이글에서는 pet A, B, C에 대한 일차적인 아미노산 배열을 알았고 여기서 우리는 위의 정보들을 토대로하여 R. capsulatus에 대한 site-specific oligonucleotide-directed mutagenesis 등 여러 연구를 할 수가 있을 것이다.
Rhodobacter capsulatus 유래의 hemA 유전자를 항시발현 벡터(pHCEIIB vector)에 클로닝한 후 과발현시킨 Escherichia coli BLR(DE3) 균주를 사용하여, 5-aminolevulinic acid (ALA) 생산을 위한 적정 배양조건을 조사하였다. ALA 생산을 위한 배양온도는 $37^{\circ}C$보다는 $30^{\circ}C$에서 더 나은 결과를 나타내었다. Glycine 농도가 세포생장에 미치는 영향이 컸으며, 세포생장을 저해하지 않고ALA를 고농도로 생산하기 위한 적정 glycine 농도는 5-10 g/L 수준이었다. Succinic acid의 적정 첨가수준은 10-20 g/L이었으며, succinic acid의 일부를 glutamate로 대체할 경우에 ALA의 생산량을 향상시키는 효과가 있었다. 한편, 배지 중의 glucose 첨가는 ALA 생산성을 저하시키는 결과를 초래하였다. 이상과 같은 배양 조건 최적화를 통한 jar-fermentor 발효실험을 통하여, 고가의 유도제(IPTG)나 ALA dehydratase inhibitor를 첨가하지 않고도 8.2 g/L 수준의 고농도 ALA를 얻을 수 있었다.
광합성세균을 이용한 고농도 유기폐수인 두부공업폐수의 정화처리와 동시에 두부공업폐수를 생물제초제인 ${\delta}-aminolevulinic$ acid (ALA) 생산용 대체기질로 이용할 목적으로 Rhodobacter capsulatus KK-10을 사용하여 COD 제거율과 ALA 생산능을 검토하였다. 사용된 두부공업폐수의 성상은 pH 4.2, COD/BOD와 BOD/N의 비율은 0.98 및 17.2, BOD : N : P의 함유비율은 10 : 6 : 4, 젖산 함유량 1,080 ppm 등으로 광합성세균의 생육에 적당한 조건이었다. 두부공업폐수에서 본 균주를 4일 동안 배양한 결과 약 94% COD 값의 감소와 1.2 g/l 균체생육을 보였으며 대수기 중기에서 ALA 탈수효소 저해제인 levulinic acid(LA)를 15 mM 첨가한 결과 55 mg/l의 ALA 생산량을 나타내었다. ALA의 전구물질인 succinate 및 glycine과 LA를 각각 15 mM의 농도로 동시 첨가시 최대 114 mg/l의 생산량을 보였다. 상기의 물질들을 각각 15 mM 농도로 연속 첨가한 후 ALA 생성량을 검토한 결과 LA 1회와 glycine과 succinate를 3회에 걸쳐 첨가하였을 때 120 mg/l로 가장 효과적이었으며 COD 제거율은 92%를 나타내었다.
광합성세균을 이용하여 생물제초제의 하나인 ${\delta}-aminolevulinic$ acid(ALA)를 생산할 목적으로 자연계로부터 ALA 생산능력이 우수한 균주를 분리하고 ALA의 최적생산에 미치는 일부 배양특성을 검토하였다. 선정균주 KK-10을 동정한 결과 홍색비유황세균에 속하는 Rhodobacter capsulatus로 판명되었다. 본 균주의 ALA 생산성을 높이기 위하여 ALA 탈수효소의 저해제인 levulinic acid(LA)를 15 mM 농도로 배양중기에서 배양액에 첨가함으로써 ALA의 생산량은 약 20배(28 mg/l) 증가되었다. ALA의 전구물질인 glycine과 succinate를 각각 30 mM 복합첨가할 때 약 50배(73 mg/l)생산량을 나타내었고 전구물질의 첨가에 의해 ALA 합성효소의 생합성량은 2배 증가하였다. 분리균주는 전구물질 함유 배지에 15 mM LA를 대수기 중기부터 4회 연속첨가함으로써 85 mg/l 균체외 ALA를 생산하였다.
이 연구에서는 글라이코 캘릭스 형성 박테리아를 이용한 콘크리트 구조체의 표면 코팅기술의 실제 적용의 중요성과 문제점을파악하기 위하여 유사 하수환경에서 Mock-up 실험을 수행하였다. 황산염 열화의 조건에서 원주형 콘크리트시험체의 압축강도와 질량의 변화를 평가하였다. 박테리아의 생장성 및 글라이코 캘릭스 생성량은 하수관에서 채취한 시료로부터 평가되었다. 이와 함께 유사 하수환경에서 Rhodobacter capsualtus의 적용이 주변 생태환경에 미치는 유해성을 평가하기 위해 차세대 염기서열 분석이 수행되었다. Mock-up 실험결과 개발된 코팅재가 적용된 콘크리트 시험체는 황산염 열화에 의한 콘크리트의 압축강도 저하 및 질량감소는 발생하지 않았으며, 하수 환경에서 우수한 열화저항성능을 갖는 것으로 평가되었다. 재령 91일에서 경화된 코팅재에서 분리된 박테리아의 생균수 및 글라이코 캘릭스 생성량은 각각 1.4×104cell/mL 및 67.5mg/㎤이었다. 더불어 글라이코 캘릭스 코팅 콘크리트 하수관이 설치된 하수에서는 유해균주가 발견되지 않았다. 이는 코팅 재료로서 활용된 Rhodobacter capsulatus가 하수 환경에서 주변 생태환경에 미치는 영향이 없음을 의미한다.
In an effort to identify possible microbes for seeking bioagents for remediation of herbicide-contaminated soils, seven species of phototrophic nonsulfur bacteria (Rhodobacter capsulatus and sphaeroides, Rhodospirillum rubrum, Rhodopseudomonas acidophila, blastica and viridis, Rhodomicrobium vannielii) were grown in the presence of the herbicide, butachlor, and bacterial growth rates and nitrogen fixation were measured with different carbon sources. Under general conditions, all species showed 17-53% reductions in growth rate following butachlor treatment. Under nitrogen-fixing conditions, Rb. capsulatus and Rs. rubrum showed 1-4% increases in the growth rates and 2-10% increases in nitrogen-fixing abilities, while the other 5 species showed decreases of 17-47% and 17-85%, respectively. The finding that Rp. acidophila, Rp. blastica, Rp. viridis and Rm. vannielii showed stronger inhibitions of nitrogenase activity seems to indicate that species in genera Rhodobacter and Rhodospirillum are less influenced by butachlor than those in Rhodopseudomonas and Rhodomicrobium in terms of nitrogen-fixing ability. Overall, nitrogenase activity was closely correlated with both growth rate and glutamine synthetase activity (representing nitrogen metabolism). When the carbon sources were compared, pyruvate (three carbons) was best for all species in terms of growth rate and nitrogen fixation, with malate (four carbons) showing intermediate values and ribose(five carbons) showing the lowest; these trends did not change in response to butachlor treatment. We verified that each of the 7 species had a plasmid ($12.2{\sim}23.5\;Kb$). We found that all 7 species could use butachlor as a sole carbon source and 3 species were controlled by plasmid-born genes, but it is doubtful whether plasmid-born genes were responsible to nitrogen fixation.
최근 들어 박테리아를 이용하여 콘크리트의 수복하거나 박테리아 대사를 이용한 보수재료에 대한 연구가 수행되고 있다. 본 연구는 박테리아 대사를 이용하여 슬라임을 형성하며 이를 이용한 보수재료의 개발에 대한 기초적 연구로서 박테리아 슬라임을 포함한 시멘트 코팅재의 내구성 평가를 다루고 있다. 기초연구를 위해 4가지 박테리아(Rhodobacter capsulatus, Rhodopseudomonas palustris, Bacillus thuringiensis, Bacillus subtilis)과 2가지 배양조건이 고려되었으며, 제조된 코팅재를 사용하여 황산 5% 수용액에 노출에 따른 강도 변화, 염화물 확산계수, 초음파속도 평가가 수행되었다. 박테리아가 혼입된 코팅재의 경우 강도가 개선되었으며, 황산 5% 수용액 침지 이후에도 7일까지는 강도가 개선되었다. 염화물 확산계수도 Rhodopseudomonas palustris를 제외한 경우 충분한 염해저항성능을 나타내었으며, 초음파 속도 역시 우수하게 평가되었다. 장기열화에 대한 슬라임의 저항과 박테리아의 수명을 연장할 수 있는 호기성 환경이 유지된다면 대상 박테리아는 열화환경에 노출된 콘크리트 구조의 보수재 적용에 사용될 수 있는 공학적 가능성을 보여준다.
In this study, a mortar was prepared using Rhodobacter capsulatus which is forming glycocalyx and immersed in a simulated sewage environment. As a result of the experiment, it was observed that bacteria continued to grow in the mortar immersed in the simulated sewage environment, and it was confirmed that glycocalyx was formed by bacteria on the surface of mortar specimen.
이 연구에서는 박테리아 기반 악취저감 키트의 악취제거 성능을 평가하였다. 박테리아는 악취오염원인 암모니아(NH3), 황화수소(H2S), 총질소(T-P) 및 총인(T-N)을 제거할 수 있는 Rhodobacter capsulatus, Paracoccus limosus 및 Brevibacterium hankyongi를 사용하였다. 사용된 소재들은 박테리아와 다공성골재(팽창질석, 제올라이트 비드, 활성탄)이며, 제거 메커니즘에 따라 소재들의 융합을 달리하였다. 물리적 흡착 메커니즘을 갖는 소재들(제올라이트 비드 및 활성탄)은 악취오염원(NH3, H2S, T-P 및 T-N)의 농도 저감율이 점차 둔화되어 48시간 이후부터 더 이상의 악취오염원의 농도의 저감 효과가 없었다. 생물학적 흡착 메커니즘으로 악취를 제거하는 박테리아가 고정화된 팽창질석은 지속적인 농도 저감으로 108시간 이후에 악취오염원의 농도가 0 ppm에 도달하였다. 결과적으로 실제 하천수에서 물리적 흡착 메커니즘을 갖는 소재들의 악취제거 성능은 환경부에서 제시하고 있는 악취 배출허용 기준을 만족하지 못한 반면, 박테리아가 고정화된 팽창질석은 악취 배출허용 기준을 만족하였으며, 수질도 1등급으로 평가되었다.
The necessity to develop economical and eco-friendly technologies is steadily increasing. Plant growth promoting rhizomicrobial strains PGPR are a group of microorganisms that actively colonize plant roots and increase plant growth and yield. Pot experiments were used to investigate the potential of some rhizobacterial strains to enhance the Brassica rapa growth. Microbial strains were successfully isolated from the rhizosphere of Panax ginseng and characterized based on its morphological and plant growth promotion characters. Surface disinfected seeds of Wisconsin Fast B. rapa were inoculated with the selected PGPR microorganisms. The different pots treatments were inoculated by its corresponding PGPR ($10^7cfu\;mL^{-1}$) and incubated in the growth chamber at $25^{\circ}C$ and 65% RH, the light period was adjusted to 24 hours (day). NPK chemical fertilizer and trade product (EMRO, USA) of effective microorganisms as well as un-inoculated control were used for comparison. Plants harvested in 40 days were found to have significant increase in leaf chlorophyll units and plant height and also in dry weight of root and shoot in the inoculated seedlings. Root and shoot length and also leaf surface area significantly were increased by bacterial inoculation in sterile soil. The study suggests that Rhodobacter capsulatus and Azotobacter chroococcum are beneficial for B. rapa growth as they enhance growth and induced IAA production and phosphorus solubilization. This study presents some rhizomicrobial strains that significantly promoted growth of Wisconsin Fast Plant B. rapa in pot experiment under different soil conditions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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