• 한국수정란이식학회지
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• 제29권3호
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• pp.235-240
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• 2014

생쥐 2세포기, 4세포기, 8세포기를 각 발생 단계에서 채취하여 동결 보호제를 첨가한 서로 다른 배양액에서 배양하고, 배아의 동결 보존 및 융해 시 급속 처리와 저속 처리 단계로 비교하여 이들 조건이 배아의 생존과 발현에 미치는 영향을 조사하여 다음의 결과를 얻었다. 동결 보호제로 처리하여 배양액을 달리한 경우, 급속 단계에서는 모든 배양액에서 비슷한 발생율을 보였고, 저속단계의 4세포기와 8세포기는 D-PBS에서 높은 발생율을 보였다(P<0.05, P<0.01). 배아의 발생 시기에 따른 동결 보존 후, 발생율은 2, 4, 8세포기로 넘어갈수록 발생율의 증가를 보여 8세포기에서 발생율이 가장 높았다(P<0.01). 동결 보호제의 처리단계에 따른 발생율은 2세포기의 급속 단계에서는 유사하였으나, 4세포기와 8세포기는 저속단계에서 높은 발생율을 보였으며(P<0.05), 특히 8세포기에서 가장 높았다(P<0.01).

• 한국가금학회지
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• 제43권4호
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• pp.197-206
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• 2016

본 연구는 냉동과 해동 방법에 따른 토종오리고기의 육질특성을 비교하기 위해 수행하였다. 본 시험에 사용된 공시재료는 8주령 토종오리(평균체중 2.8 kg)를 도압(屠鴨)하여 채취한 가슴육을 이용하였다. 본 시험의 처리구는 냉동 전 신선육을 대조구(CON)로 하고, 시험구는 냉동 2처리(급냉(FF), 완냉(SF)와 해동 2처리(급해동(FT), 완해동(ST))의 $2{\times}2$ 복합요인으로 4처리구로 하여 총 5처리구(CON, FFFT, FFST, SFFT, SFST), 처리구당 3반복, 반복당 3점씩 총 45점을 이용하였다. 급냉(시료를 $-50^{\circ}C$ deep freezer에서 보관)과 완냉(시료를 $-20^{\circ}C$ 냉동고에 보관)의 두 가지 방법으로 냉동된 시료를 1개월 저장 후, 급해동($12^{\circ}C$ 5시간의 유수해동)과 완해동($5^{\circ}C$ 24시간 냉장고 해동)의 두 가지 방법으로 해동하여 분석에 이용하였다. 육색 중 명도는 급냉시킨 경우와 급해동시킨 경우에 대조구에 비해 유의적으로 감소되었다(P<0.05). 황색도는 완해동시킨 경우에는 대조구에 비해 유의적으로 높게 나타났다(P<0.01). 물리적 성상 중 가열감량과 보수력은 대조구가 냉동과 해동 처리구에 비해 낮게 나타난 반면에(P<0.01, P<0.05), 전단력은 냉동과 행동 처리구에 비해 대조구에서 높게 나타났다(P<0.01). 화학적 성상 중 수분의 함량은 완해동한 경우에 급해동에 비해 높게 나타났으며(P<0.05), 단백질 함량은 급해동한 경우 대조구에 비해 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05). Myristic acid(C14:0)와 linolenic acid(C18:3n3) 함량은 대조구에서 냉동과 해동 처리구에 비해 높게 나타났다(P<0.05). Stearic acid(C18:0) 함량은 완냉동시킨 경우에 급냉동의 경우보다 높게 나타났으며(P<0.05), 해동의 경우에는 처리구간 유의차를 보이지 않았다. Arachidonic acid(C20:4n6)은 완냉동과 완해동의 경우에 대조구에 비해 유의적으로 높게 나타났다(P<0.01, P<0.05). 필수아미노산 중 대조구의 threonine, glycine, iso-leucine, leucine, tryptophan 함량은 냉동과 해동 처리구에서 대조구에 비해 유의적으로 높은 함량을 나타내었다(P<0.05). Methonine과 valine 함량은 해동에 따른 차이는 보이지 않았으나, 냉동 처리시 대조구에 비해 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05). 비필수아미노산 중 alanine, aspartic acid, glutamic acid, serine, tyrosine 함량은 대조구에서 냉동과 해동처리구보다 유의적으로 낮게 나타났다(P<0.01, P<0.05). 결론적으로, 토종오리고기의 냉동 및 해동은 수분과 관련된 육색, 전단력, 가열감량, 보수력에 영향을 미치는 것으로 보여진다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한생식의학회 2007년도 제53차 추계학술대회 초록집
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• pp.100-100
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• 2007

• 한국가금학회지
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• 제41권4호
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• pp.249-259
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• 2014

동결 닭 원시 생식 세포의 생식계열 키메라를 이용한 생체에의 복원을 실용화 하기 위해서는, 닭 원시 생식 세포의 동결 보존 기술의 향상에 의해 동결 및 융해 후의 많은 생존세포를 확보하는 것이 반드시 필요하다. 닭 원시 생식 세포는 배양 5.5일령의 닭 원시 생식선으로부터 채취하고, MACS 방법에 의해서 순수 닭 원시 생식 세포를 분리했다. 15% 각각의 EG를 동결 보호제로 사용한 처리군이 각 군의 농도에 상관없이 유의적(p<0.05)으로 PG 처리군보다 동결 및 융해 후의 세포의 생존율이 높음을 확인하였다. 특히, 동결 보호제로 10% EG를 이용한 유리화 처리군에서 85.63%로 동일한 농도의 PG 처리군(66.81%)보다 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 생존율을 보였다. 한편, 10% EG를 이용한 완만 동결 처리군에서 66.14%로 동일한 농도의 PG 처리군(50.11%)보다 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 생존율을 보였다. 이상의 결과들로부터 유리화 동결에 있어서 가장 높은 생존율을 보인 10% EG이 최적의 동결 보호제로서 사용 가능함을 확인하였고, 이는 한국재래닭(오계)의 원시 생식 세포의 동결 보존의 실용화가 보다 더 향상될 수 있는 또 하나의 방법이 될 수 있음을 시사한다.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제35권4호
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• pp.285-294
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• 2010

본 연구의 목적은 흰 쥐의 상악 대구치를 발거한 후 치주인대세포를 $0^{\circ}C$/2 MPa고압-저온하에 1주간 보관시켜 MTT, WST-1 검색법을 이용하여 측정한 치주인대세포의 활성도를 저속 냉동법(No Additional Pressure, 2, 3 MPa), 급속 냉동법(No Additional Pressure, 2 MPa), $-5^{\circ}C$/90 MPa초고압 저온보존법과 비교하여 평가하는 것이다. 생후 4주된 암컷 Sprague-Dawley계 흰쥐의 상악 좌우 제1, 2대구치를 발거하여 각 군 당 12개의 쥐 치아를 MTT, WST-1 검색에 이용하였다. 실험군은 9개군으로 대조군은 즉시 발치군이며, 각각 3 MPa, 2 MPa, No Additional Pressure (NAP)의 압력을 가한 후 $4^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 $-0.5^{\circ}C$/min 속도로 서서히 냉동시킨 뒤 $-196^{\circ}C$에 냉동한 저속 냉동군, 발치 후 동해방지제 처리과정을 거쳐 각각 2 MPa, NP의 압력을 가한 후, $-196^{\circ}C$의 액화질소에 넣어 냉동한 급속 냉동군, 발치 후 각각 2MPa,NP의 압력을 가한 후, $0^{\circ}C$에 보관한 저온 보존군, $-5^{\circ}C$/90 MPa의 초고압 저온 보존군으로 나누었다. 보존액은 F medium을 사용했으며 동해방지제로 10% dimethylsulfoxide (DMSO)를 사용하였다. 치근면을 단위면적으로 표준화하기 위해 MTT, WST-1 측정값을 Eosin 염색 후 530 nm에서 측정한 흡광도 값으로 나누었다. 통계 분석을 위해 one way ANOVA를 시행하였으며 사후 검정으로는 Tukey HSD 방법을 사용하였고 결과는 다음과 같다. 1. MTT 검색법 및 WST-1 검색법 결과 $0^{\circ}C$/2 MPa 고압 저온 보존군이 즉시 발치군보다 세포 활성도가 낮았으나 통계적 유의차는 없었으며, 저속 압력 냉동군(NP, 2 MPa, 3 MPa)과, 급속 압력 냉동군(NP, 2 MPa), 저온보존군($0^{\circ}C$/NP), 초고압 저온 보존군($-5^{\circ}C$/90 MPa)보다 통계적으로 유의차있게 높은 세포 활성도를 나타내었다(p < 0.05). 2. MTT검색법 및 WST-1 검색법 결과 $-5^{\circ}C$/90 MPa 초고압 저온 보존군이 가장 낮은 세포 활성도를 나타내었으며, MTT 검사 결과에서는 모든 군에 대해 통계적으로 유의성 있는 결과를 보였다(p < 0.05). 위의 결과를 통해, $0^{\circ}C$/2 MPa (20기압)의 고압-저온 보존법이 다른 급속 냉동 보관법(2 MPa, NAP)이나 저속냉동보관법(3, 2 MPa, NAP), $-5^{\circ}C$/90 MPa 초고압 저온 보존법에 비해 우수한 쥐 치아의 치주인대세포의 활성도를 보여 차후 치아의 재이식시 치아보관을 위한 방법으로의 가능성을 제시하였다.

• 한국식품과학회지
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• 제35권2호
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• pp.182-187
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• 2003

재구성 돈까스 패티 제조시 돼지고기 대체원료로 사용되는 ISP의 첨가방법을 기존방법과 다르게 하여 패티의 특성을 조사하고, ISP 첨가방법으로 가장 적당한 방법으로 제조한 패티와 돈까스를 급속 및 저속냉동하여 냉동속도가 품질 특성에 미치는 영향을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같았다. ISP 처리구의 단백질함량은 대조구와 별 차이가 없었고, pH나 보수력에도 유의성 있는 차이가 없었다. 패티의 가열 감량이나 외형변화는 meat(50%)나 meat(30%) 처리구에서 대조구보다 낮았다. 패티의 기계적 견고성은 meat(50%)나 meat(30%) 처리구가 대조구와 함께 낮았으며, 관능적 다즙성은 높았다. 이들 결과로 보아 ISP 첨가시 기존의 fat emulsion complex로 이용하는 방법 대신에 meat emulsion complex로 이용하는 것이 패티의 품질특성을 개선하는데 도움이 되었다. Meat(30%) formula로 패티와 돈까스를 만들어 냉동한 결과 저속냉동 시 외형변화는 많았으나 유의성이 없었고, 가열감량은 유의성 있게 높았다. 패티의 견고성은 저속냉동한 것이 유의성 있게 높았으나 다른 테스쳐 특성에는 차이가 없었다. 그러나 돈까스의 경우에는 냉동속도가 텍스쳐 특성에 별 영향을 미치지 않는 것으로 평가되었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제8권2호
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• pp.116-121
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• 1984

These experiments were carried out to examine the effect of rapid thawing (500$^{\circ}C$/min) on the survival of 8-cell mouse embryos cooled slowly (0.5-1$^{\circ}C$/min) to precooling temperatures between -10 and 070$^{\circ}C$ before direct transfer ofembryos to -196$^{\circ}C$, and to compare the survival of embroys thawed slowly (20$^{\circ}C$/min) and rapidly (500$^{\circ}C$/min) after in vitro culture. In addition, the sensitivity of 8-cell mouse embroys to the rate of addition and removal of cryoprotectant at room temperauture, and the effect of developing stages on the survival of embryos frozen-thawed slowly were investigated. The results obtained were summarized as follows: 1. Embryos were survived in rapid thawing (500$^{\circ}C$/min) only when slow cooling was terminated at relatively high subzero teperaure (-20 to -60$^{\circ}C$). The highest survival rate(77.0%) in in vitro culture of embryos thawed rapidly was obtaeined after transfer to -196$^{\circ}C$ from -40$^{\circ}C$. 2. For the survival of embryos in slow thawing (20$^{\circ}C$/min.), slow cooling to lower subzero temperature (-50$^{\circ}C$ and below) was required before transfer of embryos to -196$^{\circ}C$. These results indicate that embryos transferred to -196$^{\circ}C$ from high subzero temprature contain much interacellular ice to damage them during slow warming but to permit survival of embryos after rapid warming. 3. The Survival rate (72.7%) of 8-cell mouse embryos after rapid addition and removal of cryoprotectant, DMSO at room temperature was similar to that (83.9%) after slow addition and removal of cryoprotectant at same temperature. 4. The survival rates of 1-, 2-, 4- and 8-cell embryos frozen-thawed slowly were 26.7, 76.4, 70.0 and 83.9%, respectively.

• 한국발생생물학회:학술대회논문집
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• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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• pp.98-98
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• 2003

Recently, human embryonic stem (hES) cells have become very important resources for ES cell basic research, cell replacement therapy, and other medical applications; thus, efficient cryopreservation methods for these cells are needed. This study examined whether a newly developed minimum volume cooling (MVC) vitrification method, which was tested through cryopreservation of sensitive bovine oocytes, can be used for freezing hES cells. Feeder-free cultured hES cell (MB03) colonies were mechanically dissected into several small clumps following enzymatic treatment. We compared the freezing efficiency of a slow-cooling method using a cryo-module (0.4-0.6C/min, 20-30 clumps/vial) and MVC vitrification using a modified 0.5-ml French mini-straw designated as a MVC straw (>$20,000{\circ}C$/min, 10 clumps/straw) After thawing, in vitro survival of hES cell clumps was higher for MVC-vitrified cells (80.8%, 97/120) than for slow-cooled cells (38.2%, 39/102). Further, the proliferation rate of surviving MVC-vitrified cells was similar to that of control hES cells from 2 weeks after thawing. In addition, vitrified-thawed hES cells demonstrated a normal karyotype, were positively immunostained for surface marker antibodies (AP, SSEA-4 and TRA-1-60) and the Oct-4 antibody, and could differentiate into all three embryonic germ layer cells in vitro. This result demonstrates that hES cell clumps can be successfully cryopreserved by a newly developed MVC vitrification method without loss of human cell characteristics.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제30권4호
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• pp.279-285
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• 2006

Vitrification has been suggested to be an effective method for the cryopreservation of human ES cells. However, the efficiency of vitrification with different vehicles remains a matter of ongoing controversy. The objective of this study was to assess the efficiency of cryopreservation in human ES cells by vitrification using different vehicles. A human ES cell line and a variety of vehicles, including micro-droplet (MD), open-pulled straw (OPS) and electron microscopic grid (EM-grid), were employed in an attempt to assess vitrification efficiency. In order to evaluate the survivability and the undifferentiated state of the post-vitrified human ES cells, we conducted alkaline phosphatase staining and characterization via both RT-PCR and immunofluorescence assays. The survival rates of the post-vitrified human ES cells using MD, OPS and EM-grid were determined to be 61.5%, 66.6% and 53.8%, respectively. There also exist significant differences between slow-freezing and vitrification (p<0.01). However, no significant differences were detected between the vehicle types. Finally, the pluripotency of human ES cells after thawing was verified by teratoma formation. Cryopreservation using vitrification is more effective than slow-freezing, and the efficiency of vehicles proved effective with regard to the preservation of human ES cells.

• 한국수정란이식학회지
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• 제25권3호
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• pp.195-199
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• 2010

This studies were conducted to investigate the survival rate of frozen-thawed spermatozoa of Jindo Dog by monosaccharide and freezing rates. Experimental animals were prepared 12 males within 1~8 year's old and collected once in a couple of weeks by digital manuplation methods. Collected semen was diluted 1:1 with Tris-egg yolk extender and added 4, 6 or 8% of glycerol and none, 4 mM glucose or 4 mM fructose as cryoprotectant and was equilibrated for 2 hrs in $4^{\circ}C$. In monosaccharide groups, the freezing rate was 5 cm-5 min. above $LN_2$. The survival rates without monosaccharide were $50.7{\pm}19.0%$, $58.6{\pm}18.0%$, $40.0{\pm}10.0%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively. In addition of glucose, the survival rates were $43.1{\pm}14.7%$, $38.1{\pm}16.5%$, $33.3{\pm}4.0%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively and in fructose, were $47.9{\pm}21.1%$, $61.3{\pm}6.2%$, $34.3{\pm}12.6%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively. There showed significantly different between glycerol groups and monosaccharides groups (p<0.05). The survival rates of freezing rate in 5 cm-5 min. group was $64.5{\pm}15.8%$, $51.9{\pm}27.6%$, $29.7{\pm}24.8%$ and in 10 cm-10 min. group was $62.5{\pm}20.3%$, $64.9{\pm}23.6%$, $34.5{\pm}27.4%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively. There were significantly different between freezing rates (p<0.05). These results suggest that the addition of fructose with 6%-glycerol and slow freezing improve the survival of frozen-thawed sperm in Jindo Dog.