• 한국응용과학기술학회지
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• 제14권3호
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• pp.97-101
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• 1997

An intracellular, soluble 1,4-benzoquinone reductase was purified from Baker's Yeast by ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephacel anion exchange chromatography, and Sephacryl S-200 gel filtration chromatography. 1,4-Benzoquinone reductase was achieved 123.8 fold purification from crude homogenate with a yield of 11.1%.

• Journal of Microbiology
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• 제41권3호
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• pp.207-211
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• 2003

Extracellular protease, from Aeromonas hydrophila Ni 39, was purified 16.7-fold to electrophoretic homogeneity with an overall yield of 19.9％, through a purification procedure of acetone precipitation, and Q Sepharose and Sephacryl S-200 chromatographies. The isoelectric point of the enzyme was 6.0 and the molecular mass, as determined by Sephacryl S-200 HR chromatography, was found to be about 102 kDa. SDS/PAGE revealed that the enzyme consisted of two subunits, with molecular masses of 65.9 kDa. Under standard assay conditions, the apparent $K_{m}$ value of the enzyme toward casein was 0.32 mg/ml. About 90％ of the proteolytic activity remained after heating at 60$^{\circ}C$ for 30 min. The highest rate of azocasein hydrolysis for the enzyme was reached at 60$^{\circ}C$, and the optimum pH of the enzyme was 9.0. The enzyme was inhibited by the serine protease inhibitor, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), by about 87.9％, but not by E64, EDTA, pepstatin or 1,10-phenanthroline. The enzyme activity was inhibited slightly by Ca$\^$2＋/, Mg$\^$2＋/ and Zn/supb 2＋/ ions.

• KSBB Journal
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• 제14권5호
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• pp.528-533
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• 1999

초산생성 미생물인 분리균주 Acetobacter sp. CS5로부터 alcohol dehydrogenase(ADH)를 순수분리하였다. 이 효소는 Triton-X로 solubilization시킨 후 DEAE-Sephacel chromatography와 Sephacryl S-200 chromatography에 의해서 순수 분리되었다. 그 결과 15%의 수율과 14배의 정제된 효소를 얻었다. 정제된 효소의 분자량은 322 KDa으로 측정되었다. 또한 SDS-PAGE상에서는 분자량이 79 KDa, 49 KDa, 46KDa인 3개의 band를 확인하였고, 3분자의 79 KDa 소단위체와 각각 1분자인 49 KDa과 46 KDa인 소단위체로 이루어졌음을 확인하였다. 에탄올에 대한 Km값은 0.77 mM이었으며 최적 pH와 온도는 각각 4.0~5.0과 35$^{\circ}C$이였다.

• 대한수의학회지
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• 제38권2호
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• pp.328-335
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• 1998

Outer membrane proteins(OMPs) of Brucella abortus 1119-3 strain were extracted by Triton X-100 treatment, and fractionated by DEAE-cellulose column chromatography and Sephacryl S-300 column chromatography. The antigenic proteins in these fractions were identified by Western blot analysis. In Western blot analysis, a single band(38kDa) was observed in the DEAE fractions from 36th fraction to 38th fraction against sera of cattle infected with B abortus. And other fractions have several bands. However, the Sephacryl S-300 fractions exhibited a total of 3 peaks of proteins with a broad range from about 30 to 116kDa. In order to characterize further, the extracted OMPs and the DEAE fractions were analyzed by two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis(2-DE) and Western blot using serum from naturally infected cattle with Brucella spp. The 2-DE immunoblots of DEAE fraction showed immunoreactive spots more than twenty two. The major protein spots have ranging from about 32 to 47kDa. The pI values of the spots were detected from pH 4.7 to 5.4. Among the major protein spots, the 38kDa protein which is a specific antigen, located at the point of approximately a pI 4.8.

• 한국식품과학회지
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• 제28권4호
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• pp.663-667
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• 1996

파로부터 acid phosphatase를 Sephacryl S-200 gel filtration과 CM-Sepharose CL-6B ion exchange chromatography를 이용하여 부분정제하였다. p-nitrophenyl phosphate를 기질로 사용했을 경우에 최적pH는 5.5, 최적온도는 $60^{\circ}C$였다. 효소의 활성화 에너지는 4.86kcal/mole이었다. 효소는 pH 6.0에서 가장 안정하였으며, $50^{\circ}C$ 이하에서 대체로 안정하였다. 효소는 p-nitrophenyl phosphate를 기질로 가장 잘 이용하였으며, 5'-IMP와 5'-GMP는 기질로 거의 이용하지 못하였다. 효소는 p-nitrophenyl phosphate를 기질로 했을 경우에 $K_{m.app.}$값이 0.87mM이었다 $Cr^{+++},\;Zn^{++},\;Cu^{++}$이온은 효소의 활성을 저해하였으며, 또한 molybdate와 metavanadate 이온이 효소의 활성을 저해하였다. 그리고, NaCl의 농도가 높을수록 효소의 활성을 저해하였다.

• 한국식품과학회지
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• 제28권5호
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• pp.859-864
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• 1996

홑파래(Monostroma nitidum)로부터 sulfated polysaccharide를 분리정제하여 그 구조적 특성을 조사하였다. 홑파래로부터 유황 함유 다당체인 rhamnan sulfate를 열수에 의하여 추출하였고, 이를 음이온 교환 chromatography에 의하여 정제하였다. Rhamnan sulfate을 더 정제하기 위하여 음이온 교환 크로마토그라피에서의 rhamnan sulfate F-4의 획분에서 황산기와 rhamnose의 함량이 높은 것을 확인하였고, 당의 조성은 30% rhamnose, 0.9% arabinose, 2.5% xylose, 및 2.0% glucose이었고, sulfate도 32.6%로서 그 함량이 높았다. F-4를 다시 분획한 경로가 획분중 F-4-3은 당조성이 36.8% rhamnose, 0.8% arabinose, 3.6% xylose, 0.8% mannose, 1.4% gluctose 및 2.7% glucose이었고, sulfate는 30.8% 정도이었다. 홑파래로부터 분리 정제한 rhamnose의 함량은 총당에 대하여 rhamnan sulfate M이 71.5%였고, 이의 획분인 F-4-1, F-4-2 및 F-4-3은 각각 80.0%, 81.6% 및 79.8%이었다. Rhamnan sulfate의 특성은 표준품과 비슷한 균일성을 나타내었으며, 분자량은 dextran을 표준품으로하여 Sephacryl S-300 gel filteration chromatography를 행한 결과 F-4-3 획분의 분자량이 $10,000{\sim}10,300$ 정도이었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제34권2호
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• pp.140-146
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• 1995

연두금파리의 난세포성숙에 따른 단백질의 변화와 난특이성단백질의 특성을 확인하기 위하여 gel filtration, 전기영동 및 분자량측정, 아미노산과 지방산함량을 측정하여 얻은 결과는 다음과같다. 연두금파리 암컷성충의 난소단백질은 단백질원을 섭식시킨 후 72시간 이후 빠르게 증가하였고, 완전한 성숙이 일어나는 96시간에 최고의 함량을 나타냈다. DEAE-cellulose와 Sephacryl 5-200으로 gel filtration하고 7.5% native polyacrylamide gel에서 전기영동한 결과 난소에서 분리된 특이단백질은 ${R}_{f}$ 0.4에서 혈림프 및 난소와 다른 밴드가 확인되었으며, 분자량은 110,000 dalton이였다. 분리된 난특이성단백질내 아미노산 조성은 asparagine 외 모두 13종이 검출되었으며, asparagine, glutamic acid와 함께 tyrosine이 특이하게 높게 나타났다. 지방산은 난소와 함께 난특이성단백질에서 palmitic acid의 4종이 분리되었다. 따라서, 연두금파리의 난에는 지방체에서 합성, 분비된 난황단백질이외에 난소에만 존재하는 특이단백질이 있음을 알 수 있다.

• 한국식품과학회지
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• 제25권5호
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• pp.565-570
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• 1993

가공 과정 중 갈변에 관여하는 돼지감자의 peroxidase가 ammonium sulfate, DEAE-cellulose column, Sephacryl S-200 column chromatography에 의하여 36.65배로 정제되었다. 이 효소는 p-phenylenediamine을 기질로 사용하였을 때 pH5.0가 활성 최적 pH이었으며 pH $5.0{\sim}6.0$의 범위에서 비교적 안정하였다. 열 불활성화 곡선은 1차 곡선에서 벗어났고 60, 70, $80^{\circ}C$에서의 D값은 각각 86, 45, 33초이었으며 활성화에너지는 4,111 J/mole이었다. 이 효소의 기질특이성은 amine류 중에서 p-phenylenediamine과 가장 친화력이 좋았고 potassium cyanate, sodium diethyldithiocarbamate, L-ascorbic acid, sodium hydrosulfite, L-cysteine에 의해 활성이 완전히 억제되었으며 $Ca^{2+},\;Cu^{2+}$에 의해서는 활성이 촉진되었다.

• 자연과학논문집
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• 제14권2호
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• pp.67-82
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• 2004

고염에서 자라는 원시 박테리아인 Halococcus agglomeratus에서 Thiol-specific antioxidant 활성을 보이는 분자량이 22-kDa인 향산화 단백질을 순수 분리 정제하여 향산화 활성의 특성을 조사하였다. 그 결과 진핵 세포의 Thiol-specific antioxidant protein (TSA of TPx)과 유사한 활성을 갖는 것을 확인 할 수 있었다. 정제된 Thiol-specific antioxidant protein 은 환원제로 thiol 성분을 갖는 비효소적 금속 촉매 산화계( $Fe^{3+}$, $O^2$, DTT 또는 2-mercatoethanol : thiol- MCO system)에 의하여 Glutamine Synthetase (GS)의 불활성화를 방어하고 Ascorbate 같은 nonthiol 성환원제를 갖는 금속 촉매 산화계 ( $Fe^{3+}$, $O^2$, Ascorbatenol: nonthiol- MCO system)에 의해서는 GS의 불활성화를 방어하지 못하였다. 이것은 환원형 thiol성분이 항산화 단백질의 항산화 활성에 전자 공여체로 요구되어 지기 때문이라고 판단된다. 이 단백질은 다른 TPx와는 다르게 100%의 활성을 나타내려면 NaCl의 농도가 500mM이상이 되어야 한다. 이상의 결과는 원시 박테리아에도 TPx가 존재하여 활성 산소종을 제거하는 생화학적 역할을 수행함을 시사하고 있다.

• 한국동물학회지
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• 제38권4호
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• pp.557-564
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• 1995

90 kDa-heat shock protein (HSP90)은 여러 가지 스트레스에 의해서 유도되는 주요 스트레스단백질 가운데 하나이다. HSP90은 스트레스가 없는 정상적인 상황에서도 일정량 합성되는 단백질로, 세포 내에서 kinases나 스테로이드호르몬 수용체와 같은 여러 조절단백질 및 구조 단백질과 결합하는 것으로 알려져 있다.본 연구에서는 HSP90의 생화학적인 특성을 조사하는데 사용할 목적으로DEAE- cellulose chromatography, hydroxyapatite chromatography, Sephacryl S-300 gel filtration의 방법으로 닭근육조직으로부터 HSP90을 순수 분리하고, 이에 대한 단일클론항체를 murine hybridoma technique을 이용하여 생성하였다. 생성된 클론들에 대해서 ELISA와 Western blot을 실시한 결과 HSP90을 인지하는 A204, C112, C302, C410의 4가지 단클론을 얻었다. 특히 C112는 Western blot과 native immunoprecipitation 실험에서 인간, 토끼, 닭, 쥐, 어류의 HSP90을 인지하지만 초파리, E. coli의 HSP90은 인지하지 못하는 것으로 나타났다.