revealed that purified soluble CdtA-CdtC protein bound to $GM_1$ ganglioside, while CdtA alone did not. Conclusions: Co-expression of CdtA and CdtC proteins enhanced the solubility of the proteins in E. coli, leading to convenient preparation of active CdtA-CdtC, a critical material for the study of AaCDT pathogenesis.