• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제45권4호
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• pp.287-293
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• 2007

The identification and characterization of antigens that elicit human T cell responses is an important step toward understanding of Leishmania major infection and ultimately in the development of a vaccine. Micropreparative SDS-PAGE followed by electro transfer to a PVDF membrane and elution of proteins from the PVDF, was used to separate 2 novel proteins from L. major promastigotes, which can induce antibodies of the IgG2a isotype in mice and also are recognized by antisera of recovered human cutaneous leishmaniasis subjects. Fractionation of the crude extract of L. major revealed that all detectable proteins of interest were present within the soluble Leishmania antigens (SLA). Quantitation of these proteins showed that their expression in promastigotes is relatively very low. Considering the molecular weight, immunoreactivity, chromatographic and electrophoretic behavior in reducing and non-reducing conditions, these proteins are probably 2 isoforms of a single protein. A digest of these proteins was resolved on Tricine-SDS-PAGE and immunoreactive fragments were identified by human sera. Two immunoreactive fragments (36.4 and 34.8 kDa) were only generated by endoproteinase Glu-C treatment. These immunoreactive fragments or their parent molecules may be ideal candidates for incorporation in a cocktail vaccine against cutaneous leishmaniasis.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제5권5호
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• pp.484-489
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• 2004

S. platensis로부터 phycobiliprotein을 $30-60{\%}$ 황산암모늄 분별침전법과 Sephadex G-100 gel filtration 및 DEAE-Sephacel anion exchange chromatography의 순서로 4.23의 정제도로 분리하였다. 분리된 phycobiliprotein은 최대흡수 파장이 620 nm인 c-phycocyanin이었다. 분리된 phycobiliprotein은 SDS-PAGE상에서 $({\alpha}$와 $({\beta}$의 두개의 소단위체로 구성되어 있었으며. $({\alpha}$와 $({\beta}$ 소단위체의 분자량은 각각 14.5 kDa과 16 kDa 부근이었다. 또한 gel filtration을 사용한 변성 전 분자량은 약 100 kDa이었다. 이러한 결과는 본 연구에서 분리한 phycobiliprotein이 $({\alpha}{\beta})_{3}-trimer$로 이루어졌음을 보여준다.

• 한국양식학회지
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• 제21권4호
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• pp.285-293
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• 2008

본 연구에서는 동자개, Pseudobagrus fulvidraco의 난황단백질(Vitellin, Vg 난황단백전구체(Vitellogenin, Vg)를 분리하였고, 그 특성을 분석하였다. 난황단백질은 성성숙한 난소 난으로부터 gel filtration chromatography (Sephadex - G200)을 이용하여 분리되었다. 동자개의 난황단백질은 SDS-PAGE에서 분자량이 107 kDa인 1개의 subunit로 구성되어 있었고, 총 난황 단백질 분자량은 360 kDu으로_ 측정되었다. 난황단백전구체는 성숙한 수컷에 $E_2$를 삽입하여 유도하였고, anion exchange chromatography (Momo Q HR 5/5 column)을 이용하여 분리되었다. 분리된 난황단백전구체의 총 분자량은 450 kDa으로 계산되었고, 이는 SDS-PAGE하에서 110 KDa, 125 kDa와 147 kDa로 3개의 subunit로 구성되어져 있었다.

• 농업과학연구
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• 제25권1호
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• pp.52-67
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• 1998

본 연구는 포유동물의 젖에 함유되어 있는 lactoferrin(LF)의 생리적 특성을 밝혀 기능성 식품 특히 항균작용을 이용한 식품제조업에의 이용을 위한 기초자료를 얻고자 실시하였다. 따라서 젖소의 초유로부터 lactoferrin을 분리 정제하여, 소화부위에 따른 lactoferrin의 항균활성을 분석하고자 pepsin, trypsin 및 chymotrypsin으로 분해하여 lactoferrin의 항균력을 측정하고, gel-filtration으로 분리 정제된 각각의 fraction별로 단백질을 정량하여 Escherichia coli와 Staphylococcus aureus에 접종하여 항균효과를 지니는 각 효소별 fraction의 분자량과 peptide fragment를 검토하였다. 1. 젖소의 초유로부터 분리 정제된 lactoferrin(LF)을 단백질 분해 효소인 pepsin, trypsin 및 chymotrypsin으로 분해한 결과 bovine lactoferrin은 SDS-PAGE를 수행하여 band를 확인할 수 있었다. pepsin으로 분해된 lactoferrin은 분자량 14KDa까지에서도 band를 확인할 수가 없었으며, trypsin과 chymotrypsin으로 분해한 lactoferrin은 분해되지 않은 lactoferrin이 존재함을 나타내고, 33KDa에서도 band를 확인할 수 있었다. 2. Sephadex G-50 column을 사용하여 bovine lactoferrin를 효과적으로 정제하였다. Sephadex G-50 column chromatography를 수행 한 결과 bovine lactoferrin은 Tris-HCl사이에서 용출되었으며, pepsin, trypsin 및 chymotrypsin으로 분해한 lactoferrin은 각각 2, 3, 2 개의 peak를 보였고, HPLC 분석결과 첫번째 peak는 주로 분해되지 않은 lactoferrin 수용체가 존재하는 것으로 확인되었으며, trypsin과 chymotrypsin처리에서 항균효과도 유사점을 관찰할 수 있었다. 3. 효소처리한 lactoferrin의 항균효과를 알아보기 위하여 Escherichia coli와 Staphylococcus aureus를 접종하여 항균활성을 비교하였다. 그 결과 각 효소에 대하여 pepsin으로 처리한 lactoferrin을 접종한 시험구가 대조구에 비하여 낮은 생장율을 보여 현저한 항균활성을 지님을 알 수 있었다. 그리고 trypsin과 chymotrysin에 의한 분해물도 미생물 배양 8시간까지는 효소 처리전 bovine lactoferrin보다는 항균활성을 나타냄을 알 수 있었다. 4. Sephadex G-50 column을 사용하여 분리 정제된 bovine lactoferrin fraction별로 SDS-PAGE를 실시한 결과 lactoferrin fraction의 경우는 chromatography 수행 결과와 비교하여, pepsin과 chymotrypsin 분해물은 저분자량임을 알 수 있었고, trypsin에 의한 lactoferrin만이 단일 band를 보임으로서 단백질 분해의 특징을 볼 수 있었다.

• 농업과학연구
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• 제22권1호
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• pp.82-95
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• 1995

본(本) 연구(硏究)는 한국인(韓國人) 산모(産母)로 부터 수집한 초유(初乳) 및 Holstein종(種)으로 부터 수집한 초유(初乳) 중에 존재하는 Secretory immunoglobulin A의 분리방법(分離方法)을 검토하고 분리(分離)된 분획들의 면역화학적(免疫化學的) 특성을 비교 검토하여 향후 인공영양(人工營養)에 대한 시험(試驗) 자료를 얻고자 하였으며 그 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 인유(人乳) 초유(初乳) 중의 SIgA는 Sephadex G-200과 Sepharose 6B를 통한 gel-filtration 만으로도 순수한 상태로 분리(分離) 정제할 수 있었으나, 우유(牛乳) 초유(初乳) 중의 SIgA는 gel-filtration을 반복하는 방법(方法)으로는 순수한 상태로 분리(分離) 및 정제할 수 없었으며, gel-filtration으로 얻어진 SIgA rich fraction을 모아서 DEAE를 실시한 결과(結果) 또한 마찬가지로 SIgA를 순수한 상태로 분리(分離)할 수는 없었다. 2. 인유(人乳) 초유(初乳)로 부터 gel-filtration을 통하여 분리(分離)한 분획들을 Immunoelectrophoresis 및 Double immunodiffusion 방법(方法)으로 면역화학적(免疫化學的) 특성을 살펴본 결과(結果), 첫번째 peak의 분획에서 IgM이 존재하고 있음을 확인할수 있었으며 두번째 peak의 분획에서 SIgA가 순수한 상태로 존재하고 있음을 확인할수 있었다. 반면에 우유(牛乳) 초유(初乳)로 부터 gel filtration 및 DEAE를 통하여 분리(分離)한 분획들을 같은 방법(方法)으로 면역화학적(免疫化學的) 특성을 살펴본 결과(結果), SIgA rich fraction 중에는 IgG가 다량(多量)으로 혼재(混在)되어 있음을 확인할 수 있었다. 3. 우유(牛乳) 초유(初乳)에서 분리(分離)한 SIgA rich fraction의 Fragment를 SDS-PAGE로 분자량을 측정해 본 결과(結果), Secretory component가 77,000-80,000, Heavy chain이 50,000-60,000, Light chain이 25,000-27,000 dalton으로 나타났으며 J-chain은 Light chain과 중복되어 분자량 측정이 어려웠다. 이와같은 결과(結果)는 인유(人乳) 초유(初乳) 중에 존재하는 SIgA Fragment 분자량과 유사한 결과(結果)를 보여주었다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제23권1호
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• pp.147-153
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• 2011

The Pseudorabies (PR), also called Aujeszky's disease (AD), is an infectious viral disease caused by an alpha herpes virus and has domestic and wild pigs, as well as a wide range of domestic and wild animals, as the natural host. Pseudorabies virus (PRV) virions contain several envelope glycoproteins. Among them, gB, gC and gD are regarded as the major immunogenic proteins. We expressed these glycoproteins using the bacterial expression system and analyzed recombinant proteins. Expression of glycoproteins gC and gD were observed on SDS-PAGE or Western blot analysis, but gB was not. Optimal concentration of IPTG and inducing time were determined as 1.0 mM and 4 h, respectively, for the expression of both gC and gD in E. coli. A sodium dodecyl sulfate (SDS) was the most efficient detergent in solubilizing insoluble recombinant protein.

• 대한의생명과학회지
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• 제6권3호
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• pp.201-208
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• 2000

Vancomycin은 세포벽의 합성을 억제하여 세균에 대한 항균효과를 나타내는 glycopeptide 계 항생물질로서 그람양성세균으로 인한 감염치료에 광범위하게 사용되며, 특히 methicillin 내성 포도상구균의 선택적 치료제로 쓰이고 있다. 그러나 최근 임상검체에서도 중등도의 내성을 가지는 포도상구균 (Mu50: MIC 8 $\mu\textrm{g}$/ml)이 나타나기 시작하였고 여러 가지 여건상 국내에서도 내성균주가 분리될 가능성이 높다고 사료되어 임상검체 중 methcillin 내성 포도상구균을 대상으로 vancomycin 감수성 및 내성빈도 조사를 실시하고 이에 따른 내성기전을 알아보고자 하였다. 본 실험 결과 107주 (株)의 methicillin 내성균주 중 23.3%가 vancomycin에 대하여 내성을 보였으며 vancomycin 내성을 나타내는 표준균주인 Mu50과 Mu3의 중간 정도의 내성빈도를 보였다. 중합효소 연쇄반응을 통해 장구균의 vancomycin 내성에 관여하는 vanA, vanB, vanC1, vanC2, vanH 특이 유전자는 증폭되지 않았다. SDS-PAGE를 실시하여 81 kDa, 58 kDa, 33 kDa, 28 kDa 등의 주요 단백 분획을 확인하였고, Mu50에서 45 kDa의 특징적인 단백 분획을 관찰하였다. LDH enzyme assay에서는 한 개의 검체가 Mu50과 함께 높은 LDH 활성을 보였다.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제20권1호
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• pp.71-95
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• 1995

Bacteria have been regarded as a one of major etiologic factors in root canal infections. In endodontic treatment the effective removal of pathogenic microorganisms in the root canal is the key to successful outcome. Bacterial cell wall components may play an important role in the development of pulpal and periapical disease. The purpose of this study was to evaluate the effect of sonic extracts of Streptococcus spp. on cultured L929 cells and to characterize cell wall protein profiles of Streptococcus spp. Streptococcus spp. were isolated from infected root canals and identified with Vitek Systems(Biomeriux, USA). Five streptococci, namely S. sanguis, S. mitis, S uberis, S. mutans (ATCC 10449) and S. faecalis (ATCC 19433) weere enriched in brain heart infusion broth. Cell pellets were sonicated and cell wall extracts were dialyzed and membrane filtered. Prepared cell wall proteins were applied to cultured L929 cell. The cell reaction were evaluated by monitoring DNA synthesis, cell numbers and the change of cell morphology. The total cell wall protein profiles of microorganisms were characterized by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide-gel eledruphoresis(SDS-PAGE). DNA synthesis of L929 cells were reduced by the increasing concentration of sonic extracts. DNA synthesis was significantly suppressed in more than $50{\mu}g$/ml of sonic extract conentration in five streptococci. S. nutans (ATCC 10449) showed stronger suppression on DNA synthesis than remaining four streptococci, which had the similar effect on DNA synthesis. Analysis of DNA synthesis measured by [$^3H$]-thymidine uptake was more sensitvie method than cell counting. Sonic extracts affected the microscopic findings of L929 cells. The protein profiles indicated that all five strains shared two major proteins with molecular masses of 70.8 and 57.5 kD respectively. S. uberis and S. mutans shared common minor proteins of which molecular weights were 147.9 and 112.2 kD respectively. However some minor proteins were unique for S. mitis, S. uberis and S. faecalis.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제14권4호
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• pp.394-399
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• 2007

본 연구에서는 전두유의 가수분해 조건에 따른 품질 특성을 조사하였다. 그 결과 효소제(KMF-G) 농도가 증가함에 따라 전두유 가수분해물의 당도, 칼슘 내인성, 및 총 유리아미노산 함량은 증가하였으며, SDS-PAGE 분석 결과 단백질의 분자량 변화는 0.20%(w/w)와 0.35%(w/w) 농도에서 유사한 패턴을 나타냈다. 전두유 가수분해물은 효소제(KMF-G) 농도 0.20%(w/w), 가수분해 시간 60분에서 가장 우수하게 나타났다. 전두유 가수분해물을 115, 130 및 $145^{\circ}C$에서 15초간 살균하였을 때 품질변화는 크지 않았다. 이상의 결과 전두유의 가수분해 최적조건은 효소제(KMF-G) 농도 0.20%(w/w), 가수분해 시간 60분으로 설정할 수 있었으며 식품소재로의 다양한 활용이 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제17권10호
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• pp.1321-1329
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• 2007

사슴뿔은 동물세계에서 가장 빨리 성장하는 조직이다. 따라서 성장중인 사슴뿔은 뼈 성장을 촉진하는 인자가 풍부하게 포함된 것으로 생각된다. 이들 성장인자들 중 IGF-1은 뼈를 자라게 하는 조골세포의 대사에 중요한 역할을 한다고 알려져 있어 이를 정제하고자 하였다. IGF-1의 정제는 상대라고 불리는 신선한 사슴뿔을 유안침전, DEAE-Sepharose CL-6B 이온교환수지, CM-Sepharose CL-6B 양이온교환수지, Sephadex G-50의 순차적인 방법으로 할 수 있었다. 각 과정마다 IGF-1의 거동을 HPLC, SDS-PAGE, Dot blot, 그리고 western blot으로 분석하였다. IGF-1의 정량은 ELISA기술로 재조합 인간 IGF-1을 이용하여 계산되었으며, 최종 분별 액은 두 개의 단백질을 보였으나, Western-blot에서 작은 분자량인 12 kDa으로 최종 판명할 수 있었다. 정제된 단백질은 HPLC에서 retention 시간 8분만에 검출되었으며, 총 농도는 2910 ng/ml 이고 중량은 0.291 g 이었다.