• Journal of Forest and Environmental Science
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• 제25권1호
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• pp.57-65
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• 2009

Ficus deltoidea Jack is an important and popular medicinal plant species found in the Malaysia. Plants are being collected and used based on morphology and authentication to prevent adulteration is not in practice. In this study, twenty-six accessions of F. deltoidea Jack were collected from Kelantan and Terengganu states of Peninsular Malaysia to examine their genetic similarities and differences using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) technique. Out of 20 arbitrary primers, two primers (D-10 and D-11) were selected which produced reliable DNA polymorphism. D-10 and D-11 primers generated 138 RAPD bands ranging from 250 bp to 3000 bp. Ninety-nine of them were polymorphic loci (72%) and thirty-nine were nonpolymorphic loci (28%). A total of 56 bands with polymorphic loci were amplified with primer D-10 and analyzed by cluster analysis and UPGMA to present a dendrogram depicting the degree of genetic relationship among 26 accessions. Eight RAPD markers were sequenced to determine their identity. RAPD analysis showed the genetic diversity among 26 accessions of F. deltoidea Jack. The RAPD profile and RAPD marker sequences reported in this paper could be used in plant and/or plant material authentication. This study also suggested that RAPD can be a useful technique to study DNA polymorphism in F. deltoidea Jack.

• 한국식물병리학회지
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• 제12권1호
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• pp.41-46
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• 1996

본 실험은 이병 딸기의 조직에서 분리 동정된 시들음병균(Fusarium oxysporum f. sp. fragariae) 균주들의 유？거 변이를 random amplified polymorphic DNA(RAPD) marker들을 이용하여 조사하였다. 총 24개의 딸기 시들음병 균주들의 DNA를 주형으로 하여 16개의 random 10-mer primer들을 사용하여 증폭시킨 결과 총 231개의 marker들을 이용하여 유전적 변이를 조사해 본 결과 크게 RAPD I과 RAPD II의 2개 그룹으로 나눌 수 있었다. RAPD I그룹에 속하는 균주는 VCG A에 속하는 Y1, K1, K2, K3, K4, N2, N3, N4-1, N6-1, N6-2, N8, N9, N10, M1-2-1 균주, VCG B에 속하는 M4-1 균주 그리고 VCG C에 속하는 N1, Y2 균주들이었고, RAPD II그룹에는 VCG B에 속하는 M1-1, M2-2-1, M2-4-2, M3-2, M3-3-2 균주와 VCG D에 속하는 N1 1 균주가 속하였다. 이들 2그룹 간에는 31%의 유사성이 있었다.

• 한국어류학회지
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• 제18권1호
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• pp.1-11
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• 2006

RAPD 분석을 하기 위해서 우리나라 내륙의 충주지역과 서해에 인접한 당진지역에서 빙어 (Hypomesus nipponensis)의 두 지리적 집단으로부터 genomic DNA 를 분리 추출하였다. OPB-06, OPB-10, OPB-13, OPB-17, OPC-09, OPC-17 및 OPC-20의 7개 primer를 사용하여 shared loci, polymorphic 및 specific loci를 확인하였다. 충주 빙어집단에서는 한 primer 당 383개의 loci가 관찰되었고, 당진 집단에서는 287개의 loci가 확인되었다. 관찰된 loci 중에 23.8%에 해당되는 91개의 polymorphic loci가 충주 집단에서 확인되었고, 당진 집단에서는 47 (16.4%)개가 확인되었다. 각 집단에서 공유하는 loci의 수는 각각 충주 빙어집단에서 198개 그리고 당진 집단에서는 176개로 관찰되었다. 충주 빙어집단과 당진 집단에서는 각각 44개와 75개의 specific loci가 나타났다. 특히 두 집단이 공유하는 loci의 수는 99개로서 primer 당 평균 14.1개로 확인되었다. 두 빙어 집단의 bandsharing value의 평균값은 $0.700{\pm}0.008$로서 0.600에서 0.846의 범위를 나타내었다. 각각을 비교해 보면, 충주 집단에 속한 개체의 bandsharing value의 평균값이 당진 집단에서의 값보다 높게 나타났다. 7개의 primer를 사용하여 얻어진 dendrogram은 cluster 1 (CJ 01, 02, 03, 04, 05, 06, 07, 08, 09, 10 및 11), cluster 2 (DJ 01, 02, 03, 04, 05, 06, 07, 08 및 09) 및 cluster 3 (DJ 10 및 11)와 같이 3개의 유전적 클러스터로 나뉘어졌다. 두 집단의 유전적 거리는 0.040에서 0.545 사이로 나타났다. 따라서 RAPD-PCR 분석을 통해서 빙어 두 집단의 유의성이 있는 유전적 거리를 확인하였다.

• 한국축산식품학회:학술대회논문집
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• 한국축산식품학회 2000년도 국제심포지엄 및 제26차 추계학술발표회
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• pp.59-75
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• 2000

본 연구는 한우고기를 수입육 및 젖소고기 등의 쇠고기를 판별할 수 있는 DNA marker를 개발 하기 위하여 수행하였다. 첫 번째 실험으로 RAPD 기법을 이용한 종 특이 marker 개발 및 이 marker의 SCAR marker로의 개발을 목표로 수행되었다. Random primer 300개에 대하여 PCR 수행하여 품종 특이적인 양상을 나타내는 14개 primer를 선별하였고 그 중 MG-3, MG-6, MG-12의 primer는 각각 0.9 kb, 1.0 kb, 2.0kb의 위치에서 홀스테인, 한우,헤어포드 특이적인 RAPD 단편을 나타내었다. 이들 단편들 중 한우 특이적인 단편을 클로닝한 후 random primer가 포함된 부분의 염기서열을 결정하였다. 10bp의 RAPD random primer에 10 bp의 염기를 추가하여 SCAR primer를 제작하였다. SCAR marker의 PCR수행 결과, RAPD marker와 같은 1.0 kb의 크기에서 한우에서만 특이적으로 하나의 밴드로 증폭이 되었다. 이러한 결과는 젖소 DNA와의 비교실험에서와 같이 Holstein에서는 나타나지 않으면서 한우에서만 단일밴드가 증폭되어 한우와 젖소의 판별에 이용이 가능할 것으로 판단된다. 두 번째 실험으로 포유동물의 모색과 연관된 MC1R 유전자 변이와 소 품종간의 유전자형 빈도를 파악하고 한우와 흑모를 가진 홀스테이나 앵거스와의 판별 가능한 DNA marker로서의 이용성을 알아보기를 위하여 수행하였다. MC1R 유전자의 변이부분을 증폭시킬 수 있는 한쌍의 primer를 제작하여 350 bp 크기의 PCR 산물를 얻어 제한효소 BsrF I 과 MspA1 I 으로 각각 절단한 후 2.5%의 Metaphore agarose gel에 전기영동하여 유전자형을 결정하였다. 소 품종별 유전자형 빈도를 분석한 결과 한우에서는 $E^+e$와 ee 유전자형이 각각 0.10과 0.90로 나타난 반면 젖소(홀스테인)에서는 유전자형 $E^DE^D,\;E^DE^+$ 및 $E^De$가 각각 0.86, 0.00 및 0.14, 앵거스에서는 각각 0.57, 0.26 및 0.17의 빈도를 보여 젖소와 앵거스 두 품종 모든 개체가 대립유전자 $E^D$를 가지고 있어 한우와는 분명한 차이를 보였다. 그러나 수입육의 경우 분석시료 43%만이 $E^D$를 가지고 있었다. 따라서 MC1R 유전자의 유전자형을 PCR-RFLP 방법을 이용한다면 현재 젖소고기가 한우고기로 둔갑 판매되는 부정유통을 방지할 수 있는 하나의 DNA 지표인자로서 활용될 수 있을 것으로 판단되었다. 결론적으로 본 연구에서 개발한 한우 특이 SCAR marker와 MC1R 유전자를 이용한다면 국내에서 사육하고 있는 젖소고기가 한우고기로 둔갑 판매되는 부정유통사례를 근접할 수 있는 방법이 될 것으로 판단되나 다양한 품종이 교잡된 수입쇠고기와의 판별기술 개발을 위해서는 보다 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제9권6호
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• pp.671-676
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• 1999

국내에서 재배되는 7종의 마늘과 오국종인 헝가리종 및 중국 산동종을 수집하여 총 70종의 임의 primer를 이용하요 RAPD분석을 실시한 결과 32개의 primer에서 종간에 다형성(polymorphism)을 보이는 DNA벤드를 확인하였다. PCR에 의해 증폭된 DNA밴드 수는 151개였으며 그 중 125개의 밴드가 수집종 간에 다형성을 보였다. 다형성을 보인 밴드를 대상으로 집단분석을 실시한 결과 유전적 거리가 0.271인 값에서 9종의 수집마늘은 두 개의 group으로 나누어 졌는데, Group I은 창녕종과 헝가리종 이었고 Group II는 남도, 산동, 예천, 의성, 정선, 영월 및 단양종으로 분류되었다. 마늘의 주요 생태형인 난지형과 한지형은 유전적 거리가 0.200값을 전후하여 나누어 졌다. 각각의 primer로부터 나타난 밴드들은 지방종 간에 특이성을 보이는 것이 다수 존재하여 외국종과 국내종 마늘이나 국내종 간의 종을 구분하는 표식이자로 사용할 수 있을 것이다.

• 한국균학회지
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• 제20권4호
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• pp.315-323
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• 1992

재현성 있는 RAED marker들의 증폭을 위해서 PCR에 영향을 주는 조건들에 대해 조사를 하였다. 그 결과 약 15 ng의 DNA가 효과적인 PCR에 적합한 양이었으며 PCR에 사용되는 성분(reaction component)들의 농도가 PCR 결과에 있어서 상호의존관계에 있었고 DNA 용액에 포함되어 있는 RNA가 DNA 증폭을 방해하는 작용을 하였다. $25\;{\mu}l$의 PCR 반응용액에 30ng의 10-mer primer, $200\;{\mu}M$ dNTP, 0.001% gelatin, 1.5 mM $MgCl_2$, 10 mM Tris-Cl(pH 8.8), 50 mM KCl, 0.1%, Triton X-100, 2units의 Taq DNA polymerase, 그리고 RNA를 제거한 15 ng의 DNA를 사용한 결과 가장 재현성있는 RAPD marker들이 증폭되었다.

• BMB Reports
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• 제37권2호
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• pp.213-222
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• 2004

A randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis was used to identify the species- and population-specific markers of abalone; Haliotis asinina, H. ovina, and H. varia in Thai waters. Fifteen species-specific and six population-specific RAPD markers were identified. In addition, an 1650 bp band (UBC195) that was restricted to H. ovina from the Gulf of Thailand (east) was also found. All of the specific RAPD markers were cloned and sequenced. Twenty pairs of primers were designed and specificity-tested (N = 12 and 4 for target and non-target species, respectively). Seven primer pairs (CUHA1, 2, 4, 11, 12, 13, and 14) were specifically amplified by H. asinina DNA, whereas a single pair of primers showed specificity with H. ovina (CUHO3) and H. varia (CUHV1), respectively. Four primer pairs, including CUHA2, CUHA12, CUHO3, and CUHV1, were further examined against 216 individuals of abalone (N = 111, 73, and 32, respectively). Results indicated the species-specific nature of all of them, except CUHO3, with the sensitivity of detection of 100 pg and 20 pg of the target DNA template for CUHA2 and CUHA12 and CUHV1, respectively. The species-origin of the frozen, ethanol-preserved, dried, and boiled H. asinina specimens could also be successfully identified by CUHA2.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권6호
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• pp.1171-1177
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• 2008

This study was undertaken to classify Enterobacter sakazakii isolates from 13 powdered infant formula products, 25 powdered weaning diet products, and 33 weaning diet ingredients on polymerse chain reaction (PCR) methods. The numbers of the isolates from 1 powdered infant formula product, 7 powdered weaning diet products, and 6 weaning diet ingredients were 1, 14, and 8, respectively. The contaminated ingredients were 1 rice powder, 2 millet powders, 2 vegetable powders, and 1 fruit and vegetable premix. PCR with the primer of repetitive extragenic palindromic element (REP-PCR) and random amplification of polymorphic DNA(RAPD) were effective in discriminating among the isolates, but tRNA-PCR and PCR with the primer of l6S-23S internal transcribed spacer (ITS-PCR) were not. Some of E. sakazakii isolates from vegetable powders, fruit and vegetable premix, and millets powders were classified into the clonal groups based on the DNA patterns in the REP-PCR and RAPD analysis. A close genetic relationship among the isolates from some of the powdered weaning diet products and the rice powder was also detected in the cluster analysis based on the DNA patterns in RAPD.

• 한국어업기술학회:학술대회논문집
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• 한국어업기술학회 2001년도 춘계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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• pp.334-335
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• 2001

Common carp (Cyprinus carpio) and Israeli carp(C. carpio) samples were obtained from a aquaculture facility in the Kunsan National University, Korea. Genomic DNA was isolated from the common carp and Israeli carp representing genetic characteristics and genomic polymorphisms by polymerase chain reaction amplification of DNA as arbitrary primers. There were observed a total of 90 species-specific genetic markers within Israeli carp. On average, each random RAPD primer produced amplified 7.9 products from 1 to 17 bands. An average genetic similarity within Israeli carp showed -.60$\pm$0.05. The average level of bandsharing was some 0.57$\pm$0.03 between common carp and Israeli carp. Accordingly, two carp species were genetically a little distant. The electrophoretic analysis of PCR-RAPD proudcts showed high levels of variation between two fish species. The RAPD polymorphism generated by primer may be used as a genetic marker for species or lines identification in important aquacultural carp.

• 한국산림과학회지
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• 제87권3호
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• pp.422-428
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• 1998

구상나무 개체목으로부터 채취한 48개의 배유조직을 이용해서 PCR 방법에 의해 생성된 inter-simple sequence repeats(I-SSR) 표지자를 분석했다. 예비실험에서 6개의 배유조직을 이용해서 35개의 primer를 검색했으며, 그들 중에서 PCR 반응이 가장 잘되는 19개 primer를 선정해서 48개 배유조직을 이용한 본 실험에 사용했다. 카이자승 검정 결과, 19개 primer에 의해 증폭된 51개의 증폭산물이 5% 유의 수준에서 멘델의 분리비(1:1)에 따라 차대에 유전됨을 확인할 수 있었다. 멘델 유전자좌로 확인된 51개 표지자들의 게놈내 분포양상을 확인하기 위해서 연관분석을 수행한 결과, 51개 유전자좌들이 상호간에 서로 연관되어있지 않은 것으로 확인되어 이들이 전체 게놈상에 고르게 분포하고 있음을 확인할 수 있었다. 본 연구에서 관찰된 51개 유전자좌들이 게놈상에 고르게 분포하고 있다는 특성 때문에 게놈상의 특정부위에 편중되지 않은 유전정보를 얻을 수 있다는 장점이 있다. 즉, 기존의 RAPD 표지자들 중 상당수가 독립적인 연관군을 형성하는 것으로 알려져 있기 때문에 이들 연관군이 위치한 특정 부위의 DNA를 증폭하여 분석하는 RAPD 표지자에 비해서 I-SSR 표지자들이 유전 다양성을 추정하는데 더 유용한 표지자로 활용될 수 있을 것으로 생각되며, 이들 표지자들이 독립적인 진화의 과정을 겪을 것으로 기대되기 때문에 cladistic 방법에 의해 진화적 유연관계를 추정하는데 더 적합한 표지자로 생각된다.