The influences of culture parameters on the decolorization of anthron-type dye, Remazol brilliant blue R(RBBR) by Pleurotus ostreatus were studied in defined media. In the decolorization, 1-10 mM nutrient nitrogen and 40 mM glucose were effective whereas agitation and Tween 80 were not suitable. The decolorization occurred and the activity of extracellular peroxidase was detected during the stationary phase.
The hazards associated with the polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are known to be recalcitrant by their structure, but white rot fungi are capable of degrading recalcitrant organic compounds. Phlebia brevispora KUC9045 isolated from Korea was investigated its efficiency of degradation of four PAHs, such as phenanthrene, anthracne, fluoranthene, and pyrene. And the species secreted extracellular laccase and MnP (Manganese dependent peroxidase) during degradation. P. brevispora KUC9045 demonstrated effective degradation rates of phenanthrene (66.3%), anthracene (67.4%), fluoranthene (61.6%), and pyrene (63.3%), respectively. For enhancement of degradation rates of PAHs by the species, Remazol Brilliant Blue R (RBBR) was preferentially supplemented to induce ligninolytic enzymes. The biodegradation rates of the three PAHs including phenanthrene, fluoranthene, and pyrene were improved as higher concentration of Remazol Brilliant Blue R was supplemented. However, anthracene was degraded with the highest rate among four PAHs after two weeks of the incubation without RBBR addition. According to the previous study, RBBR can be clearly decolorized by P. brevispora KUC9045. Hence, the present study demonstrates simultaneous degradation of dye and PAHs by the white rot fungus. And it is considered that the ligninolytic enzymes are closely related with the degradation. In addition, it indicated that dye waste water might be used to induce ligninolytic enzymes for effective degradation of PAHs.
본 연구에서는 톱밥재배용 표고(Lentinula edodes) 품종에 대한 목질계 섬유소의 분해특성을 분석하였다. 국산 표고 품종 참아람, 산백향, 산조 713호, 산조 715호, 산조 718호를 대상으로 RBBR (Remazol Brilliant Blue R) 탈색능, 목질계 섬유소 분해 효소인 MnP와 laccase의 활성을 비교 분석하였다. 5개 품종의 탈색능과 효소활성은 품종별로 다른 양상을 보였다. 리그닌의 첨가에 따른 RBBR 탈색능을 조사한 결과, 참아람과 산조 713호가 각각 배양 3일과 5일째부터 우수한 분해능을 보였다. 섬유소 분해 효소인 MnP와 laccase의 활성은 산조 713호가 배양 2일째 MnP 활성이 1,213 U/mg, laccase 활성이 1,421 U/mg, 다음으로 참아람이 배양 7일째 MnP 활성이 1,921 U/mg, laccase 활성이 2,123 U/mg으로 최고 활성을 나타냈다. 이러한 결과는 표고 육종에 있어 리그닌 분해능이 우수한 균주의 선발이 가능함에 따라 교배균주의 육종 모본 활용에 효율적일 것으로 판단된다.
본 연구에서는 백색부후균의 리그닌 분해 효소 시스템을 이용하여, 다양한 균주 중에서 목질계 바이오매스 유기용매 전처리 과정에서 발생한 리그닌(유기용매 리그닌)의 생분해에 적합한 우수 균주를 선별하고자 하였다. 우선 분양받은 15개의 백색부후균을 대상으로 shallow stationary cultur (SSC)배지와 malt extract broth (MEB)배지에 유기용매 리그닌의 첨가에 따른 Remazol Brilliant Blue R (RBBR)의 흡광도 변화를 측정하였다. RBBR 탈색능 결과, SSC 배지에서 Ceriporiopsis subvermispora, Ceriporia lacerate, Fomitopsis insularis, Phanerochaete chrysosporium, Polyporus brumalis, Stereum hirsutum 등 6종의 백색부후균에서 급격한 흡광도 변화를 나타냈다. 배양 초기에 급격한 흡광도 변화를 나타낸 6개의 백색부후균을 대상으로 균체 외 단백질 농도 및 리그닌 분해 효소 활성을 측정하였다. 선발된 6개의 균 중에서 S. hirsutum과 P. chrysosporium은 유기용매 리그닌을 첨가한 실험구에서 높은 단백질 농도가 측정되었다. 반면, 리그닌 분해 효소 활성은 F. insularis에서 배양 6일째에 manganese peroxidase (MnP) 활성이 1,545 U/mg, laccase 활성은 1,259 U/mg으로 최고 활성을 나타냈다. 결론적으로, 균체 외 단백질 농도 및 리그닌 분해 효소 활성이 전반적으로 높았던 $STH^*$와 MnP 및 laccase의 활성이 가장 높은 FOI가 유기용매 리그닌 생분해에 유리하게 작용할 것으로 판단된다.
The effect of cadmium ions on ligninolytic and decolourizing activities in cultures of two white-rot fungi, Cerrena unicolor and Trametes versicolor, were examined. Cadmium was added to the shallow stationary cultures growing on a liquid mineral medium. Both examined strains sorbed Cd ions in the first 24 hr of incubation. An appreciable stimulation of the activity of extracellular laccase (LAC) and inhibition of the extracellular manganese-dependent peroxidase (MnP) were simultaneously observed when 25 mgL-1 and 50 mgL-1 of cadmium ions were added to the cultures. On the other hand, the addition of cadmium ions also resulted in stimulating the decolorization activity of C. unicolor to decolorize Remazol Brilliant Blue R (RBBR) in the cultures, but decreasing it in the culture of T. versicolor, which is compared to the inhibition of MnP activity in this fungus. Our data indicate that the presence of Cd(II) ions can affect the ligninolytic activity of white-rot fungi. It was found that C. unicolor is a strain resistant to the presence of Cd ions in the liquid culture media, and has a potential to use this strain for bioremediation of sites contaminated with both heavy metals and aromatic pollutants.
본 연구는 Remazol Brilliant Blue R (RBBR) 염료의 탈색능을 이용, 리그닌분해능이 강한 백색부후균을 선발하고, 이들 균주들의 리그닌분해효소의 활성에 미치는 inducer, 2,5-xylidine 첨가효과를 검토하였다. 20종의 공시균주 가운데 9종이 RBBR의 탈색, glucose-1 oxidase (GOD), laccase (LAC) 및 Mn-peroxidase (MnP) 등 4가지의 활성을 모두 가지고 있었으며, 비교적 활성이 높은 5종의 균주는 Phlebia radiata, Trametes versicolor, Abortiporus biennis, Gleophyllum odoratum 및 Cerrena unicolor 등으로 확인되었다. 이들 균주 가운데 LAC 활성이 매우 높은 T. versicolor, G. odoratum 및 C. unicolor에 대한 최적 생육온도, 최적 pH 및 LAC 활성에 미치는 inducer 첨가효과를 조사한 결과, T. versicolor가 $28^{\circ}C$에서, G. odoratum 및 C. unicolor는 $25^{\circ}C$에서 가장 좋은 생장을 보였으며, 모든 균주의 배양 최적 pH는 5.5로 나타났다. 공시균주 모두 2,5-xylidine 첨가에 의하여 LAC 활성의 증가를 보였는데, T. versicolor는 $22,700nkat/{\ell}$로 대조구에 대하여 11.3배, G. odoratum은 최대 활성이 $15,400nkat/{\ell}$로 9배, C. unicolor는 $17,330nkat/{\ell}$로 5.5배의 활성증가를 나타냈다.
리그닌 분해효소 군을 가진 백색부후균들은 다핵방향족 화합물을 포함하여 염료와 폭약 및 내분비장애 물질의 분해 등 다양한 난분해성 물질을 분해할 수 있다. 리그닌 분해효소 중 laccase와 manganese peroxidase (MnP)를 각각 발현하는 벡터를 국내에서 분리한 백색부후균류의 하나인 아교버섯(Phlebia tremellosa)에 형질전환 방법으로 도입시킨 형질전환체를 사용하여 염료의 탈색능력을 분석하였다. Methyl green의 경우 3일 후 약 50%의 탈색을 보인 야생형에 비하여 laccase 형질전환체(TF2-1)와 MnP 형질전환체(T5) 모두 90% 이상의 탈색을 보였다. Remazol brilliant blue R (RBBR)에서는 야생형이 약 67%의 탈색을 보인 반면 두 가지 형질전환체들은 약 85%의 탈색을 보였다. 각각의 형질전환체들은 laccase와 MnP의 활성 및 유전자 발현도 활발한 것으로 확인되었다.
Cho, Nam-Seok;Park, J.M.;Choi, T.H.;Matuszewska, A.;Jaszek, M.;Grzywnowicz, K.;Malarczyk, E.;Trojanowski, K.;Leonowicz, A.
Journal of the Korean Wood Science and Technology
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제27권4호
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pp.72-79
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1999
The ability of several wood rotting fungi for decolorization of two anthracene derivatives, Carminic acid (CA) and Remazol brilliant blue R (RBBR), and hardwood KP bleaching liquor (BL) as well as laccase activities in these fungi were studied. The enzyme activity appeared exclusively in fungi destaining RBBR and CA, but in the case of BL, such relationship was not observed. The laccase enzyme was released into the decolorization media and its inducible (but not constitutive) forms shown destaining activity. The purified inducible forms of Kuehneromyces mutabilis and Pleurotus ostreatus laccase destained CA. Thus the possible differentiation between specificity of particular LAC forms was confirmed. In addition the nitrogen starvation induced both laccase and CA destaining activities, but the increase was higher for decolorization of CA than LAC activity. Probably LAC would be only partly responsible for decolorization of this dye. This results suggested that purified LACs decolorize CA, however its destaining activities were considerably lower than the activities on syringaldazine.
본 연구에서는 표고 교잡균주들의 생화학적 특성을 이해하기 위한 하나의 시도로서 교잡균주간의 laccase 효소의 활성을 비교하는 빠르고 간편한 방법을 모색하고자 균사체 배양 배지의 성상과 염색물질이 laccase 활성 검출에 미치는 영향을 조사 비교하였다. 고체배지와 액체배지 모두에서 발색시약이 Remazol Brilliant Blue R(RBBR)일 경우는 potato dextrose 성분 보다 malt extract 성분 배지를 사용하는 것이 표고버섯균 균사가 분비하는 세포외 laccase 활성 검출이 용이하였다. Guaiacol을 발색시약으로 사용하는 경우는 potato dextrose 성분과 malt extract 성분 배지 모두 세포외 laccase 활성 검출이 용이하였다. 2ml microfuge tube를 이용한 액체 배양 방법은 RBBR와 Guaiacol 모두 malt extract 성분배지에서 3일만에 표고 교잡균주간의 세포외 laccase 활성 검출과 정량적 비교를 가능케 하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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