Kim, Young-Mog;Park, Kun-Bawui;Choi, Jun-Ho;Kim, Jang-Eok;Rhee, In-Koo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권5호
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pp.938-943
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2004
A gene responsible for the chlorothalonil-biotransformation was cloned from the chromosomal DNA of Ochrobactrum anthropi SH35B, an isolated bacterium strain from soil. We determined the nucleotide sequences and found an open reading frame for glutathione S-transferase (GST). The drug-hypersensitive Escherichia coli KAM3 cells transformed with a plasmid carrying the GST gene can grow in the presence of chlorothalonil. The GST of O. anthropi SH35B was expressed in E. coli and purified by affinity chromatography. The fungicide chlorothalonil was rapidly transformed by the purified GST in the presence of glutathione. No significant difference in the chlorothalonil-biotransformation effect was observed among the thiol compounds (cysteine, reduced glutathione, and $\beta$-mercaptoethanol). Thus, the result reported here is the first evidence on the chlorothalonil-biotransformation by conjugation with the cellular free thiol groups, especially glutathione, catalyzed by the bacterial GST.
We have cloned the CGR1 gene encoding glutathione reductase (GR) which catalyzes the reduction of oxidized glutathione (GSSG) to reduced glutathione (GSH) from Candida albicans. The cgr1/cgr1 mutants were not viable when CaMAL2 promoter repressed the CGR1 expression. The growth of the mutants could be partially overcome by thiol compounds such as GSH, dithiothreitol, cysteine, N-acetylcysteine and GSSG. Interestingly, C. albicans with CGR1 overexpressed showed defective hyphal growth on solid medium and attenuated virulence. We have also cloned the GCS1 gene encoding ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase which catalyzes the first step of glutathione biosynthesis. The gcs1/gcs1 mutants were nonviable in minimal defined medium. The growth of the mutants could be resumed by supplementing with GSH, GSSG and ${\gamma}$-glutamylcysteine in the medium. The mutants had increased intracellular D-erythroascorbic acid level up to 2.25-fold when transferred to GSH-free medium. When the mutants were depleted of GSH, they showed typical markers of apoptosis. In conclusion, these results suggest that glutathione is an essential metabolite, and involved in hyphal growth, virulence and apoptosis in C. albicans.
The human $B_{12}$ trafficking chaperone hCblC is well conserved in mammals and non-mammalian eukaryotes. However, the C-terminal ~40 amino acids of hCblC vary significantly and are predicted to be deleted by alternative splicing of the encoding gene. In this study, we examined the thermostability of the bovine CblC truncated at the C-terminal variable region (t-bCblC) and its regulation by glutathione. t-bCblC is highly thermolabile ($T_m={\sim}42^{\circ}C$) similar to the full-length protein (f-bCblC). However, t-bCblC is stabilized to a greater extent than f-bCblC by binding of reduced glutathione (GSH) with increased sensitivity to GSH. In addition, binding of oxidized glutathione (GSSG) destabilizes t-bCblC to a greater extent and with increased sensitivity as compared to f-bCblC. These results indicate that t-bCblC is a more sensitive form to be regulated by glutathione than the full-length form of the protein.
To evaluate the role of xanthine oxidase in liver damage by CCl4, a group of rats were fed tungstate for a month, which suppressed the activities of xanthine oxidase in serum and liver. Control group of rats were fed standard diet without tungstate. Liver damage was induced both in tungstate fed and control groups by two intraperitoneal injections of CCl4 at the level of 0.1ml/100g body weight at intervals of 24 hours. Increases in the levels of serum alanine aminotransferase by CCl4 were significantly smaller in tungstate fed rats than in control rats. Concomitantly, histopathologic changes were less in tungstate fed rats than in control ones. In rats either treated with CCl4 or not, hepatic type O xanthine oxidase activities were remarkably reduced by tungstate feeding. Hepatic aniline hydroxylase activities were higher in rats fed tungstate than control rats when animals were not treated with CCl4, but the enzyme activities were lower in tungstate fed rats than control when they were treated with CCl4. Neither tungstate feeding nor CCl4 treatment caused any significant changes in hepatic glutathione contents, and activities of hepatic glutathione S-transferase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase. It is concluded xanthine oxidase reaction augment CCl4 induced liver damage via oxygen free radical system.
Iron deficient anemia in piglets could be overcome by supplementary iron. Overloaded iron induced peroxidation of cell membrane and increased malonaldehyde (MDA). Antioxidant activity of vitamin C has been studied in iron-overloaded swine plasma. Erythrocyte fragility, MDA, glutathione, vitamin A, and vitamin E were measured in swine plasma with or without iron (0~1mg/dl) and vitamin C (0~10mg/dl). Erythrocyte fragility increased from 8% to 45% in iron group and reduced from 57% to 43% in vitamin C group with dose dependant response. MDA was $0.94{\pm}0.05$ and $1.86{\pm}0.10$ nmol/ml in piglet and pig, respectively, and significantly high in pig (p<0.05). Iron increased MDA from $1.86{\pm}0.10$ to $9.46{\pm}0.04$ nmol/ml in pig, but not in piglet (p<0.05). Vitamin C reduced MDA from $9.46{\pm}0.04$ to $4.80{\pm}0.10$ nmol/ml in pig. Iron increased glutathione from $90.12{\pm}0.10$ to $108.52{\pm}5.29$ nmol/dl in pig, and vitamin C reduced glutathione from $108.52{\pm}5.29$ to $93.52{\pm}2.44$ nmol/dl (p<0.05). Vitamin A and E were $24.86{\pm}2.70$ to $138.29{\pm}6.70{\mu}g/dl$, respectively in iron group, and $35.76{\pm}0.60$ to $177.21{\pm}2.95{\mu}g/dl$, respectively in supplementary vitamin C group (p<0.05). These data indicated an antioxidant activity of vitamin C in iron-overloaded swine plasma.
Objectives: Palmul-tang (hachimotsu-to in Japanese and bawu-tang in Chinese) is a mixture of eight herbs. It is traditionally used for the treatment of anemia, anorexia, general weakness, and female infertility in China, Japan, and Korea. In this study, we investigated the protective effects of Palmul-tang water extract (PTE) against ethanol-induced acute gastric injury in rats. Material and Methods: Acute gastric lesions were induced by intragastric administration of 5mL/kg body weight of absolute ethanol to each rat. Control group rats were given PBS orally and the ethanol group (EtOH group) received absolute ethanol (5mL/kg) by oral gavage. The positive control group and the PTE group were given oral doses of omeprazole (50mg/kg) or PTE (400mg/kg), respectively, 2 h prior to the administration of absolute ethanol. The stomach of each animal was excised and examined for gastric mucosal lesions. To confirm the protective effects of PTE, we evaluated the degree of lipid peroxidation, the level of reduced glutathione (GSH), and the activities of the antioxidant enzymes catalase, glutathione-S-transferase, glutathione peroxidase, and glutathione reductase in the stomach. Results: PTE reduced ethanol-induced hemorrhage and hyperemia in the gastric mucosa. PTE reduced the increase in lipid peroxidation associated with ethanol-induced acute gastric lesions and increased mucosal GSH content and the activities of antioxidant enzymes. Conclusion: These results indicate that PTE protects gastric mucosa against ethanol-induced acute gastric injury by increasing antioxidant status. We suggest that PTE could be developed as an effective drug for the treatment of acute gastric injury.
An aqueous extract of oriental herbal composition named Onchengyeum and curcumin, an antioxidant isolated from turmeric (Curcuma Zonga L.) reduced hepatotoxicity induced by carbon tetrachloride ($CCI_4$). Improved liver function was observed by measuring the activities of aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), blood urea nitrogen (BUN), creatinine (CRE), total cholesterol (T-CHO), triglyceride (TG), low density lipoprotein cholesterol (LDL-CHO), high density lipoprotein cholesterol (HDL-CHO), total protein (TP), albumin (ALB) and total bilirubin (BIL) in serum. Hepatic parameters monitored were levels of cholesterol (CHO), triglyceride (TG), and malondialdehyde (MDA) and activities of cytochrome P450 (CYP), NADPH-CYP reductase, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione (GSH), glutathione S-transferase (GST), glutathione reductase (GR), and glutathione peroxidase (GPx). The histopathological examination showed that the treatment of Onchengyeum and curcumin relieved the ballooning degeneration of hepatocytes which had been generated by $CCI_4$. The results suggested that hepatoprotective effects of Onchengyeum and curcumin possibly are due to their promising antioxidative activity.
The neurotoxicity induced by L-glutamate in primary cultures of rat cortical cells could be attenuated by diterpene constituents of Ginkgo biloba leaves, ginkgolides A, B and C. At the concentration of 100 nM, ginkgolides up-regulated the activity of glutathione reductase in primary cultures of rat cortical cells exposed to 100 ${\mu}$M glutamate. Furthermore, ginkgolides increased the content of reduced glutathione in glutamate-treated cortical cells. However, ginkgolides showed little effect in reducing superoxide dismutase activity. Ginkgolides did, however, markedly block the production of malondialdehyde, a byproduct of lipid peroxidation in glutamate-treated rat cortical cells.
The present work was undertaken to investigate the effect of diallyl disulfide on ethacrynic acid toxicity. Ethacrynic acid-induced morality and formation of lipid peroxide were inhibited by diallyl disulfide. Furthermore, decreasing effect of glutathione S-transferase and glutathione level in the liver by ethacrynic acid were reduced by diallyl disulfide. These results suggested that the inducing effect of diallyl disulfide on the ethacrynic acid metabolizing enzyme, glutathione S-transferase, is believed to be a possible detoxication mechanism for the ethacrynic acid toxicity in mice.
Our previous reports on the effect of dietary protein on methanethiol, ethacrynic acid, bromobenzene and carbon tetrachloride metabolism were overall reviewed. The methanethiol, ethacrynicacid and bromobenzene treated rats showed the more severe liver damage in those fed a low protein diet than those fed a standard protein diet. These xenobiotics treated rats showed the lower content of hepatic glutathione and its conjugated enzyme, glutathione S-transferase activities in those fed a low protein diet than those fed a standard protein diet. In case of carbon tetrachloride treated rats, the liver damage was more reduced in rats fed a low protein diet than those fed a standard protein diet. Concomitantly the hepatic cytochrome P-450 content, and its decreasing rate to the control were lower in rats fed a low protein diet than those fed a standard protein diet.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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