우리나라에서 재배되고 있는 대표적인 수도 품종 중에서 japonica type으로 관옥, 후지사까 5호, 팔달, 수원 82호의 4품종과 indica type으로 IR-262 CP-slo의 2품종을 선정하여 estel형 인 유기인계 살충제 malathion과 방향족 ester로서 p-nitrophenyl acetate에 대한 esterase의 활성을 비교해 보고 agar-gel electrophoresis에 의하여 ${\alpha}-naphthyl$ acetate를 기질로 하여 esterase의 zymogram을 관찰한 바를 요약해 보면 다음과 같다. 1. 조효소액(crude enzyme)의 malathion가수분해 능력을 효소액일정량에 대한 분해된 malathion milligram으로 비교하면 관옥>IR-262>후지사까 5호>CP-slo>팔달>수원 82호의 순으로 관옥이 가장 활성이 강하고 팔달, 수원 82호가 가장 약하다. 2. Esterase zymogram을 보면 품종간에 대차없이 $3{\sim}4$개의 band가 두극으로 움직이며 cathode로 특히 굵고 진한 band가 있고 수원 82호는 다른 품종과 약간 다른 pattern을 보였다. 3. p-Nitrophenyl acetate를 기질로 할 때 매 milligram 단백질당의 흡광도로 활성을 비교하면 CP-slo>IR-262>팔달>관옥>수원 82호>후지사까 5호의 순으로 indica type의 품종이 훨씬 활성이 강하나 malathion 경우와 일치하지는 않는다. 4. 0.2ppm 정도의 malathion으로 벼의 esterase는 별로 저해 되지 않았다. 5. 발아중인 벼종자에는 malathion과 p-nitrophenyl acetate를 가수분해하는 복합 esterase가 존재 할 것으로 추측된다.
벼 무논골뿌림 재배시 입모향상을 위한 기술체계를 확립하고자 1995년에 발아시험기에서 동진벼를 공시하여 최아장, 과산화석회 (CaO$_2$) 종자분의 및 파종(매몰)심도에 따른 출아, 입모 및 초기 생육을 검토한 바를 요약하면 다음과 같다. 1. 출아율 및 입모율은 최아장이 길수록 향상되었고 파종심도가 깊을수록 저하되었는데 입모율이 l0% 이하로 현저히 저하된 최아장별 파종심도는 무최아 0.5cm, 2mm 최아 1.0cm, 4mm 및 6mm 최아는 2.0cm이었다. 2. 최아장이 길수록, 파종심도가 말을수록 초장이 크고 건물중이 무거웠으며 입수도 많았다. 3. 최아장 6mm에서는 파종이 불균일하고 파종립수가 매우 적어 입모수 및 입모의 균일도가 매우 낮았으나 최아장 4mm에서는 파종이 균일하고 입모율 및 입모의 균일도가 높았다. 4. CaO$_2$종자분의로 출아율 및 입모율이 향상되었으며 CaO$_2$분의에 의한 입모향상 효과는 최아종자보다 무최아종자에서 컸다. 5. CaO$_2$ 처리로 입모율 50% 이상을 보인 파종심도는 무최아종자, 최아종자 모두 1.0cm까지이었으며 파종심도 3cm에서는 모든 처리 에서 전혀 입모되지 않았다. 이상의 결과로 보아 벼 무논골뿌림재배에 알맞는 최아장은 3~4mm라고 생각되며 CaO$_2$를 분의 하더라도 입모의 안정을 위하여는 종자가 출아전에 1cm 이상 매몰되지 않도록 파종 전후 물관리를 적절히 해야 할 것으로 생각된다.
Agrobacterium-mediated gene transfer has recently been developed to improve rice transformation. In this study, 3 different transformation methods were tested including soaking, co-cultivation, and vacuum infiltration. Agrobacterium tumefaciens GV3101 harboring the binary vector pGreen:: LeGSNOR was used in this experiment. This study aimed to identify the most appropriate method for transferring LeGSNOR into rice. Vacuum infiltration of the embryonic calli for 5 min in Ilpum resulted in high transformation efficiency based on confirmation by PCR, RT-PCR, and qRT-PCR analyses. In conclusion, we described the development of an efficient transformation protocol for the stable integration of foreign genes into rice; furthermore, the study results confirmed that PCR is suitable for efficient detection of the integrated gene. The vacuum infiltration system is a potentially useful tool for future studies focusing on transferring important genes into rice seed calli, and may help reduce time and effort.
Bacterial grain rot by Burkholderia gluae cause severe damage in seedling and grain of rice after heading season. This seed-borne pathogen play a role as first infection agent that could be cause disease following cropping season. Until now the direct isolation of the bacteria has some trouble by interference of other bacteria existed inside seed. This study established convenient identification method as simple isolation with KB medium from seed showing symptom and using PCR identification. By this isolation method, B. glumae was isolated from 40 to 50% in brown rice and inner hull, however, there were saprophytic bacteria and fungi outer hull. In PCR identification with Ogf4 and Ogr3 primer to these 25 isolates, the amplified products were presented in all of the collections but not in 10 saprophytic germs. The isolation rate was constant to 3 months stored seeds. This result provide a rapid and convenient isolation and identification of B. glumae.
태백벼의 현탁배양세포주로부터 유도된 체세포배를 낱개로 알진산 캡슐화하여 인공종자화하였다. 인공종자는 1/2 MS 고체배지에서 73%의 발아율을 나타내었으며 알진산 캡슐은 체세포배의 발아율에 영향을 주지 않았다. 그러나 멸균되지 않은 여과지에서는 발아율이 60%로 낮아졌다. 캡슐화된 진정종자는 무균상태여부에 관계없이 높은 발아율을 나타내었다. 이상의 결과로 무균상태가 유지되지 않을 때 인공종자 발아율이 낮아지는 것은 체세포배가 진정종자의 접합자배보다 오염을 견디기 어렵기 때문인 것으로 사료된다.
This experiment was conducted on rice (cv. 2005 Thaoi) seeds to study whether priming with deep sea water (DSW) results in enhancement of seed emergence and seedling growth and to identify the optimum concentration of Deep Sea Water (DSW) for priming. Two experiments were conducted subsequently. In experiment 1, four concentrations of the DSW (10%, 20%, 30% and 40%), and in experiment 2, five concentrations of DSW (10%, 15%, 20%, 25% and 30%) were prepared and seeds were primed for 24 hours duration at $25^{\circ}C$. Beside this, hydro priming with plain water was also included as a control. Experiments were laid out in Completely Randomized Design (CRD) with three replications. Result showed that 20% DSW seed priming treatment had improved the emergence, seedling height, number of roots and root length as compare to other with DSW or without DSW treatments. Beyond 20% DSW priming (i.e. 25%, 30% and 40%) were not suitable for priming the seed. On the basis of seedlings growth parameters; emergence, seedling height, root number and length, and shoot root ratio, 20% DSW priming was the best priming treatment.
방사선조사시 열처리의 효과를 알기 위하여 수도종자에 방사선조사시 열전후처리를 행하였던바$M_1$ 세대의 생물학적인 반응 및 $M_2$ 세대의 변이율에 대해 몇가지 결과를 얻었다. 1. 방사선선량 20kR에서 열전처리는 방사선단독조사에 비해 생물학적인 장해를 적게하고 변이율을 증가시켰다. 2. 방사선단독조사 및 조사전열처리에 비해 heat shocking으로서 열후처리하는 것은 변이율을 증가시켰다. 3. 열전처리에 의해 $M_1$ 세대의 장해가 적고 변이율이증가되는 가장 효과적인 열처리온도 및 시간은 6$0^{\circ}C$에서 30분간이었다. 4. 열처리는 방사선단독조사에 비해 mutation spectrum을 달리했다.
Transposon-mediated insertional mutagenesis provides one of the most powerful tools for functional studies of genes in higher plants. This project has been performed to develop a large population of insertional mutations, and to construct databases of molecular information on Ds insertion sites in rice. Ultimate goals are to supply genetic materials and information to analyze gene function and to identify and utilize agronomically important genes for breeding purpose. Two strategies have been employed to generate the large scale of transposon population in a Japonica type rice, Dongjin Byeo; 1) genetic crosses between Ac and Ds lines and 2) plant regeneration from seeds carrying Ac and Ds. Our study showed that over 70% of regenerated plants generally carried independent Ds elements and high activity of transposition was detected only during regeneration period. Ds-flanking DNA amplified from leaf tissues of F2 and T1 (or T2) plants have been amplified via TAIL-PCR and directly sequenced. So far, over 65,000 Ds lines have been generated and over 9,500 Ds loci have been mapped on chromosomes by sequence analysis. Database of molecular information on Ds insertion sites has been constructed, and has been opened to the public and will be updated soon at http://www.niab.go.kr. Detailed functional analysis of more than 30 rice mutants has been performed. Several Ds-tagged rice genes that have been selected for functional analysis will be briefly introduced. We expect that a great deal of information and genetic resources of Ds lines would be obtained during the course of this project, which will be shared with domestic and international rice researchers. In addition to the Japonica rice, we have established the tagging system in an rice line of indica genetic background, MGRI079. MGRI079 (Indica/Japonica) was transformed with Agrobacteria carrying Ac and Ds T-DNA vectors. Among transgenic lines, we successfully identified single-copy Ds and Ac lines in MGR1079. These lines were served as ‘starter lines’ to mutagenize Indica genetic background. To achieve rapid, large scale generation of Ds transposant lines, MGR1079 transformants carrying homozygous Ac were crossed with ones with homozygous Ds, and $F_2$seeds were used for plant regeneration. In this year, over 2,000 regeneration plants were grown in the field. We are able to evaluate the tagging efficiency in the Indica genetic background in the fall.
벼(Oryza sativa L.)의 가식부인 쌀의 brassinosteroid 활성물질의 존재를 구명하기 위하여 벼를 도정하여 미강과 백미를 얻고 이들을 각각 MeOH로 추출하여 얻어진 추출물을 rice inclination test의 생물검정법으로 검정한 결과 활성이 인정되었다. 각각의 추출물을 생물검정법을 지표로 용매분획, silica gel adsorption chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, charcoal adsorption chromatography 등의 수법으로 brassinosteroid 활성물질을 정제하고, silica gel adsorption chromatography, TLC 등에 의해 활성본체를 분리하고 각 활성획분을 HPLC에 의해 활성본체 구명을 시도한 결과 미강의 활성획분에서는 castasterone과 teasterone이 동정되었다. 완숙된 쌀에서 brassinosteroid 활성물질의 확인 및 동정은 본 연구가 최초로 생각되며, brassinosteroid 활성물질은 주로 미강에 존재하였으며, 그 함량은 g중량당 castasterone이 0.15 ng 이고 teasterone은 0.37 ng 수준이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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