To evaluate lactation performance and changes in plasma and fecal lipopolysaccharide (LPS) concentrations in response to the supplementation of Saccharomyces cerevisiae fermentation product (SC), two dairy farms were selected. On each farm, 32 cows in early to mid lactation (21 to 140 DIM) were blocked by parity and days in milk (DIM), and randomly assigned to one of the two treatments within block (Control or 56 g SC/cow/d). Effect of SC on lactation performance (daily) and changes in blood and fecal LPS level were examined on d 0 and 28 of supplementation. The results showed that SC supplementation increased lactation performance of dairy cows on both farms. On Farm 1, milk production, 3.5% fat corrected milk (FCM), and yield of milk fat and protein were greater (p<0.01) for cows supplemented with SC. Supplementation of SC increased percentage milk fat (p = 0.029) from 81 to 110 DIM. There was no significant effect (p>0.05) of SC supplementation on percentage of milk protein, dry matter intake and feed efficiency. On Farm 2, cows supplemented with SC had a greater (p<0.05) milk yield, percentage of milk fat and milk protein, yield of milk fat and protein, 3.5% FCM and feed efficiency. Supplemental SC had no effect on LPS concentrations in feces (p>0.05) while it trended to reduce (p = 0.07 or 0.207) the concentration in plasma. The results indicate that supplemental SC can increase lactation performance of dairy cattle and has potential for reducing plasma LPS concentration.
Transcriptional gene silencing is regulated by the chromatin structure, which is by various factors including histones. Saccharomyces cerevisiae contains transcriptionally silenced regions such as telomeric regions and hidden mating (HM) loci. The positively-charged amino acids on the histone H4 tail were reported to be critical for the telomeric silencing in yeast, by interacting with Dot1, a specific methyltransferase for the $79^{th}$ lysine on histone H3. However, Dot1 did not affect gene silencing within HM loci, but whether the positively-charged amino acids on the H4 tail affect HM silencing has not been defined. To elucidate the function of the H4 tail on HM silencing, we created several MATa-type yeast strains bearing the substitution of arginine with alanine or lysine on the histone H4 tail and checked the sensitivity of MATa-type yeast to alpha pheromone. The arginine point mutants substituted by alanine (R17A, R19A, and R23A) did not show sensitivity to alpha pheromone, but only two arginine mutants substituted by lysine (R17K and R19K) restored the sensitivity to alpha pheromone-like wild type. These data suggested that the basic property of arginine at $17^{th}$ and $19^{th}$ positions in the histone H4 tail is critical for maintaining HM silencing, but that of the $23^{rd}$ arginine is not. Our data implicated that the positive charge of two arginine residues on the histone H4 tail is required for HM silencing in a manner independent of Dot1.
Kumjungsansung-Makgeolli$^{(R)}$ is a traditional Korean rice wine that is fermented from traditional nuruk and rice. In this study, we performed the PCR-denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis targeting the 16S and 28S rRNA genes to characterize bacterial and fungal diversity during Makgeolli fermentation. The predominant bacteria in the PCR-DGGE profile during Makgeolli fermentation were Lactobacillus spp. (Lactobacillus curvatus, L. kisonensis, L. plantarum, L. sakei, and L. gasseri), Pediococcus spp. (P. acidilactici, P. parvulus, P. agglomerans, and P. pentosaceus), Pantoea spp. (P. agglomerans and P. ananatis), and Citrobacter freundii; these were identified on the base of analysis of 16S rRNA gene sequences. The dominant bacterium during Makgeolli fermentation was L. curvatus. The predominant fungi in PCR-DGGE profile during Makgeolli fermentation were Pichia kudriavzevii, Saccharomyces cerevisiae, Asidia idahoensis, Kluyveromyces marxianus, Saccharomycopsis fibuligera, and Torulaspora delbrueckii, and these were identified on the basis of analysis of 28S rRNA gene sequences. The dominant fungal species during Makgeolli fermentation changed from P. kudriavzevii at 0-2 days incubation to S. cerevisiae at 3-6 days incubation. This study suggests that PCR-DGGE analysis could be a suitable tool for the understanding of microbial diversity and structure during Makgeolli fermentation.
Growth patterns of Saccharomyces cerevisiae NS 2031 and its total RNA contents were observed by a fed-batch fermentation with different media-feeding methods. With an exponential feeding pattern, both final cell concentrations and intracellular RNA contents decreased with increasing feeding rates. Intracellular RNA contents also decreased with the growth time. At the same feeding rate of the exponential pattern, final cell concentrations decreased with the increase of total sugar concentration whereas intracellular RNA contents increased. The highest cellular yield was 0.47 at the total sugar concentration of 10%. With increasing feeding rates of the parabolic feeding pattern, final cell concentrations decreased whereas intracellular RNA contents increased, showing a different tendency from the exponential feeding pattern. In comparison of two feeding methods, the exponential feeding pattern was better than the parabolic feeding pattern in terms of cell growth, cellular yields and intracellular RNA contents of Saccharomyces cerevisiae NS 2031. Also, the intracellular RNA contents of the exponential feeding pattern was found to be about 2% higher than that of the parabolic feeding pattern at the same instantaneous growth rate $({\mu}_{inst})$.
To isolate yeast strains producing high concentration of ethanol, 125 strains were subjected to screening. Initially 14 strains able to grow in a medium containing 15%(v/v) ethanol, 7 strains capable of growing in a medium containing 50%(v/v) glucose, 23 strains having relatively fast fermentation rates, 13 strains able to grow at $42^{\circ}C$ were selected. After secondary screening, 11 strains having relatively high ini-tial fermentation rate and producing high concentration of ethanol were selected. After tertiary screening 5 strains producing high concentration of ethanol were selected. These 5 strains were again for their ethanol produc-tion, residual sugar, and viability using fermentation medium containing 25% glucose. The strain producing the highest concentration of ethanol was 20-1 strain which produced 10.56%(v/v) ethanol in 4 days, and the highest viable strain was 11-1 which produced 10.35%(v/v) ethanol(13.1%. v/v) with the viability of 30.44% after 5 days of fermentation. Both of the 20-1 and 11-1 strains were identified as Saccharomyces cerevisiae.
Lee Jung-Ok;Kim Young-Ok;Shin Dong-Hoon;Shin Jeong-Hyun;Kim Eun-Ki
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.16
no.7
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pp.1041-1046
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2006
Selenium-containing peptide (selenium peptide) was produced by autolysis of total proteins of Saccharomyces cerevisiae grown with inorganic selenium. Selenium peptide exhibited antioxidant activity as a glutathione peroxidase (GPx) mimic, and its activity was dependent on the hydrolysis methods. The GPx-like activity of the hydrolyzed selenium peptide increased 2.7-folds when digested by protease, but decreased by acid hydrolysis. During the autolysis of the yeast cell, the GPx-like activity and selenium content increased 4.3- and 2.3-folds, respectively, whereas the average molecular weight (MW) of selenium peptide decreased 70%. The GPx-like activity was dependent on the MW of selenium peptide and was the highest (220 U/mg protein) at 9,500 dalton. The maximum GPx-like activity (28,600 U/g cell) was obtained by 48 h of autolysis of the cells, which were precultured with 20 ppm of selenate. Selenium peptide showed little toxicity, compared with highly toxic inorganic selenium. These results show the potential of selenium peptide as a nontoxic antioxidant that can be produced by simple autolysis of yeast cells.
The recombinant human interferon alpha 2a ($rhIFN-{\alpha}2a$), expressed in Saccharomyces cerevtsiae, was purified from insoluble aggregates. The inclusion body of $rhIFN-{\alpha}$ was solubilized by guanidine salt in the presence of disulfide reducing agent. The refolding of denatured $rhIFN-{\alpha}2a$ was achieved by simple dilution. The authentic interferon alpha, which has two correctly matched disulfide bonds, was seperated from incompletely oxidized $IFN-{\alpha}$ and dimeric $IFN-{\alpha}$ by use of a CM-Sepharose column, followed by size exclusion columns at two different pH conditions. The purified protein has been subjected to detailed physicochemical characterization including sequence determination. Unlike other $rhIFN-{\alpha}2a$ from E. coli reported, the $rhIFN-{\alpha}2a$ from S. cerevisiae has no methionine residue at its N-terminus originating from the start codon, ATG. The pI of the protein was determined to be 6.05 with a single band in the pI gel, which demonstrated that the purified $rhIFN-{\alpha}$ was homogeneous. The structural study using circular dichroism showed that the protein retains its three dimensional structure in the wide range of pH conditions between pH 3 and 9, and only minor strucural deformation was observed at pH 1.0.
Industrial wastes from pulp and food plants were treated with microorganisms to clarify organic waste-water and to produce cells as animal feed, and results were summarized as follows. (1) Waste-water from pulp, beer, bread yeast, and ethanol distillation plants contained $1.4{\sim}1.5%$ of total sugar, $0.25{\sim}0.35%$ nitrogen, and biological oxygen demand (BOD) was $400{\sim}25,000$, chemical oxygen demand (COD), $500{\sim}28,000$, and pH, $3.8{\sim}7.0$. The BOD and COD were highest in waste-water from ethanol distillation plants among others. (2) Bacterial and yeast counts were $4{\times}10^4-1{\times}10^9,\;2{\times}10^2-7{\times}10^4/ml$ in waste-water. (3) Bacteria grew better in pulp waste and yeasts in beer, bread yeast, and ethanol distillation waste. (4) Saccharomyces cerevisiae SAFM 1008 and Candida curvata SAFM 70 were the most suitable microorganisms for clarification of ethanol distillation waste. (5) When liquid and solid waste from ethanol distillation were treated with microbial cellulase, xylanase, and pectinase, solid waste was reduced by 36%, soluble waste was increased, and recuding sugar content was increased by 1.3 times which provided better medium than untreated waste for cultivation of yeasts. (6) Optimum growth conditions of the two species of yeast in ethanol distillation waste were pH 5.0, $30^{\circ}C$, and addition of 0.2% of urea, 0.1% of $KH_2PO_4$ and 0.02% of $MgSO_4$. (7) Minimum number of yeast for proper propagation was $1.8{\times}10^5/ml$. (8) C. curvata70 was better than cerevisae for the production of yeast cells from ethanol distillation waste treated with microbial enzymes. (9) S. cerevisiae produced 16 g of dried cell per 1,000ml of ethanol distillation waste and reduced BOD by 46%. C. curvata produced 17.6g of dried cell and reduced BOD by 52% at the same condition. (10) Yeast cells produced from the ethanol distillation waste contained 46-52% protein indicating suitability as a protein source for animal feed.
Two experiments were conducted to observe the effects of direct fed microbials on metabolic characteristics in sheep and milking performance in dairy cows. A metabolic trial with four ruminally cannulated sheep(60±6kg) was conducted in a 4×4 Latin square design to investigate the supplementation effects of Saccharomyces cerevisiae, Clostridium butyricum or mixed microbes of S. cerevisiae and C. butyricum on ruminal fermentation characteristics and whole tract digestibility. Sheep were fed 1.25 kg of total mixed ration(TMR, DM basis) supplemented with S. cerevisiae (2.5g/day), C. butyricum (1.0g/day) or its mixture(S. cerevisiae 1.25g/day+C. butyricum 1g/day), twice daily in an equal volume. But control sheep were fed only TMR. A feeding trial with 28 lactating Holstein cattle was also conducted for 12 weeks to investigate the effects of the same microbial supplements as for the metabolic trial on milking performance. The cows were fed the TMR(control), and fed S. cerevisiae(50g/day), C. butyricum(15g/day) or its mixture (S. cerevisiae 25g/day + C. butyricum 7.5g/day) with upper layer dressing method. Total VFA concentration and the digestibility of whole digestive tract in the sheep increased by supplementation of S. cerevisiae, C. butyricum or their combined microbials compare to control group. The proportion of propionic acid at 1h(P<0.039) and 3h(P<0.022) decreased by supplementation of S. cerevisiae while tended to increase acetic acid proportion at the same times. Daily dry matter intake(DMI) was not influenced by the microbial treatments, but milk yield(P<0.031) and feed efficiency(milk yield/DMI, P<0.043) were higher for the cow received C. butyricum than those for other treatments. The milk fat content was higher (P<0.085) when cows fed S. cerevisiae(4.11%) than that fed the control (4.08%), the diets with C. butyricum (3.85%) and the microbial mixture. Based on the results obtained from the current experiments, supplementation of C. butyricum or mixture with S. cerevisiae might be increased milk fat content and milk productivity of lactating daily cows. (Key words:Saccharomyces cerevisiae, Clostridium butyricum, Fermentation characteristics,
We have cloned a ${\alpha}-COP$ homolog, ancop, from Aspergillus nidulans by colony hybridization of chromosome specific library using ${\alpha}-COP$ homologous fragment as a probe. The probe DNA was amplified with degenerated primers designed by comparison of conserved region of the amino acid sequences of Saccharomyces cerevisiae ${\alpha}-COP$, Homo sapiens HEP-COP, and Drosophila melanogaster ${\alpha}-COP$. Full length cDNA clone was also amplified by RT-PCR. Comparison of genomic DNA sequence with cDNA sequence obtained by RT-PCR revealed 7 introns. Amino acid sequence similarity search of the anCop with other ${\alpha}-COPs$ gave an overall identity of 52% with S. cerevisiae, 47% with human and bovine, 45% with Drosophila and Arabidopsis. In upstream region from the transcription start site, a putative TATA and CAAT motif were also identified.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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