• 한국식품과학회지
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• 제35권6호
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• pp.1199-1203
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• 2003

한국산 녹차를 70% 에탄올로 추출한 후 Sephadex LH-20과 HPLC를 사용하여 polyphenol을 분리동정하였고 분리된 각 성분들의 angiotensin converting enzyme(ACE) 및 xanthine oxidase, tyrosinase의 저해효과를 확인하였다. 녹차로부터 HPLC로 polyphenol을 분리한 결과 epiafzelechin-$(4{\beta}{\rightarrow}8)$-epiafzelechin, procyanidin B-3-3-O-rhamnose, afzelechin-$(4{\alpha}{\rightarrow}8)$-catechin, prodelphinidin B-5-3,3'-di-O-digallate, (+)-taxifolin-3-O-D-xyloside 등 11종류를 분리하였다. ACE의 저해효과는 prodelphinidin-C-2-3,3'-di-O-gallate $100{\mu}M$에서 68.8%, procyanidin B-2-3,3'-digallate가 54.6%의 저해를 나타내었고, Xanthine oxidase는 prodelphinidin C-2-3,3'-di-O-gallate가 54.5%, procyanidin B-2-3,3'-digallate가 38.2%로 높은 저해효과를 보였다. Tyrosinase의 저해효과는 $100{\mu}M$ 농도에서 prodelphinidin C-2-3,3'-di-O-gallate가 42.1%, procyanidin B-2-3,3'-digallate와 procyanidin B-7이 각각 30.7%, 20.5%의 저해를 나타내었다. 따라서 녹차 추출물로부터 분리한 polyphenol이 혈압예방, 통풍 및 미백효과의 기능성 식품 신소재로서 이용이 가능하다는 것을 확인하였다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제24권1호
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• pp.154-159
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• 1995

Inhibition of xanthine oxidase by tea extracts obtained from non-fermented tea(steamed green tea and roasted green tea), semi-fermented tea(oolong tea) and fermented tea(black tea) were investigated. The crude catechin fraciton had a hgher inhibitory effect against xanthine oxidase, and the effect was increased with the addition of tea extracts. Their inhibitory effect were hardly influenced until extracted three times with hot water. According to the investigation of catechins in the crude catechin fraction obtained from tea extracts, (-)-epicatechin-(EC), (-)-epicatechin gallate(ECg). (-)-epigallocatechin(EGC) and (-)-epigallocatechin gallate(EGCg) were 80.1$\mu\textrm{g}$/mg 113.5$\mu\textrm{g}$ /mg, 186.3$\mu\textrm{g}$/mg and 367.7$\mu\textrm{g}$/mg in steamed green tea, and 75.6$\mu\textrm{g}$/mg, 114.7$\mu\textrm{g}$/mg, 193.7 $\mu\textrm{g}$/mg and 381.9$\mu\textrm{g}$/mg in roasted green tea, and 69.4$\mu\textrm{g}$/mg, 110.0$\mu\textrm{g}$/mg, 127.1$\mu\textrm{g}$.mg and 464.9$\mu\textrm{g}$/mg in oolong tea, and 78.1$\mu\textrm{g}$/mg, 171.8$\mu\textrm{g}$/mg, 80.7$\mu\textrm{g}$/mg and 51.4$\mu\textrm{g}$/mg in black tea, respectively. Order of the content of these catechins was (-)-EGCg>(-)-EGC>(-)-ECg>(-)-EC in steamed green tea, roasted green tea and oolong tea, and was (-)-ECg>(-)-EGC>(-)-EC>(-)-EGCg in black tea. Also the concentration of catechins was hardly influeced until extracted three times. The inhibition ratio of xanthine oxidase by autherntic catechins was hardly influenced until extracted three times. The inhibition ratio of xanthine oxidase by authentic catechins was 94.9% and 87.6% by addition of 5.0$\mu\textrm{g}$/ml of (-)-EGCg and (-)-ECg, respectively. the inhibitors of xanthine oxidase were supposed to be due to (-)-ECg and (-)-EGCg in tea polyphenol compounds.

• 한국식품영양과학회지
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• 제40권10호
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• pp.1447-1452
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• 2011

우리나라 버섯 생산량의 약 80%를 차지하는 느타리버섯(Pleurotus ostreatus)의 유통 중에 발생하는 갈변을 방지하기 위한 기초 조사로 갈변원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리 정제하여 그 특성을 조사하였다. 느타리버섯으로부터 3개의 PPO isoforms(PO-I, PO-II-1, PO-II-2)을 분리하였으며, gel-filteration을 이용한 분자량 확인 결과 PO-II-1은 void volume(70 kDa), PO-I과 PO-II-2는 include volume(6 kDa)에서 분리되는 것으로 보아 PO-II-1은 70 kDa 이상, PO-I과 PO-II-2는 6 kDa 이하인 것으로 확인되었다. 분리된 3개의 PPO isoform들을 partially denatured-PAGE 후, activity staining을 이용하여 분석한 결과, 비록 이들 PPO isoforms PO-II-1과 PO-II-2에 다수의 단백질들이 들어있기는 하지만 PPO 활성을 보이는 band가 하나로 나타남으로써 분리된 PPO isoform들이 실제 PPO 활성을 갖고 있는 단백질로 확인되었으며 다른 PPO isoform이 혼합되지 않은 단일 PPO isoform으로 분리되었음을 알 수 있다. Hydrophobic interaction chromatography에서 분리된 isoform PO를 이용하여 특성을 조사한 결과 최적 반응온도와 pH는 일반적인 다른 과채류와는 달리 $50{\sim}55^{\circ}C$, pH 5.5에서 높은 활성을 나타내었으며, 열 안정성 실험에 있어서는 $60^{\circ}C$에서 45분간 가열 처리 시 약 40%의 PPO activity가 남아있는 반면, $80^{\circ}C$에서 30분간 가열 처리 시 PPO가 완전히 불 활성화되었다. 그리고 chlorogenic acid와 pyrogallol에 대하여 높은 기질 특이성을 보였다.

• 한국식품과학회지
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• 제35권5호
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• pp.791-796
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• 2003

박피된 절편 연근의 갈변억제를 효과적으로 하기 위한 기초연구로 갈변의 주원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 박피된 절편 연근을 24시간 동안 $4^{\circ}C$에 방치하여 PPO 활성을 증가시켜 조효소액을 제조하였으며 PPO 조효소액을 acetone으로 침전시킨 후 Q-Sepharose anion-exchange column, Phenyl-Sepharose hydrophobic interaction column의 conventional column과 Mono-Q anion-exchange column, Superdex 75 gel-filtration column의 HPLC column을 이용하여 PPO 활성이 가장 높은 한 개의 PPO isoform LPIII-2를 최종 분리 정제하였다. 분리 정제된 LPIII-2의 분자량을 gel-filtration chromatography를 이용하여 측정한 결과 56kDa이었으며 SDS-PAGE를 실시한 후 silver staining한 결과 LPIII-2의 분자량은 28kDa와 26kDa으로 2개의 band를 형성하는 것으로 보아 heterodimer인 것으로 추정되었다. PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q-Sepharose anion-exchange chromatography를 이용하여 부분분리 정제된 2개의 isoforms(LP-II, LP-III)를 가지고 기질 특이성을 조사한 결과 LP-II의 경우 $5^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 모두 catechol에 대한 기질 친화력이 높았으며 LP-III의 경우 $5^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 모두에서 pyrogallol에 기질 친화력이 높았다. 그리고 pH 7에서 최적 pH를 보였으며 열안정성은 $40^{\circ}C$에서 60분간 열처리했을 때 안정하였지만 $60^{\circ}C$에서 40분, $80^{\circ}C$에서 10분간 열처리했을 때 효소가 불활성화되었다. 특이하게도 연근의 PPO는 다른 과채류의 PPO와 반응온도에 따른 특성이 달랐는데 여러 반응온도에서 효소 활성을 측정한 결과 연근 PPO isoform LP-II와 LP-III 모두 $5^{\circ}C$의 반응온도에서 높은 효소활성을 보였으며 온도가 올라갈수록 반응속도가 떨어지는 특성을 보였다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1301-1304
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• 2001

본 연구는 사과의 구취억제인자를 구명하기 위한 기초자료로써 사과 추출물의 획분에 따른 사과에서 추출한 PPO의 methyl mercaptan에 대한 구취 억제활성을 조사하였다. 사과를 탁즙하여 구취 억 제 활성 을 측정 해 본 결과, 사과 고형 분의 농도가 증가함에 따라 구취억제활성이 증가하는 경향을 나타내었다. 사과의 저분자획분에 PPO를 첨가한 경우, 저분자 획분의 농도증가 및 반응시간에 따른 methyl mercaptan에 대한 구취억제활성이 증가하는 경향을 나타내었다. 이상의 결과는 사과에서 추출한 PP7에 의한 갈변반응의 중간체로 생성되는 o-quinone이 methy mercaptan과 결합하여 meth- yl mercaptan을 비 휘 발성으로 전환시켜 구취억제활성을 나타내는 것으로 생각된다

• 생약학회지
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• 제6권2호
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• pp.93-99
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• 1975

Polyphenol substances involved in the browning of Malus asiatica $N_{AKAI }$ ('Hong-ok') were examined. It was found that chlorogenic acid was the principal substance. The estimation of polyphenol oxidase activity in Malus asiatica revealed that its browning reaction was caused by enzymatic oxidation of chlorogenic acid.

• 동의생리병리학회지
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• 제22권3호
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• pp.672-677
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• 2008

In order to explore the anti-oxidization effect of oriental medicine and cereal medium(OCM) where Tricholoma matsutake mycelia were cultured, measurement of hot water extract and UMPM(extraction method using ultra sonic waves, micro waves, micro bubble) extract, the total polyphenol content of crude polysaccharide from each extract, SOD-like activity, electron donating ability(EDA), xanthine oxidase inhibitory activity, and tyrosinase inhibitory activity was conducted. The total polyphenol content of each extract was found to be 16.36% for hot water extract(HE) group and 15.73% for UMPM extract(UE) group and the amount of crude polysaccharide precipitated into ethanol of extracts was found to be 8.79% for UMPM ethanol extract(UEE) group and 6.48% for hot water ethanol extract(HEE) group. As a result of measurement of SOD-like activity by concentration of each extract, it was found to be 96.17% for UE group, 91.23% for HE group, 91.33% for UEE group, and 87.11% for HEE group at 20 mg/mL. In the case of EDA, it was found to be 47.55% for UE group, 44.93% for HE group, 25.38% for UEE group, and 18.36% for HEE group. And in the cases of the rates of xanthine oxidase inhibitory activity and tyrosinase inhibitory activity, as the concentration of each extract increased, the inhibition rate increased accordingly. As a result of comparison between hot water extract method and UMPM extract method using extracts obtained from oriental medicine compound medium where Tricholoma matsutake mycelia were cultured, all of the extracts were judged to have a high anti-oxidization effect. In particular, UMPM extracts were found to have higher polyphenol content, SOD-like activity, EDA, xanthine oxidase inhibitory activity and tyrosinase inhibitory activity compared to hot water extract method. In this regard, extracts obtained from OCM where Tricholoma matsutake mycelia were cultured are considered to have high availability as functional material when and if they are prepared using UMPM extract method.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제1권1호
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• pp.111-116
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• 1996

Polyphenol oxidase(PPO) isolated from the crude extract of ascidian, Halocynthia roretzi, showed higher affinity for catechol than tyrosine or DL-DOPA. Successful enzyme assay could be performed at $25^{\circ}C$, 10min. by mixing 0.2ml of crude enzyme extract with 2.8ml of 0.13M catechol in 0.1M sodium phosphate buffer(pH 6.4). The specific activity of PPO which had been purified with a combination of ammonium sulfate treatment, ion exchange chromatography on DEAE-cellulose, and gel filtration on Sepharose 6B was 13-fold disc gel electrophoresis. The activity of PPO was stable from pH 5.0 to 8.0 and showed the peak activity at pH 6.4 .The optimum reaction temperature for PPO oxidation on catechol was 35$^{\circ}C$ and those enzyme were heat stable up to 4$0^{\circ}C$. Molecular weigth of the enzyme was estimated about 170kDa. One molecule was found to be composed of gour subunits. Two of them had molecular weigh of 55kDa and the others 30kDa. The {TEX}$K_{m}${/TEX} values, {TEX}$V_{max}${/TEX} and catalytic efficiency({TEX}$V_{max}${/TEX}/{TEX}$K_{m}${/TEX}) for catechol were 0.12mM, 2.5mM/liter/min. and {TEX}$0.18min^{-1}${/TEX} respectively. The substrate affinity and electrophorectic pattern suggested that the enzyme of ascidian was considered to be not tyosine but catechol oxidase.

• 한국식품과학회지
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• 제22권6호
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• pp.618-624
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• 1990

사과(Jona gold)로부터 추출한 polyphenol oxidase와 polyphenol 화합물인 catechol, hydroquinone, homocatechol, hydroxyhydroquinone 그리고 pyrogallol 용액과 반응시켜 얻어진 사과효소 갈변반응 생성물에 대한 항돌연변이원성 효과를 검토하였다. SOS spot test와 SOS chromotest에 사용된 균주는 E. coli PQ37/plasmid pKM101 균주이며 spot test에서 위 다섯 종류의 시료 모두 갈변용액의 농도를 증가시켜 줌에 따라서 mitomycin C(MMC), 4-nitroquinoline-1-oxide(4NQO), 그리고 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) 등의 발암물질들에 대해서 강한 억제활성을 나타내었다. 한편, SOS chromotest에서도 발암물질의 종류에 따라 차이는 있으나 갈변용액의 농도증가에 따라 MMC, MNNG, 4 NQO 그리고 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido-(4,3-b) indol (Trp-P-1) 등에 대해서 강한 억제활성을 나타내었다.

• 한국식품조리과학회:학술대회논문집
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• 한국식품조리과학회 1994년도 춘계 국제 학술 심포지움
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• pp.220-220
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• 1994