Present investigation was conducted to determine the post-thaw sperm motility and acrosomal damage of filtered and non-filtered frozen semen of Murrah buffalo bulls. Twenty semen ejaculates (from four Murrah buffalo bulls collected at weekly interval) were diluted in Tris egg yolk glycerol extender and divided into two parts. One was filtered through sephadex G-100 column and the other portion was kept as such (non-filtered). Both fractions were frozen in liquid nitrogen ($-196^{\circ}C$) by the standard method developed in the laboratory. After 24 h of freezing, non-filtered and filtered semen samples were thawed at $37^{\circ}C$ for 1 min. These samples were incubated at $37^{\circ}C$ in a water both. The different seminal characteristics i.e. percent progressive sperm motility, live and abnormal spermatozoa and spermatozoa with damaged acrosome were assessed at hourly interval till they remained motile. The filtered frozen and thawed semen showed significantly (p<0.05) high sperm viability and acrosomal integrity as compared to non-filtered semen.
Objectives: In the present study, we investigated whether an aqueous extract of Armeniacae semen induces apoptotic neuronal cell death upon mouse N2a neuroblastoma cells. Methods: 1. Cell viability was determined by using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTI) assay. 2. For in situ detection of apoptotic cells, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay, 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining. 3. The fraction of cells was revealed by flow cytometric analysis used that. 4. For detection of apoptotic DNA cleavage, DNA fragmentation assay was performed. 5. For detection of bax and bcl-2, Western blot analysis was performed. 6. Caspase enzyme activity was measured using caspase-3 assay. Results: From the present results, N2a neuroblastoma cells treated with Armeniacae semen extract exhibited several characteristics of apoptosis. A treatment of Armeniacae semen extract was shown to increase the expression of Bax, a proapoptotic protein, and the treatment decreased the expression of Blc2, an anti-apoptotic protein. In addition, Armeniacae semen extract increased the caspase-3 enzyme activity. Conclusions: The present results show that Armeniacae semen extract induces apoptotic cell death in mouse N2a neuroblastoma cells.
This study was conducted to examine the effect of sustained release recombinant bovine somatotropin(SR-rBST) with different dosage(0, 0.03mg/kg body weight/14 day, 0.06mg/kg body weight/14 day, 0.09mg/kg body weight/14 day) on the economical traits of the semen characteristics and sexual behaviors and blood chemical values with sixteen Holstein dairy young bulls in Dairy Cattle Improvement Center of National Livestock Co-operatives Federation. Sensual testings of collected semens of Holstein young bulls were not different among treatments (p>0.05). Ejaculated semen volumes of control, SR-rBST 0.03mg, 0.06mg and 0.09mg groups were 5.6ml, 5.6ml, 6.0ml and 6.7m, respectively, but the result of SR-rBST 0.09mg group significantly increased semen volume(P<0.05). In sperm concentration, SR-rBST 0.06mg and 0.09mg groups significantly increased the total number of sperms than the other groups(P<0.05). In otherwise, SR-rBST treatments did not affect on pH, osmotic pressure, anti forzen rate, abnormality and motility of collected semen during whole experimental period. Reaction time(RT), sexual aggressiveness(SA) and tactile stimulation(TS) were not different among treatments. The libido scores(LS) of control, 0.03mg, 0.06mg and 0.09mg groups were 68.0, 80.5, 73.9 and 80.8, respectively, and LS were significantly improved by SR-rBST administration(P<0.05). The effect of SR-rBST on scrotal circumference measurement that is important factor to determine the ability of semen production, was not different among treatments. These studies indicates that SR-rBST treatments favourably affect on semen quality and sexual libido in Holstein young bull.
Phthalate는 내분비 교란물질로 호르몬의 변화, 에스토젠, 앤드로젠, 갑상선 호르몬의 분비를 방해한다. 또한, 인간과 동물에서 심혈관질환, 대사작용, 면역 및 번식체계에 영향을 끼친다. Curcumin은 항산화물질로 항염증 활성 및 항암작용에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 phthalate가 정자의 운동성, 생존율, 미토콘드리아 활성 및 세포막 기능에 미치는 영향을 알아보고자 실시하였다. 또한, curcumin을 처리하여 phthalate에 노출된 정자에 미치는 영향을 분석하였다. 정자의 운동성과 생존율은 di-n-butyl phthalate (DBP), mono-n-butyl phthalate (MBP) 및 di-2-ethylhexyl phthalate (DEHP)을 처리하였을 때 감소하였다(p<0.05). Phthalate는 정자의 미토콘드리아 활성 및 세포막의 기능을 감소시켰다(p<0.05). 그러나, 정자의 운동성과 생존율은 curcumin을 처리하지 않은 것보다 처리한 정자에서 높게 나타났으며(p<0.05), 정자의 미토콘드리아 활성 및 세포막 기능에서도 높게 나타났다(p<0.05). 결론적으로, phthalate는 정자의 생존율과 세포의 기능에 영향을 미칠 수 있고, 이로부터 세포의 기능을 보호하기 위해서는 curcumin의 처리가 필요 할 것으로 생각된다.
These experiments were conducted to develope the artificial insemination methods of wild duct (Anas platyhychis platylyachos) . The characteristics of erect phallus and semen collected by the abdominal massage method were investigated in wild duck. The erection and withdrawal time of phallus were 50.70${\pm}$18.66 and 92.58${\pm}$51.95 sec. , respectively, in wild duck. The length, long and short diameter of erect phallus were 3.98${\pm}$0.49crn, 1.53${\pm}$0.15cm and 1.05${\pm}$0.04 cm, respectively, and the spiral grooves of erect phallus were 4 in wild duck. The volume of semen, concentration of spermatozoa and total sperm of an ejaculate were 0.18${\pm}$0.06 ml, 2.84${\pm}$0.03 x 10 9 /ml and 0.52${\pm}$0.21 x 10 cells, respectively, in wild duck. The motility of sperm and pH of semen were 49.06${\pm}$14. 35 and 7.6${\pm}$0.14 in wild duck.
Eight healthy Holstein bulls, 4-6 years old were used to study the effect of season of the year on the biophysical characteristics of semen. Semen was collected twice a week by AV (artificial vagina) over one-year period. The analyses revealed that all the basic seminal traits studied were differed significantly due to season, except the ejaculate volume and consistency and the percentage of swollen spermatozoa in a hypo-osmotic fructose-citrate solution. Ejaculates collected during hot summer season had significantly lower sperm motility, concentration and total counts, and higher percentage of dead spermatozoa than those collected during winter time. Warm spring had moderate semen quality. The temperature-humidity index was calculated and it was associated (p < 0.01) negatively with the ejaculate pH, sperm concentration and total counts, and positively with the % of dead sperms. Ejaculate volume, percentage of swollen spermatozoa, individual motilities did not correlate significantly with the change in temperature-humidity index values. The total live, motile spermatozoa per ejaculate during both the winter and spring seasons showed significant increase of about 37% and 32% respectively over the summer season. Also, rectal temperatures of the bulls were elevated during the hot summer season, while the values of blood hemoglobin and packed-cell volume were decreased.
한우 종모우에 있어 소 성장호르몬 유전자의 출현빈도를 알아보고 소 성장호르몬 다형과 정액성상과의 관계를 살펴보기 위하여 실시하였다. 한우 종모우 109두의 소 성장호르몬 유전자를 Alu I 제한효소로 처리하여 PCR-RFLP로 분석하였다. Leucine(Leu)과 valine(Val) 유전자의 출현빈도는 각각 0.88과 0.12이었다. 소 성장호르몬 VV 유전자형을 지닌 한우 종모우가 다른 유전자형을 지닌 종모우보다 정액성상(정액량, 정자농도, 총정자수)이 떨어지는 경향을 보였지만 소 성장호르몬의 유전자형이 정액성상에 유의적인 영향은 미치지 못하였다. 채취순번에 따른 영향에 있어서도 VV 유전자형을 지닌 종모우가 다른 유전자형을 지닌 종모우보다 정액성상이 떨어지는 경향을 보였지만 유의적인 차이는 나타내지는 못하였으며 다만 년도에 따른 영향에 있어 1998년도 VV 유전자형을 지닌 종모우가 다른 유전자형을 지닌 종모우보다 총정자수에 있어 유의적으로 적게 나타났다(P<0.05). 전체적으로 소 성장호르몬 유전자의 VV 유전자형을 지닌 종모우의 정액성상이 다른 유전자를 지닌 종모우의 정액성상보다 낮은 경향을 보였지만, 조사한 109두의 한우 종모우 중 VV 유전자형을 지닌 종모우가 1두로 분석되어 이 종모우의 정액성상만을 이용하여 소 성장호르몬 유전자다형이 정액성상에 미치는 영향을 살펴보았기에 종모우 선발시 기초자료로 이용하기에는 추가적인 시험이 필요할 것으로 사료된다.
This study was conducted to observe seasonal and individual changes in semen characteristics and sperm freezability, and sperm penetration into zona-free hamster eggs in Korean native goats. Buck response and change in semen characteristics to electrical stimulations was evaluated for four seasons throughout 2 years and percentage of motile sperm and normal apical ridge acrosome was investigated after equilibration and thawing for 4 seasons with 5 bucks. Sperm penetration rate was evaluated for 4 bucks. 1. Probe insertion at depth of 7cm and repeated stimulation for 3 sec was more effective(P<0.05) in buck response and semen collection than those of other conditions. 2. Semen characteristics from electrojaculation was signficantly(P<0.005) higher in spring and fall for semen volume, in spring and summer for sperm concentration and in fall for sperm motility than those in other seasons, respectively. However, there were no differences in total sperm among seasons. 3. Buck response to electrical stimulation showed significant difference(P<0.05) among individuals in all 3 seasons except winter. Significant individual difference in semen volume was only in spring and summer, but there was no indivudual difference in sperm concentration and total sperm in all season. 4. Washing of semen before freezing treatment was greatly(P<0.05) beneficial to sperm motility after thawing, no matter whether ejaculates exhibit egg yolk coagulation or not. 5. Sperm motility after glycerol equilibration was significantly(P<0.05) low in summer semen and motility after thawing was greatly(P<0.05) higher in winter semen than in other seasons. Freezability of unwashed sperm was significantly difference among bucks, but a yearly freezability of washed sperm after chilling and thawing were no differences among bucks and percentage of normal apical ridge acrosome were not different among seasons and bucks. 6. There was no significant difference in sperm motility after thawing between egg yolk levels in summer, although 20% level gave more higher motility than 5% level. 7. In summer, 3.2% glycerol and 3-h equilibration gave greatest percentage(P<0.05) of sperm motility and normal apical ridge acrosome after thawing. 8. Sperm penetration rate into zona-free hamster eggs was not different between bucks and seasons. Overall, it is concluded that to obtain maximum sperm output and successive semen freezing by electrojaculation method, buck selection with good response in all season could be basically considered and that seasonal effect on sperm freezability was more greater than that of individual bucks.
The quality characteristics of semen are important indicators of the fertility of a boar. Development of genetic markers for the semen quality in boars will be beneficial to the improvement of porcine fertility. We investigated the relationship between the polymorphisms of epidermal growth factor (EGF), prostaglandin-endoperoxide synthase 2 (PTGS2) and prolactin receptor (PRLR) genes, and semen quality traits in boars. The genomic DNA of 233 boars (157 Duroc and 86 Landrace) from a central testing station was subjected to genotyping for surveying gene frequency. The EGF, PTGS2 and PRLR genotypes were determined using the restriction fragment length polymorphism method. Thirty-seven normal, mature Duroc boars from an AI center were also genotyped and their semen quality traits were collected. The effect of genotype on semen quality traits was analyzed by the least-squares means method using data corrected for season. The frequencies of the AA genotype of EGF, PTGS2 and PRLR in Duroc boars were 0.14, 0.01 and 0.66, respectively. In Landrace, the frequencies of the AA genotype were 0.03, 0.09 and 0.62, respectively. Boars with the BB genotype in EGF, with the AB genotype in PTGS2 and with the AA genotype in PRLR had significantly better semen quality with a higher percentage of normal sperm and a lower percentage of immature sperm than those with other genotypes. These findings imply that polymorphisms of EGF, PTGS2 and PRLR genes might be used as markers for improving the semen quality of boars.
The aim of this experiments were to assess the time-interval change of motional characteristics in frozen-thawed semen of Korean native cattle (KNC) by using computer aided semen analysis (CASA) technology. Twenty-six KNC frozen semen straws were obtained from Korean KNC improvement department, livestock improvement main division, national livestock cooperatives federation in Korea. Specimens were allowed to thaw at $37^{\circ}C$ for 30 sec in water bath. Semen analysis was performed on semen image analysis system (SIAS, Medical supply, Korea) adjusted to the gate settings and used the semen droplet ($5{\mu}l$) placed on Makler counting chamber (Sefi medical instrument, Israel) prewarmed at $37^{\circ}C$. The same person used the same micropipette to fill the Makler counting chamber. A total of 150 or more of sperms were analysed in each specimen by a single trained person by scanning at least 5 to 10 fields. The measurement parameters in SIAS were as follows ; frame rate = 30 frames per sec, image capture = 1 sec, minimum motile speed = $10{\mu}m/s$, maximum countable sperm number = 400. Statistical analysis was done by Student t-test with use of the Sigma plot program on a IBM personal computer. The dancemean(DNM) and hyperactivated sperm(HYP) of frozen-thawed KNC semen kinematics were significantly decreased(p < 0.05) after 10 min of incubation at $37^{\circ}C$ water bath. But, wobble(WOB) of same sample semen was significantly increased(p < 0.05) after 10 min of incubation and significantly decrease(p < 0.05) after 60 min of same incubation. And, after 30 mim of incubation, significantly differences were found most of motion kinematics, motifity(MOT), curvilinear velocity(VCL), straight line velocity(VSL), average path velocity(VAP), amplitude of lateral head displacement(ALH), beat cross frequency(BCF), mean angular displacement(MAD), dance(DNC), on same sample semen. The DNM of KNC semen sample was variable kinematics after 30 min of incubation. Also, the linearity(LIN) and straightness(STR) was significantly decreased(p < 0.05) from 60 min of incubation. In conclusion, the AI within 30 min after thawing of frozen semen can be an effective method for obtaining high fertility rate in KNC reproductive program.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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