International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제7권2호
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pp.145-149
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2003
ApolipophorinIII (apoLp-III) is a protypical exchangeable apolipoprotein that is abundant in hemolymph of many insect species. Its function lies in the stabilization of low-density lipophorin particles (LDLp) crossing the hemocoel in phases of high energy consumption to deliver lipids from the fat body to the flight muscle cells. But, recent studies with naive Galleria mellonella-apoLp-III gave first indication of an unexpected role of that protein in insect immune activation. In this research, we cloned a cDNA encoding putative apoLp-III from the silkworm, Bombyx mori injected with E. coli and characterized its role. We constructed a cDNA library using whole bodies of B. mori larvae injected with E. coli, carried out the differential screening, and selected the up-regulated clones. Among these clones, we focused on a cDNA showing a high sequence similarity to the apolipophorinIII from other insects and analyzed the nucleotide and deduced amino acid sequences. The pupative B. mori Jam123 apoLp-III cDNA contained 1,131 bp encoding 186 amino acid residues. Phylogenetic analysis revealed that the nucleotide and amino acid sequences of the B. mori apoLp-III cDNA formed a highly inclusive subgroup with Bombycidae. But, it was interesting that B. mori Jam123 is closer to B. mandarina than B. mori P50 and B. mori N4. Northern blot analysis showed a signal in the fat body, posterior silkgland and midgut.
세리신 잠의 발육, 실샘 성장, 세리신 량, 혈액 아미노산 조성 등 세리신 잠의 특성을 알아보기 위하여 잠 120 과 같은 조건으로 사육하여 얻은 결과는 다음과 같다. 1. 부화율에 있어서 세리신 잠은 85%이며 잠 120 은 95%이었다. 특히 세리신 잠은 부화가 고르지 않았다. 2. 유충 기간에 있어서 세리신은 20 일 23 시간이었고, 잠 120 은 21 일 22시간이었다. 3. 실샘에 있어서 세리신 잠은 중부실샘이 대부분이며 후부 실샘의 길이는 약 2~3cm 이었고 굴곡은 없었다. 4. 세리신 잠에 있어서 상족후 나방까지의 기간은 약 12 일이었으며, 화용후 화아까지는 7 일로 대단히 짧은 특성을 보였다. 5. 고치에 있어서 세리신 잠은 이주 얇고 가벼웠으며 견충중은 2.7cg 이며 견충 비율은 3.65%이였다. 6. 세리신 (sericin protein)양에 있어서, 세리신 잠의 견충이 sericin 만 으로 구성되어 있고 잠 120 은 28%가 sericin 이었다. 세리신 잠의 견충 당 sericin 율은 잠 120 의 34.6%정도였다. 7. 혈액 아미노산의 양에 있어서 세리신 잠은 histidine, lysine, glutamic acid 가 많았으며 5 령 발육에 따른 조성의 변화에 있어서 대부분의 혈액 아미노산들은 증가하였다.
가잠의 5령기간중 사료의 단백질수준을 달리하였을 경우 유충의 소화율, 체중증가, 혈중단백양 및 요산배설양에 미치는 영향의 상호관계와 견질 및 사료효율에 미치는 영향을 알아보기 위해서 시험한 결과률 요약하면 다음과 같다. 1. 사료의 단백질수준이 누에의 소화율에 미치는 영향에 있어서 본 실험의 범위내에서는, 근사소화율은 사료의 단백질수준이 높을수록 높았으나 단백질소화율은 이와는 반대로 사료의 단백질수준이 낮은 쪽이 높았다 2. 체중증가에 미치는 영향은, 5령 3일째까지는 사료의 단백질수준에 따른 증체가 인정되지 않았으나. 4일째부터는 대체로 사료의 단백질수준이 높을수록 체중증가도 커짐을 보였다. 3. 혈중단백양에 미치는 영향은, 대체로 5령 3일째 이후 급격히 증가하는 경향을 보였으며 또한 사료의 단백질수준이 높을수록 혈중단백양도 높은 경향이었다. 한편, 단백질섭취량에 대한 혈중단백양의 경시적 변화는 2일째 이후 점차 감소하다가 5,6일째에는 다소 증가하는 경향이었다. 4. 요산배설양에 미치는 영향은 사료의 단백질수준이 높을수록 요산배설양도 많은 경향이었는데 2일째는 일단 감소하나 3일째부터는 증감을 반복하는데 단백질수준이 높은 A,B사료구와 낮은 C,D사료구의 요산배설양의 경시적 변화양상은 다소 달랐다. 한편, 단백질섭취량에 대한 요산배설양의 경시적 변화는 2일째부터 급격히 감소하는 경향이었으며 혈중단백양에 대한 요산배설양의 경시적 변화 역시 2일째 이후 감소하는 경향이었으나 A, C사료구는 증가와 감소를 반복하는 양상을 보였다. 5. 견질에 미치는 영향은 사료의 단백질수준이 높을수록 견질은 양호한 결과였다. 6. 사료효율에 미치는 영향에 있어서 건물식하양에 대한 증체 및 견생산효율은 사료의 단백질수준이 높을수록 높았으나 단백질섭취량에 대한 효율은 사료의 단백질수준에 따를 일정한 경향없이 B,C 사료구가 높았다. 각 계종의 회귀계수( $b_{LL=0.184}$, $b_{LC}$ =0.175, $b_{CL=0.165}$ 및 $b_{CC}$ =0.188)는 모두유의성이 인정되어 가식육의 증가속도는 체중의 증가속도보다 현저히 빠른 것으로 판명되었다. 3. 체중구성요소중 주령경과에 따라 그 중량비율이 증가되는 것은 우모, 복강지방, 흉부 및 퇴경부이고, 감소되는 것은 두부, 경부, 가식내장 및 부가식내장이며 방혈량, 각부, 익부 및 배부는 큰 변화를 보이지 않는다. 連署로 申請하여 理事會의 同意를 얻어야 한다. 第十五條 會則 以外의 件은 通常 慣例에 依한다.oro’, ‘Norin 6’ 등)은 고도의 이병성이었고 저항성 품종들은 대개 병반이 없거나 저항성 병반(hypersensitivity 반응, b 혹은 bg 형)을 나타내었다.. 발뢰까지는 수확기를 지연시킬 수록 건엽수량은 현저하게 증가되었으며 발뢰 이후에는 수확기를 지연시켜도 수량 차이는 인정되지 않는다. Stevioside 함량은 발뢰기에 가장 높았고 이보다 빠르거나 늦게 수확할 때 감소하는 경향을 보였다. 건엽수량과 Stevioside 함량을 고려한 수확적기는 발뢰시부터 개화전까지이고 수원 지방에서는 9월 10일~9월 15일경이었다. 11. 영양계의 Stevioside와 Rebaudioside 함량범위는 각각 5.4~l4.3%, 1.5~8.3%로 변이폭이 크며 Stevioside와 Rebaudioside 함량간에는 일정한 경향이 없었다. 저온처리에 의한 임실장해정도와 출수기의 저온처리에 의한 임실장해정도간에는 유의한 정의 상관을 보였으며 또한 저온에 의하여 이삭 추출도가 낮거나 간장단축율이 큰 품종은 임실율도 떨어지는 경향이었다. 10. 냉수처리에 의한 임실장해는 감수분열기처리(엽이간장-15~10cm)
집누에는 지리적인 특징에 의해 중국종, 일본종, 유럽종, 열대종 및 한국종으로 분류된다. 한국종계통은 품종수도 적을 뿐만 아니라 관련 연구도 미미한 실정이다. 본 연구는 한국재래종으로 추측되는 품종들을 국내 · 외로부터 수집하여 등위효소 및 체액단백질유전자와 RAPD다형분석을 실시하여 한국재래종 계통의 품종적 유연관계와 계통특성을 밝히고자 하였다. 1. 등위효소유전자의 분석결과, 몇 개의 유전자군에서 한국재래종과 타 지역종간에 유전자형 및 유전자 빈도의 차이가 명확히 나타났다. 2. RAPSD의 결과를 UPGMA법에 의해 분석한 결과, 짐누에군과 멧누에군으로 크게 구분되었으며 유전적 유사계수 0.6930을 기준으로 한국재래종, 일본종 및 중국종으로 그룹화되었다. 3. 이상의 결과를 종합하면, 한국재래종 누에계통은 하나의 지역종 원종계통으로 분류될 수 있는 명확한 유전적 특성을 가지는 것은 물론 한국종의 계통특성도 뚜렷한 것으로 확인되었다.
모델 재조합 단백질인 $\beta$galactosidase를 발현하 는 Vaccinia virus를 생산하기 위하여 숙주 동물세 포의 배양조건을 관찰한 결과 감염비 5일 경우 H HeLa는 감염후 60시간 후, HeLa 83는 감염후 40 시간 후에 회수할 때 최 대 의 ${\beta}$-galactosidase 수율 을 얻을 수 있으며, 세포가 대수증식기 일 때 감염하 고 배양온도는 $37^{\circ}C$ 로 하는 것이 최적 배양조건으로 나타났다. 감염후 혈청의 농도는 단백질 수율에 크 게 영향을 미치지는 않으나 3~5% 에서 가장 높은 단백질 수율을 보였으며, 낮은 이온 농도의 용액으 로 세포층을 세척하는 것과 virus 감염시 온도를 20~∼$30^{\circ}C$ 로 낮추는 것은 Vaccinia-HeLa system에서 감염능 증대 효과를 나타내 였다. Dexamethasone 전처리는 HeLa 83에서 ViruS 복제 증대를 HeLa에 서는 virus 복제 감소를 가져왔다.
We have expressed GFP in Sf9 and Bm5 cells or Bombyx mori larvae by using Ac-Bm hybrid virus capable of replicating in both Bm5 and Sf9 cells. Genomic DNA of Ac-Bm hybrid virus expressing ${\beta}$-galactosidase was cotransfected with baculovirus transfer vector containing GFP gene, pBacPAK-GFP in Sf9 cells. The Ac-Bm hybrid virus harboring GFP was named as Ac-Bm hybrid virus-GFP. The Ac-Bm hybrid virus-GFP-infected insect cells were easily selected by detecting the emission of GFP from each well of cell culture dish on the UV illuminator. GFP produced by Ac-Bm hybrid virus-GFP in Sf9 and Bm5 cells or B. mori larvae was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis using GFP antibody. In addition, B. mori larvae infected with Ac-Bm hybrid virus-GFP was apparently appeared fluorescence from the whole body at S days postinoculation. The fluorescence of GFP from the hemolymph and fat body of B. mori larvae infected with Ac-Bm hybrid virus-GFP was also observed by fluorescence microscope. In conclusion, our results demonstrated that in baculovirus expression vector system, use of Ac-Bm hybrid virus have an additional advantage of expanded host range for producing recombinant proteins.
누에의 유충 체액내에 다량으로 존재하는 저분자 체액단백질(MHP)의 체액 내의 출현시기, 체내 생합성에 관하여 polyacrylamide gel 전기영동 및 autoradiography로 조사하고, 동시에 MHP의 b성분에 대한 분리.정제를 시도하였다. 얻어진 연구결과는 다음과 같다. 1. MHP의 a성분은 유충 4령 2일의 그리고 b와 c성분은 5령 1일의 체액에 각각 출현하기 시작하여 5령 2일 이후 급격한 농도의 증가를 보였다. 2. MHP의 b와 c성분은 유충 5령 초기의 지방체에서 생합성된 후 곧 체액에 방출되나 a성분의 정확한 합성장소와 시기는 불완전하다. 3. 토사기의 유충 체액을 열처리(6$0^{\circ}C$, 5분), gel 여과 및 DEAE-cellulose와 CM-cellulose chromatography법에 의해 분리.정제한 결과 순도가 거의 100%에 가까운 MHP-b를 얻었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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