• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권11호
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• pp.1881-1890
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• 2016

Manganese superoxide dismutase (MnSOD) is a vital enzyme that protects cells from free radicals through eliminating superoxide radicals ($O^{2-}$). Hirudin, a kind of small active peptide molecule, is one of the strongest anticoagulants that can effectively cure thrombus diseases. In this study, we fused Hirudin to the C terminus of human MnSOD with the GGGGS linker to generate a novel dual-feature fusion protein, denoted as hMnSOD-Hirudin. The hMnSOD-Hirudin gene fragment was cloned into the pET15b (SmaI, CIAP) vector, forming a recombinant pET15b-hMnSOD-Hirudin plasmid, and then was transferred into Escherichia coli strain Rosetta-gami for expression. SDS-PAGE was used to detect the fusion protein, which was expected to be about 30 kDa upon IPTG induction. Furthermore, the hMnSOD-Hirudin protein was heavily detected as a soluble form in the supernatant. The purification rate observed after Ni NTA affinity chromatography was above 95%. The hMnSOD-Hirudin protein yield reached 67.25 mg per liter of bacterial culture. The identity of the purified protein was confirmed by western blotting. The hMnSOD-Hirudin protein activity assay evinced that the antioxidation activity of the hMnSOD-Hirudin protein obtained was $2,444.0{\pm}96.0U/mg$, and the anticoagulant activity of the hMnSOD-Hirudin protein was $599.0{\pm}35.0ATU/mg$. In addition, in vitro bioactivity assay showed that the hMnSOD-Hirudin protein had no or little cytotoxicity in H9c2, HK-2, and H9 (human $CD_4{^+}$, T cell) cell lines. Transwell migration assay and invasion assay showed that the hMnSOD-Hirudin protein could suppress human lung cancer 95-D cell metastasis and invasion in vitro.

• 한국식품영양과학회지
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• 제27권6호
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• pp.1105-1109
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• 1998

The superoxide dismutase(SOD) in peeled pericarp of cucumber was most stable at pH 8.0 and relatively stabe between pH 5.0 and 9.0. The enzyme was stable up to 6$0^{\circ}C$ and retained 12% by heat treatment at 10$0^{\circ}C$ for 5 min. At pH 2.0, the peeled pericarp enzyme activity was decreased to 10% by incubation for 3 hrs. However, the enzyme activity was increased above 25% after incubating the enzyme at pH 7.0 for 6 hrs. Retention of SOD activity in cucumber by various heating methods was also measured. The residual SOD activities of peeled pericarp and whole cucumber was estimated to be 25% and 27% after blanching(2 min), respectively. The skin enzyme retained 53% of its activity after steaming (3 min). When the peeled pericarp enzyme was incubated at 4$^{\circ}C$ for 20 days, the enzyme activity remained about 81%. However, when the enzyme incubated at 3$0^{\circ}C$ for 20 days, the peeled pericarp enzyme activity decreased to 17% of its original activity. The enzyme activity of peeled pericarp cucumber was not changed after exhaustive dialysis for 3 days, which indicated that the SOD activity in cucumber seems to have molecular weight above 12,000.

• 한국동물학회지
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• 제37권3호
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• pp.466-472
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• 1994

Culexpfpfens pollens에 존재하는 superoxide dismutase의 연구를 위한 적정 분석 조건과 우화 전후. 시간 경과에 따른 superoxide dismutase 활성 경향에 대해서 연구하였다. C. pipiens에 존재하는 superoxide dismutase의 활성은 부화 직후부터 지속적으로 감소하다가. 우화 후 흡혈 자극에 의해서 급격하게 증가한다 흡혈 후 36시간이 경과했을 때. 최대의 논성도를 보인 후 급격히 감소하였다. 기관별 분석에서 흡혈 후 가장 높은 활성 증가는 중장에서 일어나고, 머리 흥부. 지꼴체 및 난소에서도 활성의 증가가 나타났다. 흡혈 전에는 2개의 동위효소(SOD-1, soD-2)가 존재하였으나. 흡혈후 36시간된 성체에서는 3개의 동위효소 밴드가 보이는데, 머리에서는 SOD-1만이 나타나고, 가슴에서는 SOD-2. 지방체와 난소에서는 SOD-1과 SOD-2이 존재하였고. 중장에서는 SOD-3가 나타났다. 그러므로 흡혈 후 나타나는 새로운 동위효소는 중장에서 합성됨을 알 수 있다.

• 대한방사선치료학회지
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• 제9권1호
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• pp.106-112
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• 1997

MDCK 세포를 한국 세포주 은행으로부터 분주 받아 배양한 후 저선량 gamma선 조사에 대한 세포수준에서 방사선 효과를 알아보기 위하여 세포 증식능의 변화, Superoxide dismutase(SOD)와 catalase, FOX I의 함량 변화를 측정 검토하였다. 그결과, 저선량의 방사선를 조사했을 때, 세포의 증식능은 방사선 조사후 2시간에서 10 cGy는 $95.1\%$, 50cGy는 $96.4\%$로 대조군보다 약간의 감소가 나타났으나, 24시간 후에서 10cGy는 $96.7\%$, 50cGy는 $73.1\%$로 선량이 증가함에 따라 세포 증식능은 감소하였다. 저선량 조사에 의한 MDCK 세포의 SOD 활성도는 전반적으로 증가하였고, Mn-SOD 활성 역시 증가하였다. 세포 내의 $H_{2}O_2$의 양을 측정한 FOX I에서 선량이 증가함에 따라 감소하였으며 catalase 효소의 함량은 대조군보다 증가되는 경향을 보였다. 이와 같은 결과로 볼 때 저선량 방사선 조사에 대한 효과는 세포내부의 자체적인 방어기작의 발현으로 인한 결과라고 생각된다.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제10권2호
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• pp.151-155
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• 2005

This study was intended to investigate the effects of regular swimming exercise and vitamin C supplementation on the antioxidant system following exercise stress. For the swimming exercise experiment, a swimming adaptation exercise of 1 week was given to a group of 6-week-old mice. Following this, a swimming exercise for 8 weeks was conducted. The experimental group was divided into 3: a control group (C), a swimming exercise trained group (T), and a group of swimming + vitamin C supplementation (TC: vitamin supplementation: 1.3 mg/l00 g diet). After the swimming exercise, these group were further divided into those that had received the exercise stress for 2 hours and those that had not experienced exercise stress group. Then, the activities of the superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) and malondialdehyde (MDA) concentrations were measured. There was a lower weight increase in the T and TC groups than in the C group, and there was no significant difference between T and TC group. When exercise stress was not experienced, the activity of SOD was significantly increased in the TC group than in the T group, but there was no significant difference between C and T groups. The groups that had experienced a 2-hour exercise stress showed the SOD activity levels according to the following order, C < T < TC, with a significant difference between the three groups (p<0.05). There was no difference in MDA concentration amongst the experimental groups in non-exercise stress group. As well, there was no differences in MDA concentration between the C group and T group in the 2 hour exercise stress group. However, the TC group showed a MDA concentration level significantly lower than that of the T group. A significant increase in MDA concentration was observed in C group, when exercise stress was provided with no significant difference in the T and TC groups. As a result, regular exercise and vitamin C supplementation can be considered important in controlling the formation of lipid peroxides in exercise stress.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제30권4호
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• pp.399-403
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• 2003

환경스트레스에 대한 항산화효소의 보호효과를 이해하고 효과적인 스트레스내성 식물을 개발하기 위하여 CuZnSOD와 APX를 엽록체에 발현시킨 형질전환식물체 (CA식물체)에 강한 빛 (highlight, 1,100$\mu$mol m$^{-2}$ sec$^{-1}$)과 4$^{\circ}C$ chilling을 처리하였다. CA식물체 잎절편에서의 보호효과를 CuZnSOD을 도입한 SOD식물체, APX을 도입된 APX식물체 및 비형질전환식물체 (NT식물체)의 것과 비교하였다. CA식물체의 광계2에서의 광합성 효율 (Fv/Fm)은 highlight와 4$^{\circ}C$ chilling복합처리 1시간째에서 NT식물체에 비해 약 15%의 보호효과를 나타내었고, 광계1에서의 P700 redox state는 처리 후 3시간째에 약 23%의 보호효과를 나타내었다. SOD식물체와 APX식물체의 복합처리에 대한 보호효과는 CA식물체와 NT식물체의 중간 효과를 나타내었다. 이러한 결과는 엽록체에서 CuZnSOD와 APX의 동시발현이 highlight와 chilling에 의한 산화스트레스를 극복하는 데 매우 중요하게 관여함을 직접적으로 제시하는 것이다.

• 한국가축번식학회지
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• 제25권4호
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• pp.327-337
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• 2001

본 연구는 superoxide dismutase (SOD)가 동결-응해 돼지정자의 lipid peroxidation과 체외수정능력에 미치는 영향을 검토하였다. 그 결과 동결-응해 정자는 10 units/$m\ell$의 SOD가 첨가된 배양액에 의해 처리했을 때 가장 높은 정자생존율을 나타냈으나 서로 다른 농도에 의한 차이는 인정되지 않았다. 그러나 SOD농도에 관계없이 정자처리 직후의 생존율은 120분간 배양 후에 비해 유의적(P＜0.05)으로 높은 생존율을 나타냈다. 또한 정자처리 후 배양시간이 0, 60 및 120분으로 길어짐에 따라 정자의 첨체반응 유기율이 증가하였지만 SOD 첨가 또는 무첨가구 사이에서 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 한편, 체외수정시 1 unit/$m\ell$의 SOD를 첨가한 경우 0, 10 및 100 units/$m\ell$ 첨가시 보다 유의적(P＜0.05)으로 높은 정자침입율을 나타냈으며, 10과 100 units/$m\ell$의 SOD 첨가시 낮은 다정자 침입율을 나타냈다 (P＜0.05). 정자의 peroxidation은 malondialdehyde의 생성에 기초를 두고 평가하였는데 SOD 무첨가에 비해 첨가농도가 높아질수록 malondialdehyde의 생성이 낮아졌지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 또한 동결-융해된 정자는 sulfhydrl(-SH) group의 용량을 측정한 결과 SOD무첨가시 보다 첨가시 높은 용량이 측정되었지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 한편, 동결-융해된 정자가 체외에서 성숙시킨 난자의 투명대에 접착하는 정도를 평가한 결과 SOD 무첨가 보다는 첨가농도가 높아짐에 따라 접착정자수가 증가하였으며 100 units/$m\ell$ 첨가시 유의적(P＜0.05)으로 높은 접착정자 수를 나타냈다 본 연구의 결과로부터 SOD는 돼지 동결-융해정자에 있어서 난자의 투명대 접착능력의 증가와 함께 체외수정능력 향상에 영향을 미치는 것으로 나타났다.

• 한국식품과학회지
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• 제32권3호
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• pp.706-712
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• 2000

26종의 향신료와 이들 향신료를 사용하여 제조하는 instant curry 제품의 SOD 유사활성을 측정한 결과 모든 시료에서 SOD 유사활성이 나타났으며 그 중 clove가 $232,143{\pm}19.989\;unit/g$로 가장 높았고, rosemary, cassia, tarragon, allspice, oregano, bay leaves, basil, marjoram, thyme, star anise등에서도 g당 $10^5\;unit$ 이상이었다 시판되는 10종의 instant curry제품을 사용하여 $100^{\circ}C$에서 10분간 가열 후 SOD 유사활성을 측정한 결과 g당 $400{\sim}700$ units 정도였다. Nitrite 분해능을 확인한 결과 26종 향신료의 상온수 추출물($(25^{\circ}C)$과 열수 추출물$(100^{\circ}C)$ 그리고, instant curry 10종의 열수 추출물에서 모두 nitrite 분해능을 확인할 수 있었다. pH 1.2에서 상온수 추출물의 경우 clove가 $(97.58{\pm}0.88%)$로 가장 높은 분해율을 나타냈으며 cassia, bay leaves, allspice, oregano, staranise, rosemary, tarragan의 경우도 90% 이상의 분해율을 보여주었다. 그리고 열수 추출물의 경우에도 상온수 추출물과 거의 유사한 nitrite 분해율을 나타내었다. Instant curry의 원료로 사용되는 pure curry의 경우 숙성기간(0주${\sim}$12주)에 따른 nitrite 분해능을 측정한 결과 pH 1.2에서 $50{\sim}60%$ 정도였으며 숙성기간 중 변화가 없는 것으로 밝혀졌다. 또한 instant curry 제품을 사용하여 pH 1.2 조건하에서 nitrite 분해능을 측정한 결과 제품별 차이는 있었으나 12${\sim}$28% 정도의 분해능을 가지고 있었다.

• 한국어류학회지
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• 제22권1호
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• pp.1-8
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• 2010

고수온 환경 ($25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$)에 노출시킨 넙치의 산화 스트레스 정도를 알아보기 위하여 넙치의 간 조직에서 항산화 효소 [superoxide dismutase (SOD)와 catalase(CAT)] mRNA의 발현량 및 그 활성을 측정한 결과, $20^{\circ}C$ 대조구보다 $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 경향을 보였다. 또한 지질 과산화 지표로 사용되는 lipid peroxidation(LPO)을 측정한 결과, $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 경향을 나타내었다. LPO의 증가는 SOD 및 CAT의 증가와 밀접한 관련이 있으며, 체내의 $H_O_2$ 농도 또한 $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 것으로 보아 고수온 환경이 넙치의 산화 스트레스를 유발하고 있는 것으로 사료된다. 고수온 환경에 노출시킨 넙치의 혈중 alanine aminotransferase (AlaAT)와 aspartate aminotransferase (AspAT) 값을 측정 한 결과, AlaAT와 AspAT 모두 유의적으로 증가하는 경향을 보였다. 또한 면역 지표로 사용되는 lysozyme 활성도가 $20^{\circ}C$ 대조구보다 $30^{\circ}C$ 실험구에서 유의적으로 낮은 값을 나타낸 점으로 보아, 고수온 환경에 노출된 넙치에서는 간 세포의 손상뿐만 아니라 면역력 또한 저해되고 있는 것으로 사료된다. 고수온 환경에 노출시킨 넙치에서 항산화 효소인 SOD와 CAT mRNA 발현량 및 활성이 증가하였을 뿐만 아니라 활성산소와 LPO 값 또한 증가된 점으로 보아, 고수온 환경은 넙치의 체내에서 산화 스트레스를 유발시키는 동시에 면역 기능을 저해시키고 있는 것으로 사료된다.

• Journal of Microbiology
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• 제39권1호
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• pp.37-41
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• 2001

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe contains two distinct superoxide dismutase (SOD) activities, one in the cytosol encoded by the $sod2^{+}$ gene and the other in mitochondria. The $sod2^{+}$ gene encoding putative mitochondrial manganese superoxide dismutase (MnSOD) was isolated from the S. pombe genomic library using a PCR fragment as the probe. The nucleotide sequence of the $sod2^{+}$ gene and its flanking region (4051 bp HindIII fragment) was determined. An intron of 123 nt in size was predicted and confirmed by sequencing the cDNA following reverse transcription PCR. The predicted Sod2p consists of 218 amino acid residues with a molecular mass of 24,346 Da. The deduced amino acid sequence showed a high degree of homology with other MnSODs, especially in the metal binding residues at the active site and their relative positions. The transcriptional start site was mapped by primer extension at 231 at upstream from the ATG codon. A putative TATA box(TATAAAA) was located 58 nt upstream from the transcriptional start site and putative polyadenylation sites were located at 1000, 1062, and 1074 nt downstream from the ATG start codon.