• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XII)
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• pp.105-108
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• 2003

To enhance the performance of a serum-free medium (SFM) for human thrombopoietin (hTPO) production in suspension cultures of recombinant Chinese hamster ovary (rCHO) cells, several low-cost hydrolysates such as yeast hydrolysate (YH), soy hydrolysate, wheat gluten hydrolysate and rice hydrolysate were tested as medium additives. Among various hydrolysates tested, the positive effect of YH on hTPO production was most significant. When 5 g/L YH was added to SFM, the maximum hTPO concentration in batch culture was 40.41 ${\mu}g/mL$, which is 11.5 times higher than that in SFM without YH supplementation. This enhanced hTPO production in YH-supplemented SFM was obtained by the combined effect of enhanced $q_{hTPO}$ and increased culture longevity. In addition YH supplementation did not affect in vivo biological activity of hTPO. Taken together, the results obtained demonstrate the potential of YH as a medium additive for hTPO production in serum-free suspension cultures of rCHO cells.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.489-493
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• 1989

쥐 하이브리도마 Alps 25-3를 이용하여 무혈청 배지 KM3의 각 성분이 세포증식과 항체생성에 미치는 영향을 조사하여 무혈청 배지를 최소화한 KMS를 결정하였다. Alps 25-3에 영향을 미치는 것으로 조사된 transferrin, ethanolamine 그리고 BSA만을 혼합하여 결정한 KMS를 다른 쥐 하이브리도마인 A4W, KW 그리고 HCGK에 적용시켰다. KM5를 KM3와 비교하였을 때 세포증식과 항체생산이 거의 동일한 양상을 보였다. 그러나 혈청배지와 비교하여 보면 최고 세포농도는 50-90%, 최종 단일클론항체의 농도는 85-100%의 수준을 보였다. 본 연구의 결과로 쥐 하이브리도마 세포를 무혈청 배지에서 배양시킬 때 필수적으로 첨가기어야 하는 성분들이 조사되었으므로 대량배양에 응용하거나 대사를 연구하는데 유용하게 이용되어지리라 본다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제9권5호
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• pp.583-590
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• 1996

The purpose of this study was to evaluate some factors in the bovine embryonic development from one-cell to blastocyst using modified synthetic oviduct fluid medium (mSOFM), after maturation and in vitro fertilization of the oocytes. The embryonic development to the blastocyst stage was assessed at 7-10 days after in vitro fertilization, and the total cells in the blastocysts were counted by staining nuclei with fluorochrome. Some commercial calf sera (CS) and a superovulated cow serum had different effects on the embryonic development to the blastocyst stage (8.6-21.4%), dependent upon their product lots, although the development might not be affected at least by serum progesterone levels. ${\beta}$-Mercaptoethanol (${\beta}$-ME) supplemented into mSOFM was effective to the embryonic development (27.8%), as well as the co-culture system with cumulus cells (19.5%). In a serum- and feeder cell-free culture using mSOFM containing several growth factors and ${\beta}$-ME instead of CS plus co-cultured cumulus cells, bovine serum albumin (BSA, fraction V), but not polyvinyl alcohol (PVA), was highly effective in embryonic development to the blastocyst stage, almost comparable to CS in the serum-contained culture (CS, BSA and PVA; 27.8, 19.5 and 5.7%, respectively). However, fatty acid free BSA rather reduced the number of developed blastocysts, compared with fraction V BSA (7.3 vs 29.4%). In the serum- and feeder cell-free culture, supplement of glucose to the medium (final 2.0 mM) stimulated the cell proliferation of developing embryos 120 hr after in vitro fertilization. These results indicated that a serum-free medium supplemented with ${\beta}$-ME could successfully support the development of bovine one-cell embryos to the blastocyst stage. Moreover, supplement of glucose and fatty acids to the medium might support preferably the development and cell proliferation of embryos.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.481-488
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• 1989

최근 단일클론항체의 상업적 이응가치가 증대하면서 그 수요량 또한 급격히 증가, 이를 뒷받침할 수 있는 대량생산 기술이 요구되고 있다. 본 연구에서는 쥐 하이브리도마 Alps 25-3의 대량배양을 위해 우선적으로 무혈청 배지 (serum-free media)의 개발을 시도하였다. 동물세포 배양액 IMDM과 Ham's F-12를 1:1로 혼합한 배지를 기본으로하여 ITES 용액 (insulin 10$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, transferrin 10$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, ethanolamine 10$\mu$M and selenium 30nM)을 첨 가하여 일차적으로 결정한 EBM(enriched basal medium)에 steroid hormones, vltamins, lipid, mineral 및 여러성분들을 각각 첨가하여 혈청과 대치될 수 있는 성분들의 최적농도를 조사하였다. 각 성분들의 개별효과와 함께 그들을 혼합하였을 때의 상호효과를 통해 혈청배지와 거의 동일한 성장을 보이는 무혈청배지 KM3(EBM with BSA 100$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, mineral solution and 0.05% PEG)를 결정할 수 있었으며 이 배지에서의 최고 항체 생성량은 혈청배지의 약 80% 로 나타났다. 또한 무혈청 배지에서 여러 cell line의 성장과 그들의 항체 생성을 조사함으로써 다른 쥐 하이브리도마 세포배양에도 적응시킬 수 있음을 확인할 수 있었다.

• 생명과학회지
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• 제24권12호
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• pp.1301-1307
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• 2014

지방유래줄기세포(adipose-derived stem cell; ADSC)는 조직재생을 위한 탁월한 수단으로 인정되고 있으나 세포증식속도가 느려 ADSC의 배양용 배지에는 대게 fetal bovine serum (FBS)이 첨가된다. FBS는 세포에 다양한 영양분을 공급하지만 세포의 기능에 영향을 미칠 수 있는 미 동정 물질도 많이 함유하고 있다. FBS에 의한 예상밖의 영향과 동물유래물질의 오염을 방지하기 위해 ADSC의 무혈청 배양법에 관한 연구가 광범위하게 이루어지고 있다. 본 연구에서는 ADSC세포에 SV40의 T항원 유전자를 도입하여 증식속도를 향상시킨 ADSC-T세포주의 효율적인 무혈청 배양법을 확립하기 위해 ADSC-T의 세포증식에 미치는 아미노산복합체, 비타민 복합체 및 여러가지 영양분 혼합물(B27)의 영향을 검토하였다. 그 결과, ADSC-T세포를 DMEM/F12 무혈청 배지에 현탁하여 plate에 주입하였을 때는 증식하지 않았으며 아미노산, 비타민 및 B27 영양소복합체는 증식촉진효과를 나타내지 않았다. 그러나 ADSC-T세포를 유혈청 DMEM배지로 24시간 배양 후 DMEM/F12 무혈청 배지로 교체하여 배양했을 때는 세포가 증식하였으며 이때, 비타민 복합체와 B27 영양소복합체는 증식촉진효과를 나타내었다. 또한 Stem pro 배지를 이용하면 ADSC-T의 무혈청 부유배양이 가능한 것으로 나타났다. ADSC-T세포는 분자량 70 kDa 부근의 단백질을 다량으로 분비하였으며, 성장인자 중에서 insulin-like growth factor (IGF)와 fibroblast growth factor basic (FGF basic)는 유혈청 배양보다 무혈청 배양에서 더 많이 분비되었다.

• KSBB Journal
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• 제4권2호
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• pp.104-109
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• 1989

접착 세포용으로 가장 많이 쓰이고 있는 미립 담체들의 다섯가지 종류를 소 혈청, 말 혈청 및 무 혈청 배지에 섬유 세포를 배양한 결과 collagen으로 싸여진 CytodexIII이 가장 좋은 접착성을 나타냈으며, 세포 성장 및 TPA 생산성도 우수했다. 소 혈청을 함유한 배지가 95%의 가장 좋은 접착율을 나타냈으며 무혈청 배지가 75%로 낮은 접착도를 보였다. 하지만 연속 배양(Perfusion Chemostat)시 TPA의 생산성은 말 혈청을 함유한 배지 및 무 혈청 배지가 각각 $1.2\;\mu\textrm{g}/\;ml,\;$$$0.7\mu\textrm{g}/\;ml$으로 더 높았으며, 이때 세포의 농도는 각각 $5.5{\times}10^6cells\;/mL$와 $0.7{\times}10^6cells\;/mL$였다.

• KSBB Journal
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• 제9권3호
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• pp.272-278
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• 1994

약독화된 수두 바이러스(Varicella-zoster virus: VZV)를 샤람 폐세포(human embryonic lung c cells)에서 배양하였으며, 수두 바이러스의 생산에 미치는 혈청의 종류와 농도의 효과를 조샤하였다. 수두 바이러스는 바이러스 감염 비율이 높을수록 높 은 역가를 보였으며, 배양시간이 경과함에 따라 바 이러스 감염된 세포의 파괴로 인하여 세포수가 감소 되었다 .. Newborn calf serum(NCS), calf serum (CS), horse serum(HS) 등의 혈청을 샤용한 배양에서의 수두 바이러스의 역가는 CSis와 FBS를 사 용한 배양에서보다 낮아서 수두 바이러스 생산을 증 가하기 위해 이들 혈청의 사용은 적합하지 못하였 다. 그러나, calf serum iron supplemented(CSis) 혈청을 첨가한 배지에서의 세포 친화 바이러스(cell­a associated virus)와 세포 유리 바이러스( cell-free v virus)수율은 fetal bovine serum(FBS)을 첨가한 배지에서의 수율과 비슷하였으며, 고농도의 혈청사 용은 고려되어져야 할 요소이었다. 또한, 수두 바이 러스의 증식 벚 감염력 유지가 혈청성분과 농도에 의해서 영향을 받고 있음을 보였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권3호
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• pp.231-235
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• 1989

부착성 동물세포인 recombinant human embryonic kidney cell line 293을 5% FBS가 함유된 DME/F12(3:1) mixture 배지에서 배양할 경우 static culture에서와는 달리 미립담체 배양에서는 낮은 부착효율과 spreading의 저해현상이 관찰되었다. Cell line 293의 미립담체 배양에 있어서 배지내의 serum은 세포의 미립담체에 대한 부착속도(attach-ment rate)를 감소시킬 분만 아니라 세포의 증식을 저해한다는 사실을 확인하였다. 이러한 경우, conditioned microcarrier를 이용함으로써 미립담체로부터 세포의 탈착을 어느 정도 막을 수 있었다. 특히 autocrine growth factor를 생성하는 hepatoma cell line인 HpG 2 cell을 배양하여 얻은 conditioned medium을 serum-free medium에 첨가하여 사용함으로써 세포의 정상적인 성장 분만 아니라 growth-stimulation을 유도할 수 있었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제29권3호
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• pp.229-234
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• 2014

The aim of the present study was to compare two different serum-free media, modified synthetic oviduct fluid (mSOF) and modified potassium simplex optimization medium (mKSOM) containing 20% RD (RPMI1640 + DMEM, 1:1 v/v) (RD-mKSOM), for in vitro culture (IVC) of bovine embryos. After in vitro maturation and fertilization, the presumptive zygotes were cultured in two different serum-free conditions for 7 days and 9 days to evaluate blastocyst formation and hatching, respectively. Serum supplemented conventional CR2 medium was used as control. After 7 day of culture, there was no significant difference in cleavage and blastocyst formation rates among three groups (mSOF, 59.3 and 30.1%; RD-mKSOM, 65.0 and 41.5%; control, 51.6 and 38.0%, respectively). Hatching rate was significantly higher in control (69.0%) than other experimental groups (mSOF, 22.0%; RD-mKSOM, 39.5%) (P<0.0001 and P<0.001, respectively). Although both serum-free conditions showed lower hatching rates than serum-added control, in serum-free groups, RD-mKSOM showed significantly higher hatching rate than mSOF (P<0.001). In addition, one-step using RD-mKSOM may facilitate IVC procedure than two-step culture system. In conclusion, the results indicate that one-step RD-mKSOM is more suitable defined culture system for IVC of bovine embryos than two-step mSOF.

• KSBB Journal
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• 제8권5호
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• pp.483-487
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• 1993

기존의 무혈청 배지에 첨가하던 BSA/acid를 acid/Pluronic F-68 emulsion으로 대치하여도 세포성장에는 전혀 지장이 없었다. BSA를 제외함으로써 무혈청 배지에 첨가하는 단백질 함량을 최소하할 수 있었고, 이로 인한 세포농도 감소는 없었다. SFLSM은 0.2micron 필터로 여과 멸균하여도 SFLSM의 세포성장효과는 영향을 받지 않는다.