• 자연과학논문집
• /
• 제11권1호
• /
• pp.55-63
• /
• 1999

효모세포의 원형질체 최적형성을 위한 stabilizer의 종류 및 농도, pH 그리고 lysis 방법을 조사하는 한편, intact cell과 protoplast사이의 효소활성도 및 poly-P 생합성율을 비교하였다. 그 결과 protoplast 형성에 있어 snail gut enzyme은 5시간, drisielase는 3시간 정도의 incubation 시간이 필요했으며, stabilizer로는 0.8 M mannitol, 6 M KCl이 좋았다. Protoplast는 intact cell에 비해 ALPase 활성은 22-27%, ACPase는 4-15% 정도 감소하였으며, poly-P 형성은 protoplast에서 유의한 증가가 일어나지 않았다.

• 미생물학회지
• /
• 제22권4호
• /
• pp.207-214
• /
• 1984

2-deoxy-D-glucose가 첨가된(25 pg/ml) 최소액체 배지에 8.5시간 전 배양하여 swelling 시킨 conidiospore에 2% driselase와 2% ${\beta}-glucuronidase$를 동량 혼합한 효소용액을 처리하여 반응시킨 결과 protoplast형성 시간 2시간이내로 단축 시킬 수 있었다. 5% Ficoll(m.w. 400,000)용액을 사용하여 conidial protoplast를 보다 순수하게 분리 벙제할 수 있었으며, protoplast를 Giemsa로 핵 염색한 결과, 대부분의 protoplast는 하나의 핵을 갖고 있었다. 또한 전자현미경으로 관찰한 결과 conidiospore에서 유래된 protoplast는 세포벽 성분이 남아 있지 아니한 완전한 protoplast인 것으로 판명되었다. 영양요구성 돌연변이주에서 유래된 conidial protoplast의 융합률은 $3.4{\times}10^{-1}$에서 $4.9{\times}10^{-1}$수준으로 이는 mycelial protoplast의 경우보다 5-28배 가량 높은 수준의 것이었다.

• 미생물학회지
• /
• 제22권3호
• /
• pp.175-181
• /
• 1984

In order to develope a protoplast fusion system for industrial coryneform bacteria, the optimum conditions for the formation and regeneration of progoplast were examined for Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum and the protoplast fusion was performed. For the formation of the protoplast of B. flavum and C. glutamicum, the optimum time for penicillin G. treatment to obtain protoplast was mid-exponential growth phase ($O.D_{580}=0.6-0.8,\;8.0{\times}10^7-1.0{\times}10^8cell/ml$). At the optimum conditions (0.3units/ml penicillin G and $400{\mu}g/ml$ lysoyme for treatement), frequencies of protoplast formation and protoplast regeneration were 99% and 25%, respectively. Protoplast regeneration frequency was highest under the optimum conditions for the protoplast formation. Addition of 25mM $Mg^{2+}\;and\;50mM\;Ca^{2+}$ to the regeneration medium further increased the regeneration frequencies. The protoplast fusion frequencies of B. flavum and C. glutamicum in intraspecies fusion were $1.0{\times}10^{-8}\;and\;7.8{\times}10^{-4}$, of the regenerated protoplast respectively, when 33% of PEG (polythylene glycol) 6,000 was used as the fusing agent.

• 한국균학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.58-64
• /
• 1992

Trichoderma 속의 제균종중에서 10균주를 선별하여 protoplast 형성에 관한 제반조건을 검토하였으며 그 결과는 다음과 같았다. 보편적으로 protoplast 형성에 있어서 삼투안정제의 효과는 ${KCI}>(NH_4)_2{SO_4}>NaCl>mannitol>{MgSO}_4$ 순이었으며, 최적농도는 0.6-0.9M 사이에서 결정되었다. Protoplast형성을 위한 DRISELASE의 최적조건은 pH5.0, 효소농도 2%. 반응시간 4시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. NOVOZYM 234의 최적조건은 pH 5.5, 효소농도 1%,반응시간 3시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. Protoplast 생성은 대수증식기 초기와 증기사이의 균사체가 최적이었다. Protoplast 생성에 있어서는 DRISELASE가 효과적이었으나 T. longibruchiatum IAM 13107과 T. viride IAM 5141의 경우에는 NOVOZYM 234가 보다 효과적이었다.

• 미생물학회지
• /
• 제19권4호
• /
• pp.186-191
• /
• 1981

Protoplast production from Trichoderma koningii ATCC 26113 was investigated for the purpose of doing basic and applied researches by protoplast fusion of the cellulolytic filamentous fungus. High yields of protoplast were obtained by using the 18hr. old mycelia treated with the lytic enzyme Driselase of Kyowa Fermentation Co., Japan, in 0.6M $MgSO_4\;or\;(NH_4)_2SO_4$ as osmotic stabilizers. The optimum temeprature of mycelial digestion was about $28^{\circ}C$ and the number of protoplast increased rapidly after 3hr. digestion. Protoplasts produced at different periods showed distinct morphological heterogeneities in the whole size and the size of vacuole.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.6-13
• /
• 1992

유산균주의 균주개량방법의 일환으로 protoplast fusion 방법을 사용하여 lincomycin에 내성을 나타내는 Lactobacillus casei KCTC 1121과 rifampicin에 내성을 나타내는 Lactobacillus delbruckii JK-414의 protoplast 형성과 재생, 융합에 대한 조건 및 융합주의 생리학적 성질 등을 검토하였다. Lactobacillus case와 Lactobacillus delbrueckii JK-414는 삼투압 안정제로 sucrose가 함유된 protoplast forming buffer에서 5$\mu g$/ml의 mutanolysin 으로 $42^{\circ}C$, 15분간 처리 했을 때 protoplast 형성율이 높게 나타났다.

• KSBB Journal
• /
• 제9권2호
• /
• pp.191-199
• /
• 1994

김치 발효에 주관여 미생물로 작용하는 Lactoba-cillus plantarum, Leuconostoc mesenteroides 균주에 세포 융합법을 적용시켜 우수한 형질의 재조합체를 얻기 위한 균주 개량의 방법으로 이용하고자 하여 그 기초가 되는 원형질 형성의 최적 조건을 조사하였다. Protoplast를 생성하기 위하여 세포벽 용균 효소로 lysozyme $40{\mu}$g/ml와 protoplast 형성률이 가장 좋은 생육시기인 15hr으로 결정하였다. $30^{\circ}C$, pH 7.5에서 현저한 흡광도 감소 경향과 protoplast 형성률도 우수하였다. 15% sucrose, 20mM $MgCl_2$, 6mM $CaCl_2$에서는 흡광도 감소 경향을 보이지 않았으나 protoplast 형성률은 다른 농도에서보다 증가하는 경향을 나타냈다. Plasma expander로 알려진 gela tin을 첨가하였을 경우에는 660nm에서 유의적인 흡광도 감소 경향을 보이지 않았으며 단지 proto-plast를 형성시키는데 있어서 중요한 보조적 역할을 수행하는 것으로 여겨진다. 균주 발육을 하기 위한 최소 저지 농도를 조사한 결과 marker로 이용할 수 있는 항생제는 erythromycin($15{\mu}$g/ml), ampicillin($50{\mu}$/ml), tetracyclin($30{\mu}$g/ml), chloramphe-nicol($30{\mu}$g/ml)이었다. Leu. mesenteroides는 모든 조건에서 L.plantarum보다 용균 작용과 protoplast 형성 효율이 낮아 L. plantarum에 준하여 protoplast 생성조건을 결정하였다.

• 미생물학회지
• /
• 제22권1호
• /
• pp.35-40
• /
• 1984

Streptomyces속 균주개발의 수단으로서 이용할 목적으로 원형질체 융합방법의 확립을 시도하였다. 특히 융합빈도를 높이고 실험을 간편화하는데 역점을 두었다. 원형질체의 형성 및 재생빈도는 균의 배양시간에 따라 변하였는데 대수기에서 수확한 균체로부터 가장 높은 빈도의 수율을 얻었다. 원형질체의 형성은 다른 용균효소를 사용하지 않고 Lysozyme 단독처리 만으로도 충분히 가능하였고 원형질체의 세포막 재생은 Monolay법 보다는 Overlay법이 훨씬 좋은 결과를 주었다. Monolay법은 1.8%, Overly법은 14%의 재생빈도를 나타냈다. 본 실험에서 PEG1000 (50% W/V)를 사용한 원형질체 융합방법으로 얻은 S. coelicolor의 재조합체의 빈도는 $1.8 {\times} 10^{-2}$이었다.

• 미생물학회지
• /
• 제26권1호
• /
• pp.37-43
• /
• 1988

This research was focused on investigation of the condition for protoplast formation and regeneration of protoplast fusion between Saccharomyces cerevisiae which has fermentation ability and Candida cariosilignicola which can grow at high temperature and utilize methanol. The results obtained were as follows; The highest production was collected in exponential growth phase. Ninety-nine% protoplast formation of C. cariosilignicola was obtained in glycin-NaOH buffer (pH10.0) containing Zymolyase 0.5mg/ml at $35^{\circ}C$ for 1hr incubation. The highest regeneration was produced when protoplast wuwpension containing 0.5% soft agar in buffered 50mM $CaCl_{2}$ was poured as a soft overlay onto 2% agar plates. Equal amuont of protoplast suspension of two strains was mixed and centrifuged. The subsequent pellet was added to 2ml of 35% polyethylene glycol (MW 4,000) containing 50mM $CaCl_{2}$, and incubated at $30^{\circ}C$ for 10min. Then 0.1ml of the suspension of aggregated protoplast was immediately covered with minimal medium and incubated at $40^{\circ}C$ for 5-7 days. As results, $SC_{1}$, $SC_{2}$, and $SC_{3}$ fusants were obtained. The physiological characteristics of fusants produced by protoplast fusion were; $SC_{1}$, and $SC_{2}$ utilized maltose, galactose, methanol, potassium nitrate. $SC_{3}$ utilized all the above materials except galactose.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.107-112
• /
• 1993

The optimal conditions for protoplast fusion between the cells of kanamycin resistant Lactobacillus bulgaricus IFO 13593 and those of lincomycin resistant Lactobacillus helveticus IAM 12090 were investigated in this study. The highest fusion frequency of 9.1*10-4 was obtained when protoplast fusion was carried out for 0.5 min using 40% PEG 4000 solution as a cell fusion stimulant and subsequent post-PEG-incubation was undergone at 30 for 30 min in the PPI medium.