식물체에 해를 끼치지 않고 식물체와 공생하는 박테리아는 식물의 생장을 촉진 시키며 친환경적 식물 보호제 역할을 함으로서 높은 관심을 받아왔다. Methylobacterium spp.로 분리된 분홍색 색소를 형성하는 methylotrophic bacteria (PPFMS)는 식물의 잎 표면에 서식한다. 거의 모든 식물체의 잎에는 PPFMS를 가지고있으며, Methylobacterium의 특별한 특성을 가진 이들은 탄소와 에너지원으로 잎의 methanol를 이용한다. 비록 이들 박테리아들은 잘 알려 지지 않았지만. 그들은 식물 대사 작용에 영향을 주면서 함께 진화되어 왔다. 이 주장은 다음의 예로 보인 관찰로서 뒷받침 한다. (1) PPFMS는 씨 안에서 발견되고 (2) PPFMS는 자주 무균 세포 배양에서 발견되고 (3) 적은 수의 PPFMS를 지닌 종자는 낮은 발아율을 보였고, (4) 감소된 PPFMS를 가진 식물들은 낮은 줄기/뿌리 비율을 보이고, (5) 콩깍지 형성 시기에 콩잎에 PPFMS의 엽면처리는 종자 수와 생산량을 높이며, (6) 우산이끼를 배양하는데 있어서 PPFM에 의해 생성된 비타민 Rl2는 우산이끼의 생장을 위해 필요하고 (7) 벼에 있어서 Rhizoctonia solani에 인해 나타나는 엽초마름병의 발병률은 PPFMS를 처리한 벼에서 억제되거나 감소되었고, 그리고 (8) PPFM의 종은 기공과 엽록소의 농도, malic acid의 함량을 증가시켜 식물의 광합성 능을 증가시켰다. Methylobacterium spp.은 식물체의 잔사를 이용하거나 식물체에 유용한 대사산물을 생산함으로써 식물의 신진대사에 관여하는 것으로 알려진 공생자이다. 박테리아와 식물체간의 이로운 상호작용에 관해 알려진 많은 보고서들이 있다. 식물체의 수분장애 완화, 광합성호르몬 생산, 그리고 질소고정과 같은 식물의 생장을 촉진시키는 박테리아 종과 같은 선발은 성공적으로 분리 해낼 수 있었고, 작물생산에 있어서 이 같은 미생물의 처리는 생산력을 증가시킬 것이다.
Twenty isolates of Bacillus spp. obtained from livestock manure composts and cotton-waste composts were tested for in vitro antagonistic effects against soilborne plant pathogenic fungi, Fusarium oxysporum, Phytophthora capsici, Rhizoctonia solani AG-4, and Sclerotinia sclerotiorum. Seven isolates of Bacillus spp. had antagonistic effects on mycelial growth of all the isolates of F. oxysporum tested. The bacterial isolate RM43 was the most effective to inhibit the mycelial growth of the fungal isolates. Twelve isolates of Bacillus spp. had antagonistic effects on mycelial growth of all the isolates of P. capsici tested. The bacterial isolates M34 and M47 were very effective to inhibit the mycelial growth of the fungal isolates. Thirteen isolates of Bacillus spp. had antagonistic effects on mycelial growth of all the isolates of R. solani AG-4 tested. The bacterial isolates M27 and M75 were very effective to inhibit the mycelial growth of the fungal isolates. Fourteen isolates of Bacillus sp. had antagonistic effects on mycelial growth of all the isolates of S. sclerotiorum tested. The bacterial isolates M49 and M75 were very effective to inhibit the mycelial growth of the fungal isolates. The antagonistic effects of most Bacillus spp. isolates against the isolates of the four fungi differed depending on the fungal species and the isolates of each fungus. The bacterial isolates M27 and M75 were the most effective to inhibit the mycelial growth of all four fungi.
Rhizoctonia solani AG-1(IA), R. oryzae, R. oryzae-sativae의 다른 지역(地域) 및 포장분리균주(圃場分離菌株)들간의 균사융합형(菌絲融合型)과 배양(培養)에 의한 균사상호작용(菌絲相互作用)조사하였다. R. solani AG-1(IA)균주(菌株)들의 상호간(相互間) 균상융합(菌絲融合) 검정결과(檢定缺課), 세포질융합(細胞質融合)은 자기균사융합(自己菌絲融合)에서만 발생하였으며, 다른 균주(菌株)들 상호간(相互間)에는 비세포질융합(非細胞質融合)이 발생하였다. R. oryzae균주(菌株)들의 상호간(相互間) 균사융합(菌絲融合) 검정결과(檢定缺課), 세포질융합(細胞質融合)은 자기균사융합(自己菌絲融合)에서 뿐 만 아니라 다른 지역분리(地域分離) 균주(菌株)들간의 6조합(組合)과 같은 지역(地域)의 다른 포장분리(圃場分離) 균주(菌株)들간의 2조합(組合)에서 발생하였다. 이 경우에 이 균의 4균주(菌株) 상호간(相互間)에서는 세포질융합(細胞質融合)이 발생하였다. R. oryzae-sativae균주(菌株)들의 상호간(相互間) 균상융합(菌絲融合) 검정결과(檢定結果), 세포질융합(細胞質融合)은 자기균사융합(自己菌絲融合)에서만 발생하였으며, 다른 지역(地域) 및 포장분리(圃場分離) 균주(菌株)들간에는 비세포질융합(非細胞質融合)만이 발생하였다. R. solani의 비세포질융합균주(非細胞質融合菌株)들(NCFIs)을 PDA에서 대치배양(對峙培養)한 결과(結果), 치사대(致死帶)가 형성되었으며, R. oryzae의 NCFIs간에도 치사대(致死帶)가 형성되었다. R. oryzae의 세포질융합균주(細胞質融合菌株)들(CFIs)간에는 치사대(致死帶)가 형성되지 않았는데, 그 CFIs의 균사(菌絲)들은 어떤 경계선(境界線)도 형성하지 않고, 상호간(相互間)에 혼합(混合)되었다. R. oryzae-sativae의 NCFIs간에는 치사대(致死帶)가 형성되지 않고, 엉킴대가 형성되었다.
Recently, the importance of management and cultivation of grasses has been increased in Korea. Among these cultural practices, the appropriate control of diseases is considered more important than other cultivation techniques such as fertilization and irrigation. The damages of brown patch and large patch caused by Rhizoctonia spp. and Pythium blight caused by Pythium spp. are serious in the major cultivation area of turfgrass in Korea. Since these diseases are difficult to control by agrochemicals, the damages are very serious if these are occured. The periodic spray of agrochemicals, to protect and control these diseases could make some problems of toxicity and environmental pollution as well as rising of non-target diseases. Therefore, the biological methods to control diseases have been required to decrease problems resulted from overuse of agrochemicals, to conserve natural ecosystem, and to control effectively diseases of grasses in the long period. The number of studies about biological control using antagonistic microorganisms have been increased for last half century. However, the application of biological control method has been very limited. In this study, thirteen isolates of R. cerealis, 8 isolates of R. solani and 3 isolates of Phthyn spp. have been isolated from diseased turfgrass in golf course and grass-culture area that have patch and wilting symptoms of zoysia grass and creeping bentgrass. Isolation frequency of R. cerealis and R. solani was high in especially zoysiagrass, while Pythym spp. was isolated from bent grass at low frequency but showed high pathogenicity. Totally, 205 isolates of soil microorganisms were isolated in this study as primary antagonistic microorganism by Herr's triple agar layer plate and dual culture method using rhizosphere of grasses, soil of crop field as the source of antagonistic microorganisms. Among the 205 isolates, 23 isolates were actinomycetes and 182 isolates were bacteria. All of the actinomycetes were isolated by Herr's method. Antagonistic effect of primary isolated microorganisms was tested for in vitro mycelial growth inhibition against pathogenic fungi isolated from grasses and for inhibition of disease occurrence in 24 well tissue culture plate and pot experiment. Then, four isolated of bacteria which are BG23, BG74, BG136 and BG171 were selected as antagonistic microorganisms against soil-born pathogenic fungi of bentgrass.
골프 코스 잔디 뿌리부근의 토양으로부터 분리된 4종 Pseudomonas spp.의 배양조건과 잔디에 갈색마름병의 원인이 되는 R. solani와 동전마름병의 원인이 되는 S. homoeocarpa에 대한 항진균 활성을 조사하였다. 배양조건으로는 pH 7.0으로 $20-25^{\circ}C$에서 배양할 때 생육도 우수하며 양호한 항진균 활성을 나타내었다. 대량배양을 위한 기본배지로 King's B 배지를 사용하였으며 탄소원으로 sucrose를, 질소원으로 tryptone을, 무기염류로는 $K_2HPO_4$를 첨가하였을 때 균의 생육이 가장 우수하며 항진균 활성도 높았다. 갈색마름병과 동전마름병에 대해 전반적인 항진균 활성의 경우, 상대적으로 낮은 온도의 지역에서 생존하는 YUD-F군(P. mandelii와 P. fluorescens)의 Pseudomonas spp.가 YUD-O군(P. trivialis와 P. jessenii)의 Pseudomonas spp. 보다 항진균 활성이 보편적으로 넓게 작용하고 있음을 알 수 있다. 이는 지역별 평균 기온차가 각각의 Pseudomonas spp.의 최적 생육온도와 항진균 활성에 영향을 주고 있는 것으로 보여 진다. YUD-O군의 Pseudomonas spp.는 동전마름병에 대해 우수한 항진균성을 보이지만, 갈색마름병에 대해선 상대적으로 약한 항진균 활성을 보여주고 있다.
Antogonistic bacteria against Rhizoctonia solani and Pythium spp., causing serious damage to golf course grasses, were isolated from the top soil of several golf courses in Korea. The isolate of Limk0102 was selected as the biological agent by characterization of antifungal activity, large scale preparation, fungicides tolerance and ecological fitness to the targe environment. The isolate was identified as Bacillus subtilis by biochemical and physiological characterization, and 165 rDNA sequence analysis. The bacterial agent was formulated as a granule type by seeding it on fine sand. The formulated agent showed high recovery rate (more than 10$\^$8/ cells/g sand) even after 6 month-storage at room temperature with similar antifungal activity with that of original cells. In vitro, the biological agent successfully exhibited antagonistic performance on bentgrass inoculated with R. solani or Pythium spp. isolated from the diseased grasses on golf courses. Field evaluation on disease control activity and ecological fitness of the agent is now under going on several golf courses.
토마토의 엽권에서 분리한 Fusariym graminearum이 분비하는 물질은 벼 도열병균(Pyricularia oryzae)의 여러 종의 식물병원 진균에 대한 항균활성을 나타내었으며, 이러한 활성물질을 PDA에서 본 균을 배양 한 후 chloroform으로 추출하여 분리정제 하였다. HPLC에 의하여 5종류의 활성 물질을 분획하였으며, 그중 1번(F402) 화합물을 벼 도열병균(P. oryzae)을 포함한 22개 식물 병원 진균에 대하여 살균 활성범위를 조사한 결과, 이 화합물은 50$\mu\textrm{g}$/ml 농도에서 Pythium ultimum, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum은 전혀 억제하지 못하였으며, Phytophthora spp., Cladosporium fulvum, Fusarium spp., Corynespora cassicola에는 어느 정도의 활성이 있었지만 낮게 나타났고, P. oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Alternaria solani는 100% 억제하여 활성이 높게 나타났다. 또한 장내 세균에 대한 활성을 MIC로 비교할 때 Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecium에 대하여는 각각 12.5, 25 $\mu\textrm{g}$/ml였고 Staphylococcus aureus는 25-50$\mu\textrm{g}$/ml으로 나타났으며, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Klebsiella aerogenes, Enterobacter cloacae에서는 100$\mu\textrm{g}$/ml 이상으로 활성이 나타나지 않았다. F402를 200$\mu\textrm{g}$/ml의 농도로 직접 살포한 식물체에서의 방제효과는 벼도열병, 벼 깨씨무늬병, 보리 흰 가루병에 대하여는 80%이상이었으나, 벼 잎집무늬마름병, 오이 잿빛곰팡이병, 토마토 역병, 밀 녹병에서는 낮았다.
This study was to provide the basic data in improving protoplast formation and regeneration of antagonistic bacteria against phytopathogenic fungi and pest. The antagonistic rhizobacterium, BS 101, against Rhizoctonia solrmi and Fusurium oxyspomm was isolated and identified as Bacillus subtilis. Another bacterium for protoplast formation and regeneration was B. thuringiensis subsp. kurstcJtiHD-l (BT 37669) which have insectcidal toxin in the orders Coleopteria, Dipteria etc.. Auxotrophic mutants, BS 1013 and BT 69, were isolated by treating with NTG 300 ug/ml for 40 min. at $37^{\circ}C$, and with NTG 300 ug/ml for 30 min. at $37^{\circ}C$, respectively. The BS 1013 and BT 69 were converted to protoplas by treating with lysozyme 300 ugh1 for 30 min. at 37C, and lysozyme 9 mglml for 60 min. at $37^{\circ}C$, respectively. The fequencies of the protoplast formation of BS 1013 and BT 69 were 90.00 and 92.83% respectively, after 1~2 day at $37^{\circ}C$. The regeneration kequencies of the protoplasts BS 1013 and B T 69 were 0.52 and 0.10%, respectively, after 4~6 days at $37^{\circ}C$.
Rhizoctonia oryzae, R. oryzae-sativae 및 R. solani의 균사융합군의 각 균주에 대한 배양특성과 creeping bentgrass 및 들잔디에 대한 병원성과 살균제의 효과에 대하여 조사하였던 바 다음과 같다. 1. 균사생육에 미치는 온도의 영향을 보면 네가지 형으로 나눌 수 있는데, R. oryzae와 R. oryzae-sativae는 생육적온이 $30~35^{\circ}C$인 호고온형이었고, R. solani의 균사융합군의 각 균주도 세가지 형으로 나뉘었는데, 즉 생육적온이 $25~30^{\circ}C$인 고온형, 20~25$^{\circ}C$인 중간형 및 $20^{\circ}C$인 저온형이었다. 2. 접종실험에서 creeping bentgrass에 대해서는 R. oryzae와 R. solani의 AG-1( I A), AG-1( I B), bentgrass분리균 및 벼 분리균이 강한 병원성을 나타냈고, 그 다음으로 AG-2-1, AG-4, AG-5 및 AG-2-2가 중 또는 약한 병원성을 나타냈다. 들잔디에 대해서는 R. oryzae와 R. solani의 들잔디 분리균이 강한 병원성을 나타냈고 AG-1( I B)와 AG-5가 중정도의 병원성을 나타냈다. 3. 살균제의 효과는 creeping bentgrass의 brown patch병과 들잔디의 large patch병에 대해서 capro와 mytan등이 가장 좋았고 brown patch병에 대해서는 thiopan과 pencycuron이, large patch병에 대해서는 tolos와 thiopan이 각각 그 다음으로 좋았다.
골프장의 한국 잔디에서 Rhizoctonia solani AG2-2에 의해 발생되는 large patch의 근권토양과 건전 잔디의 근귄 토양 샘플을 hole cutter (diameter $10\;cm\;{\times}\;8\;cm$ deep)을 이용하여 샘플을 채취하여 무기성분과 미생물을 조사하였다. Large patch와 건전 잔디의 분산분석 결과 $NO_3$-N(P=0.05), NH4-N(P=0.1) 및 K(P=0.1) 함량에서 중요한 유의차이를 보였다. Large patch가 발생한 토양에 $NO_3$-N 함량은 9.49 mg/kg로 건전한 잔디의 토양 7.02 mg/kg 보다 높았다. 반면, $NH_4$-N의 함량은 large patch 발생한 토양이 12.02 mg/kg으로 건전한 잔디의 근권 토양 14.40 mg/kg 보다 높았다. K 함량은 large patch 토양이 건전한 잔디의 토양보다 낮았다. 근권 토양의 미생물 집락 수를 조사하여 분산 분석한 결과 Pseudomonas spp 집락 수에서 중요한 유의차이(P=0.05)를 보였다. Large patch가 발생한 토양에 미생물의 집락 수가 건전한 잔디의 토양에 비하여 낮았다. 이들 결과는 근권 토양에 과다한 $NO_3$-N, $NH_4$-N 및 K 함량과 토양미생물의 밀도는 large patch 발병과 관련 이 있을 수 있다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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