Lactobacillus reuteri는 혐기적 조건에서 글리세롤을 대사하여 강력한 항균물질인 루테린을 생산한다. 본 연구의 목적은 다양한 조건에서 루테린의 생산성을 비교 연구하는 것이었다. 회분식 배양에서 $32,\;37,\;42^{\circ}C$에서 비교하였을 때 온도가 높을 수록 시간당 생산되는 량은 많았고 생산이 더 빠른 시간내에 둔화되었으며 생산되는 총량이 더 많았다. 다양한 아미노산을 첨가한 상황에서 생산된 루테린 활성을 조사하였을 때 proline을 제외하고 대부분의 아미노산은 루테린 활성을 저하시켰다. 생산된 루테린은 다양한 식중독균의 사멸을 유도하였다. 생산성을 증가시키기 위하여 L. reuteri 세포를 반응기에 현탁시키고 글리세롤 용액을 연속적으로 통과시켰다. 회분식에 비교하여 연속식 공정으로 루테린 생산성은 현저히 증가하였다.
Lactobacillus reuteri는 사람과 동물의 장관 내에 존재하는 유산균의 일종으로서 혐기적 조건에서 glycerol을 대사하여 항균 물질인 루테린을 생산한다. 본 연구의 목적은 고정화된 L. reuteri를 이용하여 회분식 또는 연속식 생산 공정을 이용하여 루테린 생산의 반응 조건을 조사하는데 있었다. Agarose를 사용하여 고정화된 L. reuteri는 250mM glycerol과 반응시켜 루테린을 생산하였다. Agarose 농도를 0.5%로 조정한 회분식 생산 공정에서는 약 36시간 동안 루테린 생산이 지속되었고 시간 경과에 따라 루테린의 생산이 점차 감소하였다. 연속식 공정에서는 고정화 균이 현탁세포에 비하여 루테린 생산 시간이 약 2배 정도 연장되었으며 총 루테린의 생산 또한 502mM로 현탁 세포에 비하여 약 1.5배 증가하였다. 본 연구의 결과는 고정화 세포를 이용한 루테린 생산의 증가 가능성을 제시하였다.
본 연구에서는 5종의 유산균들 (Lactobacillus reuteri, L. acidophillus, L. bulgaricus, L. casei and Bifidobacterium longum)의 식중독 균들에 대한 항균력을 조사하였다. 각 유산균들을 3가지 서로 다른 조건 (MRS+glucose, MRS+0.5 M glycerol, 0.25 M glycerol solution)에서 배양한 후 그 상층액이 포함된 Moulter Hinton Agar에 8종의 유해균들을 접종하였다. MRS+glucose, MRS+0.5 M glycero에서의 상층액을 이용한 실험에서는 L. reuteri의 항균력이 다른 유산균들에 비해 높지 않았으나 0.25 M glycerol solution에서는 탁월하게 높은 결과를 나타내었다. (p<0.05). 0.25 M glycerol solution에서 나타난 높은 항균력은 L. reuteri가 glycerol을 이용하여 생산하는 reuterin이란 물질 때문이라 생각되며, 0.25 M glycerol solution의 상층액을 500 MHz Nuclear Magnetic Resonance (NMR)를 통해 분석한 결과 reuterin의 존재를 확인할 수 있었다. 3가지 조건 하에서의 항균력 시험 결과 가장 높은 항균력을 나타낸 3가지 유산균들 (Lactobacillus resuteri, L. bulgaricus, L. casei)을 선발, 각각 최고의 항균력을 나타낸 조건으로 배양하여 최소사멸농도 (minimum bactericidal concentration)를 측정한 결과, L. reuteri가 생산한 reuterin이 광범위 항균물질임을 확인하였다. 또한 pH 적정, pepsin 혹은 trypsin 처리를 한 후 3가지 유산균들의 항균력 변화를 조사한 결과 L. bulgaricus와 L. casei의 항균력은 이러한 조건에서 상당히 감소한 반면 reuterin의 항균력은 아무런 영향을 받지않았다 (p<0.05). 이상의 결과들로 보아 주요 유산균들 중에서 L. reuteri의 항균력이 가장 우수하면서 광범위하였으며 이는 L. reuteri가 분비하는 항균물질인 reuterin에 기인한 것으로 사료된다. 또한 reuterin의 항균력은 타 유산균과는 달리 장관내 pH나 단백질 분해효소에 의해 영향을 받지 않으므로 인체나 동물 장관에서 가장 높은 효력을 가진다고 판단할 수 있다.
This study assessed the effects of the antimicrobial substances sulforaphane, grapefruit seed extracts (GSE), and reuterin on the expression of Salmonella HilA and InvF virulence gene using a LacZY assay (${\beta}$-galactosidase assay) with hilA:lacZY and invF:lacZY fusion strains of Salmonella typhimurium SL1344. Salmonella was grown for 8 hr at $37^{\circ}C$ in the presence of diluted antimicrobial substances ($2\;{\mu}g/mL$ sulforaphane, $20\{\mu}g/mL$ GSE, and 0.26 mM reuterin) at concentrations that did not inhibit the cellular growth of Salmonella. Sulforaphane inhibited the expression of HilA and InvF by 50-90 and 20-80%, respectively. GSE also inhibited the expression of both genes, but to a lesser degree. Among the 3 antimicrobial substances, reuterin showed the least inhibition, which was abolished after 3-4 hr. None of the antimicrobial substances inhibited the ${\beta}$-galactosidase enzyme activity of S. typhimurium. The assay used in this study represents a very sensitive method for screening bioactive substances that inhibit the expression of virulence genes in Salmonella.
최근 기후의 급속한 변화에 따라서 식품과 농산물에 Aspergillus, Fusarium 및 Penicillium속에 해당하는 곰팡이에 의한 오염이 빈번하고 이들에 의해 생성되는 aflatoxins, fumonisins, ochratoxins, patulin, trichothecenes, zearalenone등의 곰팡이 독소로 인해서 인간의 건강에 위해를 끼치고 또한 경제적인 손실을 가져오게 하고 있다. 최근 건강에 대한 소비자의 관심으로 인하여 기존에 사용되고 있는 프로피온산 및 소브산과 같은 보존료에 대한 거부감이 증가하고 있어 천연의 소재로부터 이를 대체할 만한 항진균제의 개발이 필요한 상황이다. 본 총설에서는 곰팡이의 생육 및 독소 생성을 제어하기 위한 생물학적 방법으로 유산균의 역할에 대하여 살펴보고자 하였다. 최근의 연구에 의하면 유산균은 저분자 화합물인 유기산, reuterin, 단백질 유래 화합물, 하이드록시 지방산, 페놀 화합물과 같은 다양한 대사산물을 통하여 곰팡이의 생육을 효과적으로 억제시키고 있으며, 또한 유산균의 세포벽 구성성분과의 흡착, 곰팡이 독소의 분해 및 곰팡이 독소의 생산 저해 등을 통하여 곰팡이 독소의 생산을 감소시키고 있는 사실이 제시되고 있다. 유산균은 다양한 종류를 포함하고 있으며 다양한 대사산물을 생산하고 있으므로 이를 바탕으로 효과적으로 곰팡이의 생육 및 독소 생산을 제어할 수 있는 잠재력 갖추고 있으므로, 유산균은 식품에 있어서 곰팡이의 생육을 조절하는 소재로서 주목 받을 것으로 기대된다.
A lactic acid bacterium producing an antimicrobial substance against Escherichia coli O157:H7 was isolated from raw milk and identified as Lactobacillus amylovorus ME-1. In addition to E. coli O157 :H7, the antimicrobial substance also inhibited the growth of Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyrogenes, and Yersinia enterocolitica. The antimicrobial substance was stable at pH 2-12 and $121^{\circ}C$ for 15 min and insensitive to proteinase K, protease, amylase, and catalase. Purification of the antimicrobial substance was conducted through methanol and acetonitrile/ethylacetate extraction, ultrafiltration with a 500 Da cutoff, thin layer chromatography (TLC) with silicagel 60, and high performance liquid chromatography (HPLC) with a $C_{18}$ reverse phase column. The ${\lambda}_{max}$ of the purified antimicrobial substance was determined as 192 nm by ultra violet (UV) scanning, while the molecular weight was estimated as 453 Da based on the mass spectrum. Accordingly, the current results suggest that the antimicrobial substance from the L. amylovorus ME-1 was not a bacteriocin, but rather a new non-proteinaceous substance distinct from acidophilin, acidolin, diacetyl, and reuterin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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