• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.447-453
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• 1989

항생물질 내성유전자를 유전자 조작기법으로 재조합시켜 만든 세균에서 그 유전자들이 전이되는 특성을 하폐수의 자연환경에서 연구하기 위하여, 자연계로부터 분리한 Gram 음성세균 중에서 kanamycin (Km), chloramphenicol (Cm), streptomycin (Sm), sulfadiazine(Su)에 내성을 띄는 균주로 DK1을 선발하였다. DK1 균주는 4개의 plasmid를 가지고 있으나 그 중 크기가 약 68kb인 pDK101 plasmid에 Km$^{${\gamma}$}$ Cm$^{${\gamma}$}$ 유전자를 가지고 있었다. 이 pDK101 plasmid에는 EcoRI site가 16개, PstI site가 32개, SalI site가 6개씩 있었다. pDK101 plasmid 와 vector로 사용한 pKT230을 E. coli으로 처리하여 얻은 절편들로부터 Km$^{${\gamma}$}$Cm$^{${\gamma}$}$ 유전자를 가지는 pDT309와 pDTS29 등의 chimeric piasmid를 제조하였다. 이들을 다시 E. coli C600과 E. coli HB101 에 형질전환 시킴으로써, DKC601, DKC602, DKH 102 그리고 DKH103 등의 재조합 균주를 얻었다. 이들 재조합 균주에서는 모두 Km$^{${\gamma}$}$Cm$^{${\gamma}$}$유전자가 잘 발현되었으며, 그 중 DKC601과 DKH103에서는 각각 pDT529와 pDT309의 chimeric plasmid가 포함되어 있는 것이 전기영동 방법으로 명확히 확인되었다.

• 미생물학회지
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• 제30권4호
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• pp.322-331
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• 1992

수질환경에서 일어나는 GEM 균주의 항생물질내성유전자의 전이동태를 연구하기 위하여, $Km^{r}$ plasmid 의 conjugation을 실시하였다. 그 결과 conjugant 들에 나타나는 plasmid 의 재배열을 agarose gel 에서 비교분석하였고, DNA probe 유전자의 행방을 추구하였다. GMM 균주들 (DKC600 과 DKC601) 의 $Km^{r}$유전자는 자연계 분리균주(DK1) 보다 더 높은 전이율이 나타났으나, recipient 에 따라 다소 차이가 있었다. Conjugant 들에서 나타나는 plasmid 의 재배열도 donor가 GMM 균주에서 전이된 plasmid 들은 특이하게 그 분자량이 커졌다. LB 에서 수온이 10.deg.C 보다는 25.deg.C 이상 그리고 pH 가 9 에서 5에 가까울수록$Km^{r}$ 유전자는 더 많이 전이되었으나, FW 에서는 수온과 pH 에 의한 영향이 거의 없었다. 또 FW 에서는 GMM 균주의 conjugant 들에서 chromosome 이외에 plasmid 가 거의 발견되지 않았다. 이와 같이 plasmid 들이 다양하게 재배열된 conjugant 들에서 Southern analysis 에 의하여 $Km^{r}$ 유전자의 행방을 알아본 결과, LB 에서는 DK1 뿐만 아니라 GMM 균주들의 $Km^{r}$ plasmid 가 전이된후 그대로 존재하였다. 그러나 FW 의 수질환경에서는 donor 의 $Km^{r}$ plasmid / 는 없어지고 chromosome 에서 hybridization signal 이 나타났다. 또 FW 에서는 donor 가 DK1 일 경우 pDK101 은 수온과 pH 의 영향없이 pDK101 이 그대로 전이되었다. 그러므로 LB 나 AW 에서는 DK1 뿐만 아니라 GMM 규주들의 Km$^{r}$ plasmid 가 전이된후 conjugant 에 그대로 존재하였고 기타의 plasmid 들이 다양하게 재배열되었지만, FW 수질환경에서는 DKC600 의 $Km^{r}$ 유전자가 수온이나 pH 에 상관없이 chromosome 에 integration 되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권3호
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• pp.593-598
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• 2004

The arsenical resistance (ars) operon was cloned from a 67-kilobase pair (kb) plasmid, which was previously shown to be responsible for arsenic salts resistance in K. oxytoca D12. When plasmid pAE48, carrying the ars operon, was transformed into E. coli, transformed cells displayed enhanced survival in the presence of 4 mM arsenite, 50 mM arsenate, or 0.4 mM antimonite. The nucleotide sequence of the 5.6-kb fragment encoding arsenical resistance revealed five open reading frames (ORFs), which were predicted to encode polypeptides of 12.8 (arsR), 13.4 (arsD), 62.6 (arsA), 45 (arsB), and 16.7 (arse) kilodaltons (kDa). Each ORF was preceded by a ribosome binding site. A putative promoter-like sequence was identified upstream of arsR, and a possible termination site was found downstream of arsC. When the deduced amino acid sequences of the K. oxytoca Dl2 Ars proteins were compared with the amino acid sequences of the E. coli R773 Ars proteins, a significant amino acid similarity was observed (87.9％ for ArsR, 89.2％ for ArsD, 83.2％ for ArsA, 92.6％ for ArsB, and 91.3％ for ArsC), suggesting an evolutionary relationship of the ars genes of E. coli plasmid R773 and K. oxytoca Dl2.

• 약학회지
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• 제35권2호
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• pp.61-72
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• 1991

These studies were made to assess the present stage of resistance to antibiotics, incidence and transferability of R-factors against E. coli. From March to July 1987, 59 strains of E. coli were isolated from specimens of patients collected at university hospitals in Seoul, 64 strains from stools of domestic animals and 66 strains from drainages in Seoul. These specimens were tested for resistance to 12 kinds of antimicrobial agents by means of agar dilution method. Using Muller-Hinton agar for the assay of drug resistance and tryptic soy broth as propagating medium for conjugation. The strains of E. coli were found to be resistant to one or more antibiotics and were considered to be potential donors of R-plasmid. The resistant strains of E. coli isolated from patients, domestic animals and drainages were found to be 55(93%), 33(52%) and 31(47%), respectively. Resistance to Tc, Ap and Cb was the highest in those isolated from patients and drainages, and resistance to Tc, Cm and Sm was the highest in those isolated from domestic animals. In the transfer test of drug resistance by conjugation method, 17 strains (47%) isolated from patients, 15(54%) isolated from domestic animals and 15(56%) isolated from drainages showed positive results, transperable resistant plasmid molecules with variable range in each strain.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권4호
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• pp.345-348
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• 1985

Mannitol hypertonic regeneration media를 사용하는 PEG-induced protoplast transformation system을 이용해서 pUB110과 pE194의 recombinant plasmid로 B. subtilis BR151을 transformation 시킴으로써 두 plasmid에서 유래되는 각각의 Neo$^{R}$와 Em$^{R}$을 동일한 recipient cell 내에서 동시에 발현시킬 수 있었다. Neomycin과 erythromycin을 함께 함유하는 mannitol regeneration media상에서 recombinant plasmid의 transformation frequency는 6.5 $\times$ $10^{-5}$이었다. 한편 transformant cell 내에서 recombinant plasmid의 replication이 agarose gel electrophoresis로 확인되었다.

• 미생물학회지
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• 제31권1호
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• pp.44-47
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• 1993

A replication initiation gene was identified and its nucleotide sequence has been determined from a 3.8 kb, chloramphenicol acethyltransferase conferring R-plasmid pSBK203 of Staphylococcus aures. Location of the replication related region of pSBK 203 was determined by interuption with pUC 119 at XBaI and MspI sites which resulted in inactivation of replication in Bacilius subtilis. Base sequence of this region revealed on open reading frame of 942 base pairs, which encoded a 314 amino acid protein. Base sequence homology with other rep of pT181 family plasmids such as pT181, pC221, pC223, pS194, pU112, and pCW7 was ranged from 78% to 97% and the predicted amino acid sequence homology was from 72% to 95%.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제11권3호
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• pp.163-168
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• 1983

Pnicillinase를 분필하는 Streptomyces bobili YS-40균주의 plasmid DNA를 phemol방법으로 유출하여 Bocillus subtilis IAM 12118균주에 형질 전환시켜서 penicillin 내성 plasmid DNA가 표현되게 하였다. 형질전환에 미치는 최적 pH와 온도는 각각 7.0, 3$0^{\circ}C$으로 나타났다. DNA와 Competent cell을 20분 이상 접촉시킴으로서 형질전환이 잘 일어났으며 DNA의 농도가 증가할수록 transformant의 수도 증가했다. DNA inhibitor 로 사용되는 lysine 의 첨가로 형질전환의 빈도가 약 6배정도 상승되었으며 chloramphenicol은 형질전환의 빈도에 별 영향을 미치지 않았다.

• 대한수의학회지
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• 제29권1호
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• pp.37-44
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• 1989

This paper dealt with the distribution of Shigella spp. on 5 piggeries in Taegu and Kyungpook during the period from August to October 1987. Isolated Shigella were examined for serogrouping, antimicrobial drug resistance and detection of R plasmid. Genetic properties of R plasmid in Shigella have examined to fertility inhibition (Fi) and gel electrophoresis was performed for the isolation of plasmid DNA. The results obtained were summarised as followings; 1. Of total 2,978 samples from 5 piggeries, 82 strains (2.8%) of Shigella spp. were isolated from 82 samples. The isolated strains were identified as S dysenteriae (60 strains), S flexneri (20 strains) and S sonnei (2 strains). 2. Of the 82 strains examined 67 (95.1%) were resistant to one or more antibiotics, such as ampicillin (Am), chloramphenicol (Cm), kanamycin (Km), nalidixic acid (Na), rifampicin (Rf), streptomycin (Sm), sulfademethoxine (Su), and tetracycline (Tc) and higher resistant to Su (90.2%), Sm (63.4%) and Tc (63.4%). 3. Of the 78 resistant Shigella strains 26 (33.3%) harbored conjugative R plasmids and the transfer frequency of Sm (50.0%), Cm(33.3%) resistance was much higher than that of the other drug resistance. 4. The most common resistant patterns were SmSuTc, Su and AmSmSuTc. 5. Out of the 26 Shigella R plasm ids examined for Fi, 14(53.8%) were $Fi^+$ and the remainder were $Fi^-$. 6. The plasmid DNA profiles in Shigella spp. (9 strains) isolated from pigs were confirmed as being 2 to 9 fragments by the gel electrophoresis. Their molecular size ranged 2.17 to 87.62 kilobase (Kb). All strains of Shigella spp. consisted in 15.4 Kb plasmids.

• Current Research on Agriculture and Life Sciences
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• 제12권
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• pp.69-82
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• 1994

6개(個) 품종(品種)의 대두(大豆)로 부터 분리(分離)된 대두(大豆) 근류균(根瘤菌)의 생리적(生理的) 특성(特性) 및 plasmid DNA의 분리(分離)를 조사(調査)한 결과(結果)는 다음과 같다. YEM 배지(培地)에서 S117, S118, 011, DY-1균주(菌株)는 생육속도(生育速度)가 느리고 alkaline 반응(反應)을 나타내었으며, S110, S111, S114, S115, S116, S120, 010균주(菌株)들은 생육속도(生育速度)가 빠르고 산반응(酸反應)을 나타내었다. fast-growing형(型)과 slow-growing형(型) R. japonicum은 모두 극모성 또는 주모성 편모(鞭毛)를 가진 그람 음성(陰性) 간균(桿菌)이며, 한천 평판에서 점액성(粘液性)이 있는 유백색(乳白色) colony를 형성(形成) 하였다. 접종(接種) 7일후(後), fast-growing형(型)의 colony는 직경(直徑)이 2.0-4.0mm였고, slow-growing 형(型)의 colony는 대체로 0.5-1.5였다. fast-growing형(型)은 pH4.5에서 한결같이 감수성(感受性)이 있고, pH9.5에 내성(耐性)이 있는 반면 slow-growing형(型)은 정반대로 나타났다. 조사(調査)된 균주(菌株)들은 모두 생육(生育)을 위한 탄소원(炭素源)으로써 glucose를 이용(利用)하였으며, 010과 321을 제외하고 모든 균주는 starch는 전혀 이용(利用)하지 못하였으며 fast-growing형(型) 만이 sucrose를 이용(利用)하였다. 조사(調査)된 slow-growing R. japonicum은 일반적으로 15-250kb 정도(程度)의 1-3개(個)의 plasmid DNA를 함유하는 반면, fast-growing R. japonicum은 20-250kb정도(程度)의 1-3개(個)의 plamid DNA를 함유(含有)하고 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권4호
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• pp.483-490
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• 1992

수계 환경에서 일어나는 유전자의 전이행방을 이해하기 위하여, conjugation에 의하여 전이되는 kanamycin 내성 ($Km^r$) 유전자에 대하여 DNA probe를 이용하여 Southern hybridization 방법으로 추적하였다. 자연계로부터 분리한 $Km^r$ 세균과 $Km^r$ 유전자를 유전자 조작기법으로 변형시킨 GMM 균주들을 donor로 하여 conjugation을 했을 때, $Km^r$ 유전자는 자연계 분리 균주에서보다 수질환경에 관계없이 10~00배 잘 전이되었다. LB 배지에서 GMM 균주의 $Km^r$ 유전자가 전이된 conjugant에서는 새로 생성되는 plasmid가 많이 나타났고 AW와 FW에서는 conjugation 시간에 따라 plasmid의 재배열 현상이 다양하였다. LB에서 얻은 conjugant들의 plasmid에 대하여 $Km^r$ DNA probe로 Southern analysis를 한 결과, plasmid의 재배열이 다양함에도 불구하고 conjugant들의 $Km^r$ plasmid는 donor에서와 같은 위치에서 hybridization signal이 나타났다. 그러나 AW에서 50시간 conjugation시켰을 때 DKI의 pDK101과 DKC601의 pDT529, 그리고 AW에서 30시간 conjugation 시켰을 때 DKC600의 pDK101은 전혀 나타나지 않고, 소실되었다. 또 전이된 $Km^r$ plasmid의 크기는 AW와 FW의 수질에 따라 약간 변화되어 나타났다. 그러므로 DNA probe에 의한 Southern hybridization 방법은 수질환경에서 특정 유전자의 전이행방을 추적하는데 매우 유용하다고 판단된다.