• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권7호
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• pp.1069-1076
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• 2010

A novel laccase from Tricholoma mongolicum was purified by using a procedure that entailed ion-exchange chromatographies on DEAE-cellulose, CM-cellulose, and Q-Sepharose, and FPLC-gel filtration on Superdex 75. The purified enzyme was obtained with a specific activity of 1,480 U/mg-protein and a final yield of 15%. It was found to be a monomeric protein with a molecular mass of 66 kDa as estimated by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Its N-terminal amino acid sequence was GIGPVADLYVGNRIL, similar to some but also different to other mushroom laccases. The optimum pH and temperature for the purified enzyme were pH 2 to pH 3 and $30^{\circ}C$, respectively. It displayed a low $K_m$ toward 2,7-azinobis (3-ethylbenzothiazolone-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS) and high $k_{cat}/K_m$ values. The purified laccase oxidized a wide range of lignin-related phenols, but exerted maximal activity on ABTS. It was significantly inhibited by $Hg^{2+}$ ions, and remarkably stimulated by $Cu^{2+}$ ions. It inhibited HIV-1 reverse transcriptase and proliferation of hepatoma HepG2 cells and breast cancer MCF7 cells with an $IC_{50}$ of 0.65 ${\mu}M$, 1.4 ${\mu}M$, and 4.2 ${\mu}M$, respectively, indicating that it is also an antipathogenic protein.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제12권1호
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• pp.39-45
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• 2002

Activity staining on the native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) of a cell-free extract of Rhodococcus sp. TK6, grown in media containing alcohols as the carbon source, revealed at least seven isozyme bands, which were identified as alcohol dehydrogenases that oxidize cyclohexanol to cyclohexanone. Among the alcohol dehydrogenases, cyclohexanol dehydrogenase II (CDH II), which is the major enzyme involved in the oxidation of cyclohexanol, was purified to homogeneity. The molecular mass of the CDH II was determined to be 60 kDa by gel filtration, while the molecular mass of each subunit was estimated to be 28 kDa by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The CDH II was unstable in acidic and basic pHs, and rapidly inactivated at temperatures above $40^{\circ}C$ . The CDH II activity was enhanced by the addition of divalent metal ions, like $Ba^2+\;and\;Mg^{2+}$. The purified enzyme catalyzed the oxidation of a broad range of alcohols, including cyclohexanol, trans-cyclohexane-1,2-diol, trans-cyclopentane-l,2-diol, cyclopentanol, and hexane-1,2-diol. The $K_m$ values of the CDH II for cyclohexanol, trans-cyclohexane-l,2-diol, cyclopentanol, trans-cyclopentane-l,2-diol, and hexane-l,2-diol were 1.7, 2.8, 14.2, 13.7, and 13.5 mM, respectively. The CDH II would appear to be a major alcohol dehydrogenase for the oxidation of cyclohexanol. The N-terminal sequence of the CDH II was determined to be TVAHVTGAARGIGRA. Furthermore, based on a comparison of the determined sequence with other short chain alcohol dehydrogenases, the purified CDH II was suggested to be a new enzyme.

• 대한의생명과학회지
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• 제15권1호
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• pp.37-45
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• 2009

Insect cell cultures have become important tools in the production of biological substances for use in a variety of research, human and veterinary medicine, and pest control applications. These applications often require the introduction of foreign DNA into the cells and have generally used methods originally developed for use with human and other mammalian cell cultures. While these methods can be successfully employed, they are often less efficient with insect cells and frequently involve complex procedures or require specialized equipment. Even when they do work, they may require substantial modification because of differences in the culture medium or growth patterns of insect cells. In this study, We have optimized transfection conditions of Sf9 cell line using insect expression vector pIZT/V5-His which expresses green fluorescent protein effectively. Human stem cell factor (hSCF) is a glycoprotein that plays a key role in hematopoiesis acting both as a positive and negative regulator, often in synergy with other cytokines. It also plays a key role in mast cell development, gametogenesis, and melanogenesis. It can exist in membrane-bound form and in proteolytically released soluble form. As determined by an enzyme-linked immunosorbent assay performed, hSCF level in supernatant averaged 995ng/ml. The human hSCF was partially purified by immunoaffinity chromatography and analyzed with sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and immunoblotting. The results show that the hSCF has N-linked carbohydrate and corresponds to the soluble form, at or about 223 amino acids in length. The findings suggest functional importance for soluble hSCF in cells.

• 대한화학회지
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• 제57권6호
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• pp.703-711
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• 2013

In the present investigation, kinetic studies of oxidation of formic acid with and without catalyst and promoter in aqueous acid media were studied under the pseudo-first order conditions [formic acid]T ${\gg}[Cr(VI)]_T$ at room temperature. In the 1,10-phenanthroline (phen) promoted path, the cationic Cr(VI) phen complex is the main active oxidant species undergoes a nucleophilic attack by the substrate to form a ternary complex which subsequently experiences a redox decomposition through several steps leading to the products $CO_2$ and $H_2$ along with the Cr(III) phen complex. The anionic surfactant (i.e., sodium dodecyl sulfate, SDS) and neutral surfactant (i.e., Triton X-100, TX-100) act as catalyst and the reaction undergo simultaneously in both aqueous and micellar phase with an enhanced rate of oxidation in the micellar phase. Whereas the cationic surfactant (i.e., N-cetyl pyridinium chloride, CPC) acts as an inhibitor restricts the reaction to aqueous phase. The observed net enhancement of rate effects has been explained by considering the hydrophobic and electrostatic interaction between the surfactants and reactants. The neutral surfactant TX-100 has been observed as the suitable micellar catalyst for the phen promoted chromic acid oxidation of formic acid.

• 대한환경공학회지
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• 제27권8호
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• pp.787-798
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• 2005

본 연구에서는 폐광산지역에서 발생되는 폐기물인 광미를 대상으로 토양세척공정을 이용하여 다양한 세척용매와 농도, 그리고 추출시간에 따른 중금속의 추출특성을 파악하였다. 세척용매로는 물, HCl(0.1, 0.3, 1.0 N), EDTA(0.01, 0.05, 0.1 M), SDS(0.1, 0.5, 1.0%)를 이용하였다. 그 결과, 물과 SDS 용매에서 Zn과 Cd이 Pb과 Cu보다 높은 추출효율을 보였지만, 전체적으로는 1%이하로 중금속의 추출에 효과적이지 못하였다. 그러나, SDS에서 Pb과 Cu의 추출효율은 추출시간이 길어질수록 증가하였다. HCl과 EDTA를 이용한 중금속의 추출은 물과 SDS보다 빠른 추출경향을 보였고, 대부분의 중금속이 6시간 이내에 추출되었으며 용매의 농도와 무관하였다. 6시간 이후에는 느린 추출경향을 보였지만 세척용매의 농도에 따라 좌우되었다. 또한, 용매의 농도가 증가할수록 추출경향은 빨라졌고, 추출 효율도 증가하였다. 추출효율은 1.0 N HCl에서 Cd>Pb>Zn>Cu로, 0.1M EDTA에서 Pb>Cd>Zn>Cu 순으로 높았다. 농도증가에 따른 추출효과는 HCl에서 Pb이, EDTA에서 Pb과 Cd이 가장 컸으며, 중금속제거를 위한 6시간이상의 추출은 비효과적이었다.

• BMB Reports
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• 제39권2호
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• pp.216-222
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• 2006

In the present study, we compared six different solubilization buffers and optimized two-dimensional electrophoresis (2-DE) conditions for human lymph node proteins. In addition, we developed a simple protocol for 2-D gel storage. Efficient solubilization was obtained with lysis buffers containing (a) 8M urea, 4% CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl) dimethylammonio]-1-propanesulfonate), 40 mM Tris base, 65 mM DTT(dithiothreitol) and 0.2% carrier ampholytes; (b) 5M urea, 2M thiourea, 2% CHAPS, 2% SB 3-10 (N-decyl-N, N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate), 40mM Tris base, 65 mM DTT and 0.2% carrier ampholytes or (c) 7M urea, 2M thiourea, 4% CHAPS, 65 mM DTT and 0.2% carrier ampholytes. The optimal protocol for isoelectric focusing (IEF) was accumulated voltage of 16,500 Vh and 0.6% DTT in the rehydration solution. In the experiments conducted for the sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), best results were obtained with a doubled concentration (50 mM Tris, 384 mM glycine, 0.2% SDS) of the SDS electrophoresis buffer in the cathodic reservoir as compared to the concentration in the anodic reservoir (25 mM Tris, 192 mM glycine, 0.1% SDS). Among the five protocols tested for gel storing, success was attained when the gels were stored in plastic bags with 50% glycerol. This is the first report describing the successful solubilization and 2D-electrophoresis of proteins from human lymph node tissue and a 2-D gel storage protocol for easy gel handling before mass spectrometry (MS) analysis.

• 공업화학
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• 제16권5호
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• pp.664-671
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• 2005

Alkyl ethoxylates, 비이온 계면활성제, 물, d-limonene으로 이루어진 3성분 계에 보조계면활성제를 첨가한 경우, 단일상의 마이크로에멀젼이 보다 낮은 온도와 넓은 온도 영역에서 형성되었다. 특히 n-propanol을 LA-7 계면활성제계에 첨가할 경우 가장 넓은 온도 영역에서 단일상의 마이크로에멀젼이 형성되며, 보조계면활성제/계면활성제 비율이 0.3 이상인 조건에서 단일상의 마이크로에멀젼이 형성되기 시작하였다. 음이온 계면활성제 SDS를 첨가한 혼합 계면활성제 계의 경우, $30{\sim}65^{\circ}C$까지의 온도 영역에서 단일상의 마이크로에멀젼을 형성함으로써 비이온 계면활성제 계의 온도 변화에 따른 민감성을 저하시킬 수 있었다. 또한 형성된 단일상의 마이크로에멀젼은 $30{\sim}60^{\circ}C$의 온도 영역에서 pH와 경도에 대한 영향을 받지 않으며, 산화방지제에 대한 영향도 매우 작았다. 보조계면활성제와 첨가제 등에 대한 상평형 실험을 통하여 선정한 후보 세정제들은 $30{\sim}40^{\circ}C$의 온도에서 abietic acid에 대한 우수한 세정력을 나타내었다.

• 공업화학
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• 제16권5호
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• pp.677-683
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• 2005

AEO계 비이온 계면활성제를 주체로 한 세정제 시스템에서 탄화수소 용제가 단일상의 마이크로에멀젼 형성 및 세정력에 미치는 영향을 살펴보았다. 용제로 사용한 포화탄화수소의 사슬 길이가 길어질수록 마이크로에멀젼을 형성하는 온도 영역이 넓어졌으며, $35{\sim}60^{\circ}C$의 온도 조건에서 첨가한 보조계면활성제 조성에 상관없이 단일상의 ${\mu}E$이 존재하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 본 실험에서 사용한 탄화수소 중에서 사슬 길이가 가장 큰 헥사데칸을 용제로 사용할 경우, 보조계면활성제 이소프로판올을 첨가하지 않은 경우에도 단일상의 O/W ${\mu}E$이 넓은 온도 영역에 걸쳐서 존재하였다. 상평형 실험을 통하여 선정한 단일상의 마이크로에멀젼을 주체로 한 후보 세정제 시료들은 $40^{\circ}C$에서 abietic acid에 대한 우수한 세정력을 나타내는 것을 세정 실험을 통하여 확인할 수 있었다.

• 한국식물병리학회지
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• 제1권1호
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• pp.3-11
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• 1985

TMV-OM계통을 접종하여 고온처리시킨 Samsun으로부터 3종의 약독변이계통 Tg 5272, Tw 227 및 Tw 333을 유기시켰다. 이들 약독바이러스는 담배 및 고추에 가벼운 mottling 증상이나 무증징으로 감염되어 TMV-OM에 의한 모자이크, 기형, 위축현상 등을 나타내지 않고 건전식물과 비교하여 생육에 거의 차이를 보이지 않았다. 또한 국부병반기주에 감염되었을 때에도 원주에 비해 전반적으로 미약한 반응을 나타냈고, 특히 Tw 227 및 Tw 333은 N. glutinosa, D. stramonium 및 G. globosa에서 매우 특이한 병징을 나타냈다. 약독바이러스의 물리적 성질 및 TMV-OM 항혈청에 대한 혈청학적 성질의 차는 인정되지 않았다. 한편 약독바이러스를 둔화하였을 때, 약독바이러스의 농도는 TMV-OM에 비해 매우 낮았으나, 이들 바이러스의 자외선흡수 및 전기영동패턴에는 차이를 보이지 않았다.

• 생명과학회지
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• 제28권1호
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• pp.78-82
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• 2018

본 연구에서는 미생물 검출용 바이오센서 제작을 위해 재조합 람다 파아지 꼬리 단백질 J을 센싱 요소로 활용가능한지를 조사하였다. 융합 단백질의 입체 장애를 최소화하기 위해 J 단백질 절편의 N-말단을 6X His-tag로 융합하고 HisTALONTM 컬럼으로 정제하였다. 정제 단백질은 약 38 kDa 크기를 SDS-PAGE에서 나타내며 anti-His 단클론 항체와 반응하였다. Anti-His 단클론 항체는 6HN-J를 처리한 E. coli K-12와 특이적으로 결합하나 BSA 처리하거나 6HN-J 처리한 다른 미생물들(Salmonella typhimurium, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa)과는 결합되지 않음을 보여주었다. 또한 정제 단백질과 숙주세포의 결합은 온전한 람다 파아지의 in vivo 숙주 표면 흡착을 약 $1{\mu}g/ml$ 단백질 농도에서 50%, $25{\mu}g/ml$ 단백질 농도에서 거의 완전히 방해하였다. 결론적으로 재조합 6HN-J 단백질은 탁월한 선택성과 선별성으로 인해 바이오센서의 제작에서 센싱 요소로 활용 가능함을 시사한다.