Protease의 생산능이 우수한 Asp. oryzae KC-15를 선정하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Wheat bran medium에서의 최적배양시간은 acid protease와 neutral protease는 약 48시간, alkaline protease는 약 72시간이었고 본 균주가 생산하는 protease는 alkaline protease와 neutral pro-tease가 주체이며 acid protease는 극히 미약하였다. 2. Wheat bran medium 에 $Na_2$HPO$_4$, NaH$_2$PO$_4$, Glucose, rice powder 및 Na-glutamate의 첨가는 alkaline protease와 neutral psotease의 생산에, (NH$_4$)$_2$HPO$_4$, glucose 및 rice powder의 첨가는 acid protease의 생산에 효과적이었다. 3. 조효소의 특징(equation omitted) 4. 내열제로서 NaH$_2$PO$_4$가장 효과적이었으며 최적첨가량은 alkaline protease와 neutral protease 에 대하여는 10mg, acid protease에 대하여는 5mg 이었다. 5. 6$0^{\circ}C$ 이상에서는 NaH$_2$PO$_4$의 내열효과는 거의 인정할 수 없었다. 6. NaH$_2$PO$_4$10mg을 첨가하고 55$^{\circ}C$에서 30분간 처리하였을 때의 잔존활성은 alkaline protease는 약 58%, neutral protease는 약 57%, acid protease는 약 55 %이었다.
본 연구는 표고버섯균의 액체배양을 통한 protease효소의 최적생산 조건을 찾고, 생산된 protease 의 효소적 특성을 구명하고자 실시하였다. Protease 대량생산을 위한 공사균으로서 표고버섯균(Lentinula edodes)을 사용하였으며, 최적생산 조건을 구명하기 위하여 생산기질의 조성, 배양조건, 배양기간 등을 검토하였다. 배지의 조성별 protease 생산성에 있어서는 밀기울+옥수수가루+물+옥수수기름(WB+CF+W+CO)조합이 84.8 U/g으로서 가장 높은 protease 생산성을 보여주었고, 콩가루와 소맥분조합의 protease 생산성이 매우 낮은 것을 알 수 있었다. Protease 생산을 위한 배양매체로서 acetate buffer에서는 전혀 protease의 생산이 되지 않았으며, pH 6.2의 이온교환수가 80.5 U/g 의 가장 높은 protease 생산성을 나타냈다 이온교환수를 pH 4.0으로 조절하였을 때 생산성은 62.3 U/g 으로 낮아졌다. 배양기간에 따른 protease 생산성은 배양시간이 경과됨에 따라 증가하였으며, 72시간 배양으로 90.6 U/g 의 최대값에 달하였고, 그 이후 점차 감소하는 경향으로 나타났다 Sephadex G-75 chromatography 로 측정한 생산된 protease 의 분자량은 약 45,000 이었다. Lentinula edodes를 이용하여 생산된 protease의 효소특성을 상이한 pH 및 온도의 조건에서 조사한 결과, 최적 pH는 4에서 나타났으며, 37℃(1 시간)에서 측정한 활성은 pH 4~6 범위에 있었다. Protease의 온도안정성을 조사한 결과 최적온도는 55℃에서 나타났으며, 30~60℃의 넓은 온도범위에서 안정함을 알 수 있어서 이 효소는 소화용 제제, 식품공업, 맥주제조업 및 가죽무두질 등 널리 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
Characteristics and roles of protease released during the germination of Dictyostelium discoideum spores were investigated. When geat activated, the spores germinated, progressively releasing the protease into the extracellular medium. The protease activity exhibited high at pH 2.5. When cyclogeximide was added to culture, complete germination (emergence) and protease release were stopped. Addition of purified nonspecific protease to culture speeded up germination. These results suggest that excreted protease may play a role in removal of the spore wall.
효모세포벽 용해효소의 일종인 Zymolyase$(endo-{\beta}-1\;,3-glucanase)$와 더불어 Arthrobacter luteus로 부터 생산되었고, 또한 Zymolyase의 조효소중에서 발견된 바 있는 염기성 AL-protease의 효모세포벽 용해작용을 S. sake의 생세포와 그 세포벽 표품(標品)을 사용하여 조사하였다. AL-protease의 효모 생세포에 대한 용해활성은 그 단독작용만으로는 지극히 미약하였으나, Zymolyase와의 복합작용에 의해서 용해활성은 고도로 상승하였다. 효모생세포를 AL-protease와 Zymolyase로써 단계적인 처리를 할 경우, 효모세포는 AL-protease로 전처리된 뒤에 Zymolyase로 처리되는 처리 순서에 한하여 효과적으로 용해되었다. 이러한 AL-protease의 촉진적 작용은 AL-protease처럼 염기성이고 serine protease로 알려진 몇가지 시판의 효소들 중에서는 발견되지 않았으며, 또한 AL-protease의 이러한 작용은 실험에 사용된 효모들의 배양조건 및 균종에 따라서 커다란 영향을 받는 것으로 밝혀졌다. AL-protease는 효모세포벽 표품(標品)으로부터 일정량의 peptide와 상당량의 당을 유리시키고 있으나, 그 세포벽을 66% 이상은 용해시키지 못하였다. 반면에, Zymolyase는 그 단독작용으로도 효모세포벽을 거의 완전히 용해시킬 수 있었다. 이상의 실험결과를 기초로 하여, S. sake 세포벽의 용해에 있어서 AL-protease의 효소적 작용은, 먼저 AL-protease가 mannan과 단백질로 구성되는 세포벽 표층부에 결합하고, 이어서 그들의 구조를 변화시킴으로써, Zymolyase를 세포벽의 외부로 부터 알카리 불용성 glucan으로 구축되고 있는 세포벽 내부의 골격구조로까지의 침투를 촉진시키는 것으로 추론되었다.
Kim, In-Seop;Kim, Hyoung-Tae;Lee, Hyun-Sook;Lee, Kye-Joon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제1권4호
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pp.288-292
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1991
The aim of the current study is to evaluate the effects of medium compositions on the production of protease inhibitor in Streptomyces sp. SMF13. The production of protease inhibitor was counter-currently linked to extra-cellular protease, which were regulated by the culture conditions. Nitrogen source was the most critical ingredient affecting the production of protease inhibitor and protease. Carbon source was an important factor to determine the culture pH which affected very clearly the formation of protease and protease inhibitor. Inorganic phosphate inhibited the protease inhibitor production which was linked to the cell growth rate, although the optimal conditions for the production of protease inhibitor were not favouring to the cell growth.
콩 가수분해물의 기능성 강화를 위하여 콩분말 및 SPI에 4종의 protease를 처리하여 가수분해물의 특성을 조사하였다. 수율은 protease(B)를 처리하였을 때 콩분말에서 43.2%, SPI에서 61.6%로 가장 높게 나타났다. 용해도와 총페놀성 물질은 protease(B)와 (C)처리구에서 크게 증가하였으며, 칼슘내인성은 protease(B)를 처리하였을 때 향상되었다. 콩분말에서 콩 특유의 비린내는 protease처리로 감소하였으나 콩분말과 SPI 모두 protease 처리로 쓴맛이 강해졌으며 protease의 종류에 따른 차이는 확인되지 않았다. 가수분해물의 수율을 비롯한 이화학적 특성을 감안할 때, protease (B)가 가수분해물 제조에 적합하였으며, 가수분해물의 활용 형태에 따라 관능적 특성의 보완이 요구되었다.
For the purpose of developing a new biodegradable detergent, we have isolated a gene encoding wide-range temperature applicable alkaline protease from Xanthomonas sp. YL-37 (Lee et al., 1994, Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol.). An alkaline protease gene was isolated from the gene bank that was prepared from the chromosomal DNA of Xanthomonas sp. YL-37. From the results of agarose gel electrophoresis and a restriction enzyme mapping, a 2.7 kb DNA fragment containing the alkaline protease gene was inserted in the plasmid pUC9. Extracellular activity of a clone having alkaline protease gene was detected on SDS-polyacrylamide gel with activity staining assay. The molecular weight of alkaline protease was determined to be about 64 kDa from 11% SDS-PAGE analysis. Alkaline protease activity, produced from E. coli which harboring the plasmid, showed no difference at reaction temperature 20, 30 and 40$\circ$C, respectively. This result showed that alkaline protease produced from E. coli harboring the plasmid was apparently the same as that of Xanthomonas sp. YL-37.
Mutational experiments were performed to improved to improve the protease productivity of Aspergillus flavus KU 153, which is selected among the wild strains. A UV-induced mutant strain having high protease productivity was obtained by the use of the clear zone method as a simple criterion for a primary screening test. Neutral and alkaline protease activities of hte mutant strain were higher than 1.8 times, comopared with those of the parental strain, respectively, while in the case of acid protease, it was 2.7 times. The mutant strain selected was more powerful in the production of cellulase and amylase, as well s protease in wheat bran, compared with those of the parental strain. protease production of the parental strain has reached maximum level at 3 days culture, while alkaline nad neutral protease production of the mutantstrain has reached at 2 days culture. On the other hand, the mutant strain formed the spore slowly, compared with the parental strain. Column chromatography of the neutral protease on DEAE-Sephadex A-50 showed that the mutant strain was not induced the formation of another neutral protease isozyme, but induced the variation in the function of regulatory gene.
본 연구는 육계사료에 protease를 수준별로 첨가하여 급여시에 육계의 성장, 혈액의 성상, 기관의 무게, 단백질 소화율에 미치는 영향을 구명하고자 실행하였다. 256수의 cobb 1일령 수컷병아리를 4개 처리구 4반복으로 5주간 배치하였다. Protease 사료내 수준은 0, 40, 80, 160U가 되도록 하였다. 증체량, 사료섭취량, 사료요구율은 주간별로 측정하였으며, 혈액의 성상, 기관의 무게는 실험종료시에 측정하였다. 단백질 소화율은 사양실험 종료후 처리구별로 개체 수용하여 1주간 실행하였다. 기초사료는 전기3주와 후기 2주간에 각각 단백질 21.5, 19.0%, 대사에너지 3,100, 3,200kcal/kg 수준으로 급여하였다. 증체량은 사료내 protease 80U 처리구에서 사육전기에 다른 처리구보다 현저하게 높았다(p〈0.05). 사료요구율은 protease 첨가수준이 증대됨에 따라서 개선되는 경향을 보였으며, protease 80과 160unit 처리구는 대조구에 비하여 현저하게 개선되었다(p〈0.05). 혈청 단백질은 Protease 처리구에서 낮은 경 향을 보였다. HDL은 protease 160U 처리구에서 낮게 나타났다. 그러나, protease 첨가는 기관무게, 단백질 소화율에 미치는 영향이 없었다. 본 실험의 결과 육계용 사료에 protease 첨가로 사료요구율이 개선되었다.
Protease related mold was isolated and selected as a starter culture for commercial production of meju. Isolated microorganism was identified as Syncephalastrum racemosum PDA 132 2. To obtain basic data about protease for production of soybean peptides and application of the strain in meju fermentation, we extrated and purified protease and charateristics of the enzyme were investigated. The optimum condition for the production of enzyme was pH 4.0, 30oC, 5 days. The protease was purified 19.7 folds by gel filtration and ion exchange chromatography and specific activity was 12.4unit/mg. The purified enzyme was 34kDa in size, thiol protease(100% inhibited by PCMB), and was acidic protease(stable between pH 2.0~5.0). Vmax of the enzyme was 2.14 g/min which was lower(1/50) than that of by Asp. wentti and B. subtilis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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