• 제목/요약/키워드: Proteinase 3

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Bacillus licheniformis SSA3-2M1 이 생산하는 Proteinases

  • 장영채;이경형;김성영;조윤래;김종규
    • 미생물학회지
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    • 제30권4호
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    • pp.239-245
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    • 1992
  • 한국 재래식 간장의 독특한 맛을 생성하는 B. licheniformis SSA3-2M1 의 배양액으로부터 proteinase 를 정제한 결과 2 종의 proteinase 의 역가를 확인할 수 있었다. Proteinase I 의 역가는 II 보다 두배가량 되며 최적 pH 가 7-11.5 이었다. Proteinase I 의 역가는 II 보다 두배가량 되며 최적 pH 가 7-11.5 이었다. Proteinase II 의 최적 pH 는7-9 이며 proteinase II 는 I 보다 pH3-5 부근의 상성에서 더 안정하고 활성이 강하였다. Proteinase I 과 II 의 최적온도는 각각 50.deg.C 였으며, proteinase II 의 온도안정성은 30-45 .deg.C 온도범위에서 proteinase I 보다 더 안정하였다. Proteinase I 은 45.deg.C 에서 60% 가 실현되었으며 protein II 는 45.deg.C 에서 5% 가량 실활되었다. 염에 대한 영향은 proteinase I 이 염의 농도 25-35% 범위에서 proteinase I 보다 효소활성이 높은 것으로 나타났다. Proteinase 치는 casein 을 기질로 사용하였을 경우, proteinase I 은 6.89 mg/ml, proteinase II 는 9 mg/ml 의 $K_{m}$ 치를 나타내었다. 이결과는 proteinase I 이 II 보다 기질에 대한 친화력이 높은 것으로 나타났다. 각종 금속이온의 농도 1 mM 에서는 Pb($CH_{3}$CCO)$_{2}$ 는 효소 활성을 증가시켰고 $ZnSO_{4}$, $7H_{2}$O, $K_{2}$$SO_{4}$, $HgSO_{4}$ 등은 저하시켰으며, 5 mM 이상에서는 $HgSO_{4}$$ZnSO_{4}$ 가 다른 염에 비해서 특히 효소활성을 많이 저히하였다. Proteinase I 과 II 는 대두 단백을 가수분해하여 peptide 와 아미노산을 생성하였으머 peptide 를 다시 아미노산으로 분해하였다. Proteinase I 과 II 는 한국재래식 간장의 중요 맛성분인 아미노산을 생성하는 주효소로 밝혀졌다.

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치수 및 치근단 질환에서의 단백분해효소 및 단백분해효소 억제제의 활성도에 관한 연구 (A STUDY ON THE ACTIVITY OF PROTEINASE AND PROTEINASE INHIBITOR IN PULPAL AND PERIAPICAL PATHOSES)

  • 김진우;;임성삼
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제25권4호
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    • pp.509-526
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    • 2000
  • It is known that injuries to the dentin have a corresponding inflammatory effect on the pulp and these inflammatory effects frequently result in pulpal pathoses due to progressive degradation of pulpal connective tissue. It was supposed that the tissue degradation in different inflammatory process was controlled by proteinase activity and antiproteinase activity. Therefore, the purpose of this study was to examine the pulp and periapical pathoses in terms of the activities of proteinase and proteinase inhibitor, 37 pulpal tissues were divided by clinical diagnostic criteria into normal pulp, acute inflamed pulp, and chronic inflamed pulp, and then those groups were subdivided by histopathological findings into 5 pulpal pathoses groups, i.e. normal pulp (P1, n=8), chronic pulpitis with fibrotic change (P2, n=2), chronic pulpitis with dystrophic calcification (P3, n=11), chronic pulpitis with pulp abscess (P4, n=7), acute pulpitis with necrotic change (P5, n=4), 26 periapical tissues were also divided by ordinary histopathological findings into 3 periapical pathoses group, i.e., granuloma (A1, n=17), cyst (A2, n=2) and abscess (A3, n=7). The activities of proteinases (cathepsin G, MMP-3) and proteinase inhibitors (${\alpha}1$-AT, TIMP-1 and, SLPI) were evaluated by RT-PCR and immunohistochemical methods. The results were as follows. 1. Generally, the intensity of immunohistochemical staining of proteinases and proteinase inhibitors increased in P2 and P5 groups compared to P1 group. 2. The immunohistochemical stain of proteinases and proteinase inhibitors was intensely detected in P2 group, showing low inflammatory reaction and low tissue degradation, but it was reduced in P3 and P4 groups, showing severe tissue degradation. 3. The distribution of proteinases and proteinase inhibitors in pulpal pathoses was consistently presented by immunohistochemical staining, while the expression of proteinase and/or proteinase inhibitors mRNAs in pulpal pathoses was occasionally detected by RT-PCR methods. 4. RT-PCR of proteinase and proteinase inhibitors was usually positive in P2, showing rare tissue degradation, but it was almost negative in P3 and P4, showing severe tissue degradation. 5. We presume that the reason why the level of proteinase and proteinase inhibitors was so sparse in RT-PCR method is due to the abrupt decrease of mRNA synthesis or degradation of synthesized mRNA of proteinase and/or proteinase inhibitors depend on the inflammatory reaction and/or on the degradation of pulp tissues(P3, P4). 6. Pulpal pathoses groups showed significant lower RT-PCR detection of proteinases and proteinase inhibitors than the periapical pathoses group(p<0.05), and there is no significant difference among the periapical pathoses groups(p>0.05).

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탁주료중의 단백질분해효소에 관한 연구 (Studies on the proteinase in Takjoo mashes during the process of brewing)

  • 홍순우;하영칠;민경희
    • 미생물학회지
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    • 제7권3호
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    • pp.115-124
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    • 1969
  • The mash of Takjoo, Korean flour wine, is fermented through two brewing processes ; the primary brewing process to saccharify and the main one to produce ethyl alcohol. The activities of acid proteinase (pH3), weak acid proteinase (pH 6), and alkaline proteinase (Ph 80 on the processes are determined with time by the Folin phenol method as a strength of casein digestion. Hydrogen ion concentration, the content of total organic acids, protein, free amino acids and oligopeptides, which effect the activities of proteinase, are also measured. The results are briefly summarized as follows : 1. In general, the activities of acid proteinase and weak acid proteinase in the mesh of primary brewing process are stronger than those in main brewing process. 2. The activities of acid proteinase are remarkably stronger than those of weak acid proteinase in both processes. It reveals that they decrease slowly through the fermentation. Activities of alkaline proteinase are weaker than others. 3. As the raw materials are mixtured, the total amount of organic acids is equivalent to 0.150 mg/ml acetic acid in the mesh of primary brewing process and 0.02 mg/ml acetic acid in the main one. They increase gradually with time. 4. Hydrogen ion concnetration shows 3.9 in the mesh of main brewing process and 3.28 in the primary one. They increase to the maximum in 60-72 hrs., and decrease since 108 hrs. 5. The content of crude protein shows 66.90mg/ml in the mesh of main brewing process, while shows 64.29mg/ml in the mesh of primary one. they decrease slowly with time. it seems that a small content of crude protein, as a substrate, converts into amino acids and soluble nitrogen compounds by proteinase. 6. The content of free amino acids and oligopeptides shows 0.36 mg/ml in the mesh of primary brewing process and 0.24mg/ml in the main brewing process. It is evident that the reason they increase continuously through the fermentation is the effect of proteinase. 7. According to the results, the strong activities of proteinase in primary brewing process has been derived from the decrease of hydrogen ion concentration due to the production of organic acids.

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식품첨가물(食品添加物)이 소화효소(消化酵素)의 활성(活性)에 미치는 영향(影響)(1) - 식품첨가물(食品添加物)이 Pancreatin의 Proteinase Activity에 미치는 영향(影響) - (Effects of Condiments upon Enzyme Activity (1) - Effects of Condiments upon Proteinase Activity of Pancreatin -)

  • 서명자
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제6권4호
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    • pp.55-60
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    • 1973
  • 0.2%에 Pancreatin Solution에 파, 생강, 마늘, 후추, 고추, 고초냉이, 겨자, 설탕, 등(等) 각종(各種) 식품첨가물(食品添加物)을 Homogenizer로 마쇄하여 0%, 1%, 5%, 10% 가(加)하여 $15^{\circ}C$에 저장하고 일정시간(一定時間)마다 이 효소액(酵素液)을 취(取)하여 Fuld Gross Method에 의(依)하여 Proteinase 역가(力價)를 측정(側定)하여 식품첨가물(食品添加物)이 Proteinase활성(活性)에 미치는 영향을 실험(實驗)하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 파 파를 0.2% Pancreatin Solution에 1%, 5%, 10% 첨가시(添加時)의 Proteinase 역가(力價)는 저장 3일(日) 까지는 control에 비(比)하여 75% 억제되고 저장 4일후(日後)에는 더욱 억제되어 저장 시일(時日)이 경과(經過) 함에따라 Proteinase활성(活性)이 더욱 억제 되었다. 2) 생 강 생강은 control에 비(比)하여 저장 24시간(時間)까지는 93% 억제한다. 그러나 저장시간(時間)이 경과(經過) 함에따라 효소작용(酵素作用)을 억제하는 기능(機能)이 감소되어 control에 비(比)하여 50% 정도(程度)로 Proteinase 활성(活性)을 억제한다. 3) 마 늘 마늘은 저장 24시간(時間)까지는 control에 비(比)하여 Proteinase활성(活性)이 87%정도(程度) 억제 되나 시일(時日)이 경과(經過) 함에 따라 효소(酵素)억제 작용(作用)이 감소되여 10일(日)째는 억제효과(效果)가 없어진다. 4)후 추 후추는 control에 비(比)하여 1% 첨가구(添加區)는 저장 3일(日)까지는 75% 억제되고, 저장 4일이후(日以後)는 50%로 억제 된다. 5%, 10% 첨가구(添加區)는 저장시간(時間)과 관계(關係)없이 Proteinase활성(活性)이 75%로 억제된다. 5)고 추 고추 1% 첨가구(添加區)는 저장 24시간후(時間後)에는 control에 비(比)하여 87% 억제되나 48시간(時間) 이후(以後)부터는 계속 75% 억제되었고, 10일(日)째는 50%로 억제된다. 5% 첨가구(添加區)는 저장 24시간후(時間後)부터는 87% 억제되고 7일(日)터는 Proteinase 활성(活性)이 75% 억제된다. 10% 첨가구(添加區)는 저장시간(時間)에 관계(關係)없이 control에 비(比)하여 87% 억제한다. 6)미 원 미원은 첨가(添加) 농도(濃度)와 관계(關係) 없이 2일(日)까지는 75% 억제되고 3일(日)에서 5일(日)까지는 50% 억제되었으나 7일(日)부터 는 Proteinase 활성(活性) 억제 효과가 없어진다. 미원은 저장시간이 경과함에 따라 Proteinase 활성(活性) 억제효과가 없어진다. 7)설 탕 설탕은 첨가(添加) 농도(濃度)에 관계(關係)없이 24시간후(時間後)에는 Proteinase 활성(活性)이 75% 억제되고 2일(日)째부터는 저장시간에 관계(關係)없이 계속 50% 억제된다. 8) 고초냉이 고초냉이는 저장 24시간째는 약(約) 95% 정도(程度)의 Proteinase 활성(活性)을 억제하나 2일(日)째 부터는 5%, 10% 첨가구(添加區)는 87% 억제하고 1% 첨가구(添加區)는 75% 억제되어, 고초냉이의 첨가농도(添加濃度)가 높을수록 Proteinase 활성(活性)이 억제된다. 9)겨 자 겨자는 저장시간과 별(別)로 관계(關係)없이 첨가농도(添加濃度)가 높을수록 Proteinase 활성작용(活性作用)을 억제하고 식품첨가물중(食品添加物中)에서 가장 높은 억제율을 나타내었다.

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우릉쉥이(Cynthia roretzi v. Drasche)의 소화효소에 대하여 (제2보) Proteinase의 효소적 성질 (Studies on the Digestive Enzyme of Cynthia roretzi V. Drasche. II. Some propeinic properties of Amylase.)

  • 서석수;양한석
    • 약학회지
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    • 제5권1호
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    • pp.51-55
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    • 1960
  • Some enzymatic properties of Cynthia roretzi V. Drasche (Korean:U-Rung-Shei) was studied by author and obtained the following results; 1. The optimum pH of the digestive gland proteinase ws 7.4-7.6 2. Activity of metallic ion on the Proteinase showed following order; 10$^{-3}$ M. M $n^{++}$>1-$^{-3}$ M. $Co^{++}$>10$^{-4}$ M. $Mg^{++}$\ulcorner10$^{-2}$ M.S $r^{++}$. Inhibition of metallic ion on the Proteinase showed following order: 10$^{-3}$ M. A $g^{+}$>10$^{-3}$ M. c $d^{++}$>10$^{-3}$ M. P $b^{++}$>10$^{-3}$ M. Z $n^{++}$ 3. The digestive gland enzyme inactivated at 70.deg. C, but no influence at 50.deg. C. 4. When the enzyme concentration increase 2 times, and 3 times, the enzymatic activity also increase, but not proportionally 5. The digestive gland Proteinase showed remarkably higher enzymatic activity than the intestinal Proteinase. 6. The digestive gland amylase brom the ascidion showed remarkably higher enzymatic activity than the heptaponcreatic amylase from shell fish (Turbo (Batillus) Cornutus Solander).).er).).).er).).

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Yarrowia lipolytica 504D의 Alkaline Proteinase 특성 (An alkaline proteinase produced by Yarrowia lipolytica 504D)

  • 김창화;진익렬;유춘발
    • 미생물학회지
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    • 제34권3호
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    • pp.82-86
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    • 1998
  • Yarrowia lipolytica 504D가 생산하는 alkaline proteinase를 정제한 결과, 분자량은 32,000으로 나타났고, pH 9.5와 $42^{\circ}C$에서 최적활성을 보였으며, pH 4-10의 범위와 $45^{\circ}C$까지 비교적 안정한 것으로 나타났다. PMSF를 비롯하여 EDTA, EGTA, phenanthrolin도 효소활성을 저해하여 정제효소가 serine proteinase인지 metal proteinase인지 불확실하였다. 그러나 28% 활성증가를 보인 $Cu^{2+}$ 외에 $Zn^{2+}$를 비롯한 대부분의 무기염들이 효소활성을 증가시키지 못하였고, 또한 EDTA의 첨가로 불활성화된 효소도 Ca 염의 첨가로 활성이 복원되었다. 따라서 정제효소는 serine proteinase(E.C. 3.4.21.14)로 추정되었다.

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Mucin 분비에 영향을 미치는 Metalloproteinase (Metalloproteinase Plays a Role in Mucin Secretion)

  • 오연목;최희진;심태선;이상도;김우성;김동순
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제56권3호
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    • pp.289-296
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    • 2004
  • 연구배경 : 기도 질환에서 점액이 과량 분비되는 경우 환자에게 불편함을 줄뿐만 아니라 기도 질환 예후에도 나쁜 영향을 미친다. 그러나, 기도 질환에서 점액이 과량 분비되는 것을 효과적으로 막는 방법이 없다. 점액의 성분 중 mucin은 당화 단백질로서 점액이 점성을 띄게 만드는 주요 성분이다. 본 연구를 통해서 mucin 분비 기전에 proteinase가 관여하는지 확인하고 만일 proteinase가 mucin 분비기전에 관여 한다면 어느 proteinase가 그런 역할을 하는지 확인하고자 하였다. 방 법 : (1) mucin 분비 억제 실험 군 특이적 proteinase 억제제를 사용하여 어느 군에 속하는 proteinase가 mucin 분비를 억제하는지 mucin을 생산하는 폐 세포주인 Calu-3를 이용하여 알아보았다. 군 특이적 proteinase 억제제로 PMSF(phenylmethylsulfonyl fluoride, serine proteinase inhibitor), E-64(cysteine proteinase inhibitor), Pepstatin(aspartic proteinase inhibitor), 1,10-Phenanthroline(metalloproteinase inhibitor)를사용하였다. 군 특이적 억제제를 Calu-3에 24시간동안 처리하여 분비된 mucin양을 enzyme linked immunoabsorbant assay(MUC5AC)로 정량하였고 그 결과를 대조군과 비교하였다. (2) Mucin 분비 자극 실험 Metalloproteinase 중에서 기도 질환 발병과 관련 있다고 알려진 matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), MMP-12 그리고 TNF-alpha converting enzyme(TACE)를 Calu-3에 24시간 처리하여 분비된 mucin양을 enzyme linked immunoabsorbant assay (MUC5AC)로 정량하였고 그 결과를 대조군과 비교하였다. 결 과 : (1) 군 특이적 proteinase 억제제인 PMSF($10^{-4}M$), E-64($10^{-4}M$), Pepstatin($10^{-6}M$), 1,10-Phenanthroline($10^{-4}M$)는 MUC5AC 분비를 각각 $1{\pm}4.9%$(평균${\pm}$표준오차; 대조군과 비교 시 P=1.0), $-6{\pm}3.9%$ (P=0.34), $-13{\pm}9.7%$(P=0.34), $41{\pm}8.2%$(P=0.03) 감소시켰다(실험 회수 4번). (2) MMP-9(250ng/ml), MMP-12(100ng/ml), TACE(200ng/ml)에 의한 MUC5AC 분비량은 대조군에 비하여 각각 $103{\pm}6%$(P=0.39), $102{\pm}8%$(P=1.0), $107{\pm}13%$(P=0.39)이었다(실험 회수 6번). 결 론 : mucin 분비 기전에 metalloproteinase가 관여함을 시사하지만 MMP-9, MMP-12, TACE는 in vitro 모델에서 mucin 분비에 영향을 미치지 않았다.

Comparison of specific activity and cytopathic effects of purified 33 kDa serine proteinase from Acanthamoeba strains with different degree of virulence

  • Kim, Won-Tae;Kong, Hyun-Hee;Ha, Young-Ran;Hong, Yeon-Chul;Jeong, Hae-Jin;Yu, Hak-Sun;Chung, Dong-Il
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제44권4호
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    • pp.321-330
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    • 2006
  • The pathogenic mechanism of granulomatous amebic encephalitis (GAE) and amebic keratitis (AK) by Acanthamoeba has yet to be clarified. Pretense has been recognized to play an important role in the pathogenesis of GAE and AK. In the present study, we have compared specific activity and cytopathic effects (CPE) of purified 33 kDa serine proteinases from Acanthamoeba strains with different degree of virulence (A. healyi OC-3A, A. lugdunensis KA/E2, and A. castelianii Neff). Trophozoites of the 3 strains revealed different degrees of CPE on human corneal epithelial (HCE) cells. The effect was remarkably reduced by adding phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF), a serine proteinase inhibitor. This result indicated that PMSF-susceptible proteinase is the main component causing cytopathy to HCE cells by Acanthamoeba. The purified 33 kDa serine proteinase showed strong activity toward HCE cells and extracellular matrix proteins. The purified proteinase from OC-3A, the most virulent strain, demonstrated the highest enzyme activity compared to KA/E2, an ocular isolate, and Neff, a soil isolate. Polyclonal antibodies against the purified 33 kDa serine proteinase inhibit almost completely the proteolytic activity of culture supernatant of Acanthamoeba. In line with these results, the 33 kDa serine proteinase is suggested to play an important role in pathogenesis and to be the main component of virulence factor of Acanthamoeba.

Aspergillus 속 균주가 생성되는 사독 Proteinase에 대한 저해물질 - 균의 분리 및 저해물질의 생물학적 작용상 - (Inhibitory Substance Produced by Aspergillus sp. on the Snake Venom Proteinase - Isolation of Microorganism and Biological Activities of the Inhibitor -)

  • Hyun, Nam-Joo;Seu, Jung-Hwn
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제15권2호
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    • pp.129-134
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    • 1987
  • Snake venom proteinase에 대한 저해물질을 생성하는 Aspergillus 속 균주 MK-24를 토양으로부터 얻어 그 배양액에서 저해물질을 분리하여 Venom proteinase에 대한 작용양상과 안정성에 대한 조사결과는 다음과 같다. Glucose 2%, NaNO$_3$ 0.3%, $K_2$HPO$_4$ 0.02%, MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$ 0.02%, KCl 0.02% 조성의 배지(pH 5.0)를 사용하여 3$0^{\circ}C$에서 7일간 배양하여 얻은 배양액을 acetone 심전 활성탄, methanol 침전으로 무정형의 유효분말을 얻었다. 이 물질은 A. b.b. venom proteinase에 대하여 1/2 배양에서 약 70% 저해율을 나타냈으며, A.b.b. venom proteinase에 대한 저해양상을 혼합형이었으며 enzyme-inhibitor complex를 형성하는데 20분 정도가 걸렸다. 반응액중에 Co$^{++}$, $Zn^{++}$, Cu$^{++}$ 등이 존재하면 저해작용이 완전히 억제되었다. 저해율은 사용한 기지리의 종류에 따라 차이가 났다. 즉 casein을 사용했을 때는 hemoglobin이나 albumin보다 저해율이 높았다. 그리고 본 저해물질은 snake venom proteinase 이외에 trypsin에 고농도에서 약간 저해작용을 나타냈으나 pepsin, $\alpha$-chymotrypsin, papain 등과 탄수화물 가수분해효소 등에는 저해능이 없었고, 혈액응고에 대하여는 1.6 $\mu\textrm{g}$/2$m\ell$ 농도 이상에서는 저해작용을 나타내었다. 본 저해물질은 열이나 pH에 대한 안정성이 컸다. 즉, pH처리에 대해서는 37$^{\circ}C$에서 60분 처리로 산이나 alkali에 대해서 대단히 넓은 범위에 걸쳐서 안정하였으며 $65^{\circ}C$에서는 중성까지는 안정하였으나, pH 8 이상에서는 불안정하였고 열처리에 대해서는 10$0^{\circ}C$에서 2시간 처리했을 때에도 잔존활성도가 약 90%로 매우 안정하였다.

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Cloning and Expression of a Serine Proteinase Gene Fragment from Acanthamoeba culbertsoni

  • Park, Ki-Won;Kim, Tong-Soo;Na, Byoung-Kuk;Song, Chul-Yong
    • BMB Reports
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    • 제31권3호
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    • pp.303-306
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    • 1998
  • Serine proteinase cDNA fragment from protozoan parasite Acanthamoeba culbertsoni was amplified by the reverse transcription-polymerase chain reaction (RTPCR) using degenerate oligonucleotide primers derived from conserved serine proteinase sequences. The amplified DNA fragment was subcloned and sequenced. The sequence analysis and alignment showed significant sequence similarity to other eukaryotic serine proteinases and conservation of the His, Asp, and Ser residues that form the catalytic triad. The cDNA fragment was cloned into the pGEMEX-1 expression vector and expressed in Escherichia coli. A resulting fusion protein of 56 kDa had proteolytic activity. The fusion protein reacted with sera of mice immunized with purified serine proteinase of A. culbertsoni in Western blot. Immune recognition of the fusion protein by mouse antisera suggested that the fusion protein may be valuable as a diagnostic reagent.

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