• 한국가축번식학회지
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• 제15권2호
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• pp.141-147
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• 1991

This stduy was carried out in order to investigate the effects of cryoprotective concentration and equilibration time on survival rate of ultrarapidly frozen in vitro fertilized bovine embryos. In vitro fertilized bovine embryos, following dehydration by cryoprotective agents and sucorese were directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 38$^{\circ}C$ water. Survival rate was defined by development rate to the morula and blaqstocyst stage after in vitro culture of by FDA test. The results are summarized as follows : 1. The survival rates of in vitro fertilized bovine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucroese added 2.0M, 2.5M, 3.0M, 3.5M, 4.0M glycerol were 75.0%, 72.0%, 67.6%, 44.8% and 18.3% respectively. 2. The survival rates of in vitro fertilized bovine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucrose added 2.0M, 2.5M, 3.0M, 3.5M, 4.0M DMSO were 64.0%, 66.7%, 70.8%, 52.7% and 18.6, respectively. 3. The survival rates of in vitro fertilized bovine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucrose added 2.0M, 2.5M, 3.0M, 3.5M, 4.0M propanediol were 68.4%, 64.9%, 63.2%, 62.2% and 34.7%, respectively. 4. The survival rates of in vitro fertilized bovine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 2.50M glycerol added 0.1M, 0.25M, 0.5M, 0.75M, sucrose were 60.5%, 72.2%, 70.1% and 54.9%, respectively. The survival rate of in vitro fertilized embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 2.5M glycerol added 0.25M sucrose were higher than concentration of 0.10M, 0.50M and 0.75M sucrose. 5. The equilibration time on the survival rate of in vitro fertilized bovine embryos was attained after short period of time(2.5~5min.) in the freezing medium added 0.25M sucrose and 3.0M DMSO higher than long period time(1~20min.).

• 한국터널지하공간학회 논문집
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• 제18권2호
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• pp.175-181
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• 2016

본 연구는 액체질소와 같이 급속 동결이 가능하면서 질식의 위험을 배제할 수 있는 냉매로서 액화공기를 선정하였고 이의 적용성을 평가하였다. 액화공기의 안정성을 평가하기 위해 액체질소와 액체산소가 혼합된 액화공기의 산소 농도가 산업안전보건법에 제시된 산소 농도 기준에 부합되는지를 실험적으로 검증하였으며, 액체질소 및 액체산소의 혼합 비율, 액화공기 저장용기의 압력변화 및 유량변화에 따른 액화공기 산소 농도변화를 살펴보았다. 그 결과, 액체질소 및 액체산소를 8:2로 혼합하였을 경우 산업안전보건법에 제시된 산소 농도 기준에 부합되는 것을 확인하였다. 액화공기 저장용기의 압력변화 및 유량변화는 액화공기의 산소 농도에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

• 대한수의학회지
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• 제31권4호
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• pp.523-527
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• 1991

The effects of ethylene glycol, DMSO and glycerol as cryoprotectants and the effect of concentrations(0, 0.25, 0.5 and 1.0M) of sucrose in the diluent on the viability of the aggregated morulae frozen rapidly in liquid nitrogen$(LN_2)$ vapour were examined. The morulae were produced by aggregation of ICR and CBA mice embryos at 8-cell stage. Before freezing the embryos were equilibrated in 1.5M cryoprotectants+0.25M sucrose in oae-step or in 3.0M cryoprotectants+0.25M sucrose in two-steps. The embryos were pipetted into the freezing medium fraction of 0.25ml plastic straws. The straws were frozeu by directly transfer into $LN_2$ vapour(about lcm above $LN_2$) for 2 minutes, and then plunged into $LN_2$. After thawing the cryoprotectants were diluted with 0, 0.25, 0.5 or 1.0M sucrose solution. The post-thawed in vitro viability of the aggregated embryos was significantly dependent on the type and concentration of cryoprotectants in the freezing medium and also on the concentration of sucrose in the diluent. When the aggregated embryos were equilibrated in 1.5M cryoprotectants +0.25M sucrose in one-step and diluted with 0.5M sucrose after thawing, the survival rate of the embryo5 was significantly(p<0.05) higher in DMSO(62.5%) or ethylene glycol(52.2%) than in glycerol(33.3 %). In the case that the concentration of the cryoprotectants was raised to 3.0M in two-steps, thc higher survival rate of the embryos was obtained in ethylene glycol or glycerol than in DMSO followed by diluting them with 0.5 or 1.0M sucrose after thawing(p<0.01).

• Applied Microscopy
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• 제42권2호
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• pp.111-114
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• 2012

The scanning electron microscopy is an ideal technique for examining plant surface at high resolution. Most hydrate samples, however, must be fix and dehydrate for observation in the scanning electron microscope. Because the microscopes operate under high vacuum, most specimens, especially biological samples, cannot withstand water removal by the vacuum system without morphological distortion. Cryo-techniques can observe in their original morphology and structure without various artifacts from conventional sample preparation. Rapid cooling is the method of choice for preparing plant samples for scanning electron microscopy in a defined physiological state. As one of cryo-technique, high-pressure freezing allows for fixation of native non-pretreated samples up to $200{\mu}M$ thick and 2 mm wide with minimal or no ice crystal damage for the freezing procedure. In this study, we could design to optimize structural preservation and imaging by comparing cryo-SEM and convention SEM preparation, and observe a fine, well preserved Arabidopsis stem's inner ultrastructure using HPF and cryo-SEM. These results would suggest a useful method of cryo-preparation and cryo-SEM for plant tissues, especially intratubule and vacuole rich structure.

• Applied Microscopy
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• 제37권3호
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• pp.175-183
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• 2007

정확한 세포의 구조 분석을 위해서는 조직을 가능한 한 자연 상태 그대로 보존하는 것이 무엇보다 중요하다. 그러나 지금까지 이용되고 있는 화학적인 고정방법은 조직의 변형을 유도하는 것으로 알려져 그 해결방법에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 그 연구의 결과로 현재 급속 동결법이 제시되었고, 그 중 초고압동결법(high-pressure freezing method)는 가용 두께가 $200{\mu}m$로서 $10{\sim}15{\mu}m$정도인 침윤동결법(plunging method) 혹은 접촉동결법 (slamming method)보다 우수한 방법으로 보고되고 있다. 본 연구팀에는 노랑초파리(Drosophila melanogaster)의 레티나를 화학고정법과 고압동결법으로 고정하여 미세구조를 비교하였다. 먼저 120kV 전자현미경을 이용하여 각 세포 소기관을 비교하였고, 그 중 미토콘드리아의 형태변화를 좀 더 자세히 비교하기 위하여 초고압전자현미경을 이용하였다. 그 결과 급속동결 세포의 세포막과 미토콘드리아의 고정에서 특히 차이가 있음을 알 수 있었고, 이는 주로 탈수에 의한 구조변형 때문인 것으로 추측된다.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제35권4호
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• pp.285-294
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• 2010

본 연구의 목적은 흰 쥐의 상악 대구치를 발거한 후 치주인대세포를 $0^{\circ}C$/2 MPa고압-저온하에 1주간 보관시켜 MTT, WST-1 검색법을 이용하여 측정한 치주인대세포의 활성도를 저속 냉동법(No Additional Pressure, 2, 3 MPa), 급속 냉동법(No Additional Pressure, 2 MPa), $-5^{\circ}C$/90 MPa초고압 저온보존법과 비교하여 평가하는 것이다. 생후 4주된 암컷 Sprague-Dawley계 흰쥐의 상악 좌우 제1, 2대구치를 발거하여 각 군 당 12개의 쥐 치아를 MTT, WST-1 검색에 이용하였다. 실험군은 9개군으로 대조군은 즉시 발치군이며, 각각 3 MPa, 2 MPa, No Additional Pressure (NAP)의 압력을 가한 후 $4^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 $-0.5^{\circ}C$/min 속도로 서서히 냉동시킨 뒤 $-196^{\circ}C$에 냉동한 저속 냉동군, 발치 후 동해방지제 처리과정을 거쳐 각각 2 MPa, NP의 압력을 가한 후, $-196^{\circ}C$의 액화질소에 넣어 냉동한 급속 냉동군, 발치 후 각각 2MPa,NP의 압력을 가한 후, $0^{\circ}C$에 보관한 저온 보존군, $-5^{\circ}C$/90 MPa의 초고압 저온 보존군으로 나누었다. 보존액은 F medium을 사용했으며 동해방지제로 10% dimethylsulfoxide (DMSO)를 사용하였다. 치근면을 단위면적으로 표준화하기 위해 MTT, WST-1 측정값을 Eosin 염색 후 530 nm에서 측정한 흡광도 값으로 나누었다. 통계 분석을 위해 one way ANOVA를 시행하였으며 사후 검정으로는 Tukey HSD 방법을 사용하였고 결과는 다음과 같다. 1. MTT 검색법 및 WST-1 검색법 결과 $0^{\circ}C$/2 MPa 고압 저온 보존군이 즉시 발치군보다 세포 활성도가 낮았으나 통계적 유의차는 없었으며, 저속 압력 냉동군(NP, 2 MPa, 3 MPa)과, 급속 압력 냉동군(NP, 2 MPa), 저온보존군($0^{\circ}C$/NP), 초고압 저온 보존군($-5^{\circ}C$/90 MPa)보다 통계적으로 유의차있게 높은 세포 활성도를 나타내었다(p < 0.05). 2. MTT검색법 및 WST-1 검색법 결과 $-5^{\circ}C$/90 MPa 초고압 저온 보존군이 가장 낮은 세포 활성도를 나타내었으며, MTT 검사 결과에서는 모든 군에 대해 통계적으로 유의성 있는 결과를 보였다(p < 0.05). 위의 결과를 통해, $0^{\circ}C$/2 MPa (20기압)의 고압-저온 보존법이 다른 급속 냉동 보관법(2 MPa, NAP)이나 저속냉동보관법(3, 2 MPa, NAP), $-5^{\circ}C$/90 MPa 초고압 저온 보존법에 비해 우수한 쥐 치아의 치주인대세포의 활성도를 보여 차후 치아의 재이식시 치아보관을 위한 방법으로의 가능성을 제시하였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권1호
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• pp.71-76
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• 1998

본 연구는 소 미성숙난자를 electron microscope (EM) grid와 동해제인 EFS30을 이용하여 초급속 동결하였을 때 정상적인 배 발달의 유도가능성 여부를 조사하고자 실시하였다. 동해제는 30% ethylene glycol, 18% ficoll, 0.5 M sucrose와 10% FBS 등이 PBS에 첨가되어 제작된 EFS30을 사용하였다. 난자 생존의 평가기준으로는 성숙, 수정 및 배발달을 조사하였다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 초급속동결-융해 후, 소 미성숙란의 생존율은 43.2%을 나타내었다. 동결-융해군의 체외 성숙 (84.1%)과 정상 자웅전핵 형성율 (57.5%)은 대조군의 결과 (92.5, 65.0%)와 비교하여 볼 때 유의한 차이는 없었다. 또한, 동결군의 체외수정 이후의 $\geq2$-세포기 형성 (65.0%)과 배반포형성율 (30.8%)도 대조군(73.7, 35.7%)의 결과와 유의한 차이를 나타내지 않았다. 따라서 소 미성숙난자는 EM grid와 EFS30 동결액을 이용한 초급속 동결방법에 의해 정상적인 배발달이 유도될 수 있다는 것을 알 수 있었다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 1997년도 제34차 추계 학술대회
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• pp.47.1-47.1
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• 1997

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 1997년도 제34차 추계 학술대회
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• pp.83.2-84
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• 1997

• 한국콘크리트학회:학술대회논문집
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• 한국콘크리트학회 1998년도 가을 학술발표대회 논문집(III)
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• pp.791-796
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• 1998

Air voids existed in hardened concrete have an important influence on concrete deterioration such as carbonation, freezing and thawing, and corrosion of embedded steel in concrete. Therefore it is very significant to investigate the pore structure of system(size, number and continuity of air voids) to solve the reason caused concrete deterioration. The purpose of this study is to develop the standard method of measuring air voids which affect properties in hardened concrete using image analyzing system. This paper presents the settlement of rapid and exact experimental method which extracts fine bubbles, calculates the number of air voids, and determines air-void distribution using image analyzing system with computer.