• 생명과학회지
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• 제15권5호
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• pp.734-738
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• 2005

Xylanase를 생산하는 알칼리 내성 Bacillus alcalophilus AX2000의 chromosomal DNA로부터 xylanase 유전자를 cloning하여 그 염기배열 순서를 결정한 다음 이로부터 유전자 발현에 관련된 구조를 분석하였다. Xylanase 유전자의 cloning을 위해 제한효소 PstI으로 절단한 B. alcalophilus AX2000의 chromosomal DNA와 pUC19을 ligation 시켜 E. coli $DH5\alpha$에 형질전환시킨 후 형질전환체 중에서 xylanase 활성을 나타내는 재조합 plasmid pXTY99를 분리하였다. 재조합 plasmid pXTY99은 pUC19의 PstI 부위 내에 7kb의 외래 DNA가 삽입 되 었다. Cloning된 xylanase 유전자(xynT)의 염기배열을 분석한 결과 유전자의 크기는 1,020 bp이었고 이는 340개의 아미노산으로 구성된 분자량 40 kDa의 poly-peptide를 coding하고 있었다. 이 염기배열은 AUG 개시 codon으로부터 각각 259와 282 base상류에 TACAAT의 -10 box와 GTTCACA인 -35 box로 추정되는 염기배열이 존재하였으며 ribosome 결합부위가 존재하였다. B. alcalophilus AX2000의 xylanase와 아미노산배열의 유사성이 가장 높은 xylanase는 Bacillus sp. N137과 B. stearothemophilus 21 유래의 xylanase로 각각 $61\%$와 $59\%$의 유사성을 나타내었다.

• 환경생물
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• 제20권3호
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• pp.237-244
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• 2002

항진균 활성 관련 단백질을 탐색하기 위해 미역류로부터 식물병원성 곰팡이의 생장을 저해하는 SAR01 균주를 분리하였고, FAME (fatty acid methyl ester) 분석 결과, Streptomyces sp.로 동정되었다. 방사선 조사$(^{60}Co)$를 실시한 결과, Botrytis cinerea를 포함한 5종의 식물병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성을 소실한 SAR535 균주 외 6종의 돌연변이 균주가 유도되었다. SAR01 야생형 균주와 SAR535 돌연변이 균주의 세포내 단백질의 이차원 전기영동 분석결과, 6종의 단백질이 야생형 균주인 SAR01 균주의 세포내에만 존재하였다. 이들 6종의 단백질 중, 5종은 heat shock protein 70 (HSP70), Fe-containing superoxide dismutase II (Fe - SODII), ribosome recycling factor (RRF), 10 kD chaperonin (GroES) 및 inorganic pyrophosphatase (PPAse)와 각각 75%, 93%, 100%, 96% 및 83%의 유사성을 보였다. 이들 6종의 단백질들은 Streptomyces sp. SAR01 균주의 항진균 활성과 밀접한 관계가 있을 것으로 사료된다.

• Applied Microscopy
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• 제32권4호
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• pp.361-376
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• 2002

본 연구는 카드뮴으로 유발된 생쥐 간중독에 대한 키토산올리고당의 효과를 알아보기 위하여 시도되었다. Mouse를 대상으로 카드뮴 (5.0 mg/kg; i.p.) 단독투여군(group Cd), 카드뮴과 키토산올리고당 (0.5% solution) 동시투여군 (group Cd+Chi)으로 구분한 후 간손상 억제효과를 알아보기 위해 간조직 중의 카드뮴 농도와 metallothionein 농도를 비교측정하였다. 또한 간조직의 형태학적 손상을 확인하기 위해 조직학적 관찰을 실시하였다. 간조직의 카드뮴 농도는 Cd군에 비해 Cd+Chi군에서 현저하게 낮게 나타났다. 간조직의 MT 농도는 Cd군이 Cd+Chi군에 비해서 낮게 나타났다. 전자현미경적 관찰 결과, Cd군에서 미토콘드리아는 심한 팽윤현상이 나타났으며, RER의 분절과 리보조옴 탈락이 관찰되었다. 그러나 Cd+Chi군에서는 전자밀도가 높은 다양한 형태의 미토콘드리아가 분포되어 있었으며, 리보조옴이 부착된 채로 전형적인 층판구조를 형성한 RER이 관찰되었다. 이상과 같은 결과로, 키토산올리고당이 생쥐 간조직에 미치는 카드뮴의 독성을 감소시킴을 알 수 있었다.

• 대한미생물학회지
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• 제11권1호
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• pp.1-11
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• 1976

Escherichia coli(ATCC 11115)에 실험실등에서 상용하는 여러가지 항균제를 시간별로 처리, 그 변화양상을 전자현미경으로 관찰한 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 대조군은 3층의 단일막으로 형성된 세포벽에 둘러쌓여 있으며 세포질은 전자밀도가 낮은 nucleoid와 ribosme들이 산재하여 있음을 관찰할 수 있었다. 2) 70% ethanol용액 처리군은 핵물질을 관찰할 수 없었고 세포질은 세포 중앙부로 응집되어 있었으며 세포벽의 외부에서는 bleb 들을 관찰 할 수 있었다. 3) 3% $H_2O_2$ 용액 처리군은 세포내용물의 변화는 70% ethanol 처리군과 대동소이(大同小異)하였으나 세포벽에서는 심한 굴곡현상이 관찰되었다. 4) 5% lysol 용액처리군은 세포질 및 핵물질 부위가 완전히 구분되어 나타났으며 세포질내의 ribosome과립들은 시간이 경과할수록 그 응집현상이 심하였고 세포 외부에는 ribosome 양 과립들이 부착하고 있음이 관찰되었다. 5) 1% DDEGH 용액 처리군은 세포질의 응집 및 세포막과 세포벽이 뚜렷이 관찰되지 않았으며 세포외부에 세포내용물과 동일한 물질로 생각되는 물질이 부착되어 있음을 관찰할 수 있었다. 6) 고압멸균 처리군은 세포막 및 세포벽의 파괴, 탈락 및 세포내용물의 유출현상이 관찰되었다.

• 미생물학회지
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• 제47권3호
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• pp.188-193
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• 2011

C형 간염바이러스(hepatitis C virus; HCV) 증식을 효과적이며 특이적으로 제어할 수 있는 유전산물로서, HCV 증식조절인자인 NS5B RNA replicase 존재에 의해 allosteric하게 활성이 유도될 수 있는 HCV internal ribosome entry site (IRES) 표적 hammerhead 리보자임을 개발하였다. 이러한 리보자임은 HCV IRES 염기서열 중 +382 nucleotide 자리를 인지하는 hammerhead 리보자임, NS5B RNA replicase와 특이적으로 결합하는 RNA aptamer 부위, 그리고 aptamer와 NS5B와의 결합에 의해 리보자임 활성을 유도할 수 있도록 구조적 변이를 전달할 수 있는 communication module 부위 등으로 구성되어 있다. 이러한 allosteric 리보자임에 의해 세포 배양에서 HCV의 replicon 복제가 효과적으로 억제됨을 실시간 PCR 분석을 통하여 관찰하였다. 특히, HCV 지놈을 표적하는 리보자임 단독, 또는 HCV NS5B에 대한 RNA aptamer 단독에 의한 HCV 복제 억제능보다 allosteric 리보자임에 의한 HCV 복제 억제능이 더 뛰어났다. 따라서 개발된 allosteric 리보자임은 HCV 증식의 효과적인 증식 억제 선도물질로 활용될 수 있을 것이다.

• Applied Microscopy
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• 제27권4호
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• pp.461-472
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• 1997

The substantia nigra of the Mongolian gerbil was studies by tyrosine hydroxylase immunohistochemistry and immunoelectron microscopy with preembedding method. The purpose was to obtain information on the distribution and ultrastructure of the Tyrosine hydroxylase immunoreactive and dopaminergic neurons in the substantia nigra, in order to provide the necessary background for the gerbil. Large number of tyrosine hydroxylase immunoreactive neurons were located in the compact part of substantia nigra. Findings in the gerbil, compared to observations in the other species, included the presence of prominent bundles of tyrosine hydroxylase immunoreactive cytoplasmic processes passing in the dorsoventral direction from pars compacta into pars reticulata at middle and caudal levels of the substantia nigra, and the presence of a distinct tyrosine hydroxylase immunoreactive substantia nigra pars lateralis. Tyrosine hydroxylase immunoreactive neurons had well-developed cell organelles, especially rough endoplasmic reticulum, free ribosome and poly-ribosome, and showed the infoldings of the nuclear envelope. We anticipate that the present description of the cellular organization of the tyrosine hydroxylase immunoreactive dopaminergic area in the substantia nigra of gerbil will be useful for the animal experimental model of Parkinson's disease.

• Journal of Microbiology
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• 제45권5호
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• pp.418-421
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• 2007

The nucleotide at position 791(G791) of E. coli 16S rRNA was previously identified as an invariant residue for ribosomal function. In order to characterize the functional role of G791, base substitutions were introduced at this position, and mutant ribosomes were analyzed with regard to their protein synthesis ability, via the use of a specialized ribosome system. These ribosomal RNA mutations attenuated the ability of ribosomes to conduct protein synthesis by more than 65%. A transition mutation (G to A) exerted a moderate effect on ribosomal function, whereas a transversion mutation (G to C or U) resulted in a loss of protein synthesis ability of more than 90%. The sucrose gradient profiles of ribosomes and primer extension analysis showed that the loss of protein-synthesis ability of mutant ribosomes harboring a base substitution from G to U at position 791 stems partially from its inability to form 70S ribosomes. These findings show the involvement of the nucleotide at position 791 in the association of ribosomal subunits and protein synthesis steps after 70S formation, as well as the possibility of using 16S rRNA mutated at position 791 for the selection of second-site revertants in order to identify ligands that interact with G791 in protein synthesis.

• 미생물학회지
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• 제42권2호
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• pp.156-159
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• 2006

Escherichia coli 16S rRNA의 잘 보존된 부분인 790 loop의 즉흥진화를 통한 분석에서 리보솜의 단백질 수행기능을 위해서 필수불가결한 것으로 추측되는 789번 위치에 염기치환을 유발하여 제작한 변이체 리보솜의 기능을 chloramphenicol acetyltransfernse mRNA의 단백질로의 번역능력 차이에 따른 chloramphenicol에 대한 저항성의 정도를 측정함으로써 분석하였다. 예상했던 바와 같이 모든 변이체 리보솜의 단백질 합성능력은 현저히 저하되었으며, 789 염기의 단백질합성에서의 기능을 규명하기 위하여 16S rRNA 변이체의 기능을 회복시키는 이차복귀돌연변이(second-site revertant)를 발췌하는 효과적인 유전학적 실험방법을 개발하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권12호
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• pp.2046-2056
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• 2018

Phospholipase D has great commercial value due to its transphosphatidylation products that can be used in the food and medicine industries. In order to construct a strain for use in the production of PLD, we employed a series of combinatorial strategies to increase PLD expression in Bacillus subtilis WB600. These strategies included screening of signal peptides, selection of different plasmids, and optimization of the sequences of the ribosome-binding site (RBS) and the spacer region. We found that using the signal peptide amyE results in the highest extracellular PLD activity (11.3 U/ml) and in a PLD expression level 5.27-fold higher than when the endogenous signal peptide is used. Furthermore, the strain harboring the recombinant expression plasmid pMA0911-PLD-amyE-his produced PLD with activity enhanced by 69.03% (19.1 U/ml). We then used the online tool \RBS Calculator v2.0 to optimize the sequences of the RBS and the spacer. Using the optimized sequences resulted in an increase in the enzyme activity by about 26.7% (24.2 U/ml). In addition, we found through a transfer experiment that the retention rate of the recombinant plasmid after 5 generations was still 100%. The final product, phosphatidylserine (PS), was successfully detected, with transphosphatidylation selectivity at 74.6%. This is similar to the values for the original producer.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제64권4호
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• pp.752-769
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• 2022

Wheat gluten is an increasingly common ingredient in poultry diets but its impact on the small intestine in chicken is not fully understood. This study aimed to identify effects of high-gluten diets on chicken small intestines and the variation of their associated transcriptional responses by age. A total of 120 broilers (Ross Strain) were used to perform two animal experiments consisting of two gluten inclusion levels (0% or 25%) by bird's age (1 week or 4 weeks). Transcriptomics and histochemical techniques were employed to study the effect of gluten on their duodenal mucosa using randomly selected 12 broilers (3 chicks per group). A reduction in feed intake and body weight gain was found in the broilers fed a high-gluten containing diet at both ages. Histochemical photomicrographs showed a reduced villus height to crypt depth ratio in the duodenum of gluten-fed broilers at 1 week. We found mainly a significant effect on the gene expression of duodenal mucosa in gluten-fed broilers at 1 week (289 differentially expressed genes [DEGs]). Pathway analyses revealed that the significant DEGs were mainly involved in ribosome, oxidative phosphorylation, and peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) signaling pathways. These pathways are involved in ribosome protein biogenesis, oxidative phosphorylation and fatty acid metabolism, respectively. Our results suggest a pattern of differential gene expression in these pathways that can be linked to chronic inflammation, suppression of cell proliferation, cell cycle arrest and apoptosis. And via such a mode of action, high-gluten inclusion levels in poultry diets could lead to the observed retardation of villi development in the duodenal mucosa of young broiler chicken.