불완전 곰팡이의 일종인 Aureobasidium pullulans ATCC 42023 균주를 이용한 pullulan의 최적조건 및 pH 조절에 따른 pullulan의 생성 그리고 균체형태와 고분자 pullulan 생산에 미치는 영향을 조사 하였다. 삼각플라스크 내에서 최대의 pullulan 생산은 초기 pH 6.5일때 11.98 g/l의 pullulan을 생산하였고, 회분식 발효에서는 산소 공급속도 0.5 vvm일때 15.16 g/l의 최대의 pullulan생산량을 나타내었다. pH조절에 따른 실험에서는 pH 4.5일때 13.31 g/l의 pullulan 생산량을 보였고, 이때 균체의 형태는 효모형과 균사형태의 성장을 하였다. 그러나 분자량 생성면에서는 pH 6.5일때 100만 이상의 고분자가 가장 많이 생산되었다.
A. pullulan ATCC 42023를 사용하여 고분자량의 pullulan을 대량생산하기 위한 연구로써, 탄소원의 농도, 용존산소량과 pH가 균체 성장 및 pullulan 생산에 미치는 영향에 대하여 연구하였다. Glucose의 당 농도에 따른 실험결과에서 glucose 농도가 0.3M (54g/1)일 때 최대의 pullulan 생산률을 나타내었고, 0.3M (54g/1)이상에서는 productivity가 급격하게 감소하는 기질 저해현상을 나타내었다. 삼각플라스크를 이용한 초기 pH의 영향에 대한 실험결과, 초기 pH 6.5는 $11.98g/{\ell}$의 pullulan을 생산하였고, pH 4.5로 일정하게 조절한 결과, pullulan 생산은 $13.31g/{\ell}$의 최대값을 나타내었다. 그러나 균체성장은 pH 6.5에서 가장 높았다. 그리고 용존산소량의 증가로 pullulan productivity를 증가시킬 수 있었다. 또한 산업적으로 유용한 고분자량의 pullulan을 생산하기 위한 탄소원으로 아미노당인 glucosamine을 사용하여 pullulan의 생성 및 분자구조 변형에 대하여 실험하였다. 탄소원 농도 50g/1 기준에서, glucose와 glucosamine을 40 : 60의 비율로 혼합하여 공급 하였을 때 분자량 20만 이상의 mediun size 및 200만 이상의 high molecular weight의 productivity가 가장 높았으며, A. pullulans의 specific growth rate도 가장 높았다.
A. pullulans ATCC 42023를 사용하여 고분자량의 pullulan을 대량생산하기 위한 연구로써, 용존산소량과 pH가 균체 성장 및 pullulan 생산에 미치는 영향에 대하여 연구하였다. pullulan의 분해 효소에 대한 저항성을 가지고 산업적으로 유용한 고분자량의 pullulan을 생산하기 위해서 pH를 6.5로 조절할 경우, 분자량 20만 이상의 high molecular weight의 productivity가 가장 높았으며 용존산소량의 증가로 pullulan productivity를 증가시킬 수 있었다.
Seo, Hyung-Pil;Chung, Chung-Han;Kim, Sung-Koo;Richard A. Gross;David L. Kaplan;Lee, Jin-Woo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권2호
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pp.237-242
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2004
Cell growth and the production of pullulan by Aureobasidium pullulan HP-2001, the UV-induced mutant of A pullulans ATCC 42023, increased with increased concentration of glucose up to 15.0% (w/v). Maximal production of pullulan in the flask scale was 27.65 g/l, when concentrations of glucose and yeast extract were 15.0 and 0.25% (w/v), respectively. Maximal conversion rate of pullulan from glucose as the carbon source was 0.37, when those of glucose and yeast extract were 5.0 and 0.15% (w/v), respectively. On the basis of total amount of pullulan, the conversion rate of pullulan from glucose, and utilization rate of glucose to cell mass and pullulan by A. pullulans HP-2001, the optimal concentrations of glucose and yeast extract for the mass production of pullulan were determined to be 10.0 and 0.25% (w/v), respectively, at which concentrations the production of pullulan and its conversion rate were 27.14 g/l and 0.27, respectively. Maximal production of pullulan with optimized concentrations of carbon and nitrogen sources by A. pullulans HP-200l in a 7-1 bioreactor was 32.12 g/l for 72 h culture, and that in a 100-1 bioreactor with the inner pressure of $0.4 kgf/cm^2$ was 36.87 g/l. Increased inner pressure of a 100-1 bioreactor resulted in a higher concentration of dissolved oxygen in the medium, which might enhance the production of pullulan by A. pullulans HP-2001.
전기방사는 휘발성 용매에 녹아있는 다양한 물질들을 마이크로 크기의 섬유로 제조하는데 사용되고 있다. 이번 연구에서는 물을 용매로 사용하여 pullulan을 전기 방사하였다. 부드러운 섬유를 얻기 위하여 pullulan 농도와 전압을 최적의 조건으로 설정하였다. Pullulan 농도는 pullulan 용액의 점도와 표면 장력에 큰 영향을 받는다. Bead 형태의 pullulan 전기방사 섬유는 5 wt%이하의 농도에서 얻어진다. Pullulan 용액의 농도가 10 wt%로 유지되고, 전압이 15 kV에 고정되었을 때, pullulan 섬유의 평균 직경은 200 nm로 감소하였다. Pullulan electrospun 섬유는 높은 용해도, 유연성, 부드러움과 강한 접착성을 보여준다.
Aureobasidium pullulans에 의한 whey배지에서 플루란의 생산에 대한 연구가 수행되었다. Whey배지에서 풀루란의 발효생산에 대한 실험결과, 최종균체농도는 sucrose 기본배지에서와 동일하였으나 풀루란의 생산은 5g/$\ell$로 저조하였다. Whey배지에서 풀루란 생산을 향산시키이 위하여 lactose와 galactose 기본배지에서 적응배양을 시도하였다. 적응배양을 시도하지 않은 경우, lactose를 탄소원으로 한 배지에서 3.4g/$\ell$, galactose를 탄소원으로 한 배지에서 2.5g/$\ell$의 풀루란 생산을 보였으나 적응배양방법을 이용하여 lactose로부터 10~12g/$\ell$, galacrose 기본배지에서 lactose에 적응배양된 균은 13.5g/l의 풀루란을 생산하였고 galactose에 적응배양된 균은 18.6g/l를 생산하였다. Whey배지에 적응배양된 균을 접종한 결과 초기 pH3.0일때 풀루란 생산이 최대값을 보였다.
pullulan은 maltotriose를 기본 단위로 하여 .alpha.(1.rarw.4), .alpha.(1.rarw.6)결합으로 구성된 일종의 .alpha. glucan으로, 'black yeast'로 알려진 Aureobasidium pullulans에 의해 세포외로 생산되는 다당류이다. pullulan은 다른 다당류에서 볼 수 없는 많은 우수한 성질이 있어, 식품에서 접착, 증점, 안정, 품질 개량 효과등의 이용을 비롯하여, 산소 불투과성 필름, 가식성 필름, 플라스틱 결착제, 코오팅제 등 여러가지 무공해 재료로써 광범위한 분야에 그 이용 가능성이 모색되고 있다. 본 고에서는 A. pullulans를 이용한 pullulan 생산의 연구 현황과 그 특성 및 응용 가능성에 대해 고찰해보고자 한다.
The pullulan production and morphological change of Aureobasidium pullulans ATCC 9348 were investigated both in batch fermentation and in continuous fermentation. The best carbon source for pullulan production was sucrose among seven different carbon sources. The pullulan production of A. pullulans was increased with increasing the carbon to nitrogen ratio of the medium using sucrose as a carbon source. In batch fermentation, production of pullullan occurred following exhaustion of the nitrogen source from the medium. The continuous fermentation showed that the pullulan production was closely parallelled with cell growth and was most effective at a dilution rate of 0.06~0.07 hr$^{-1}$-. The ratio of yeast-like cells(blastospores) of A. pullulans increased with the increase of growth rate, and reached 100% over the growth rate of 0.07 hr$^{-1}$. The growth rate, within a certain range, affected not only on the cell morphology, but on the specific pullulan productivity of A. pullulans.
For the production of pullulan from the high concentration of sugar, the utilization of sugars by a pullulan-producing fungus, Aureobasidium pullulans was examined. A. pullulans showed the different utilization patterns for sugars such as sucrose, maltose, and maltotriose. Especially for maltotriose, the hydrolysis of sugar was accompanied by a transferase activity. Glucose and maltose showed the inhibitory effect on the cell growth and the pullulan production at the sugar concentration higher than 0.28M, but sucrose showed the inhibitory effect at the sugar concentration higher than 0.14M. Among the sugars examined, sucrose gave the best result for the pullulan production. 27.5g/l of pullulan was obtained from 5% sucrose.
The effects of pH on the cell growth, the elaboration of pullulan, and the morphology of Aureobasidium pullulans IFO 4464 were examined. A. pulluans grew in yeast-like form at constant pH7.5 and in mycelial form at constant pH2.5. At the both pH conditions, the elaboration of pullulan was very low, about 6.0~6.5g/l. The mixture of yeast-like form and mycelial form of cells was found at the constant pH4.5, at which condition, the elaboration of pullulan was high, about 24.5g/l. The pH shift experimemts showed that the specific production rates of pullulan were 0.048($hr^{-1}$)for the mycelial form and 0.058($hr^{-1}$)for the yeast like form, which indicated that the yeast-like form has the similar, only slightly higher, biosynthetic activity of pullulan to the mycelial form at pH4.5 and the pH of culture broth is more important factor for the elaboration of pullulan than the morphology of A. pullulans.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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