Pigments and thylakoid membrane proteins were investigated in wild type and PS I- mutants from Synechocystis sp. PCC6803 Comparing morphological features, B2 was less fluorescent than the other strains. The contents of chlorophyll a were propotional to the FNR activity in thylakoid membrane. The FNR activity of mutants was lower than that of wild type. In the result of pigments analysis, mutants had smaller cholophyll a than that of wild type. The major carotenoid was found to he $\beta$-caroene, but aeaxanthin was barely detected in thylakoid membrane of mutants. The polypeptide, 14.8kD was detected by electrophoresis in mutants. It was considered to be the modification of 15.4kD in wild type. Membrane polypeptides of 17.6 and 19.7kD were not detected in mutants. In the result of western blotting, subunit I was detected in all strains, but subunit II was barely detected in mutants. Subunit II was not detected in B2 at all. In view of the results so far achieved, the changes of contents of chlorophyll and zeaxanthin were affected by the defficiency or modification of functional domain in subunit I. Also the modification in subunit I affected the subunit II- binding site in PS I. As the result, efficiency of photosynthesis was decreased. Key words: Synechoystis sp. PCC6803, PS I - mutant, Photosynthetic efficiency, Pigment,Thylakoid membrane proteins, Subunit I, II.
The structural changes in the electron donor side of the PSII reaction center have been monitored since heat treatment ($45^{\circ}C$ for 5 min) of thylakoids is known to decrease the oxygen evolving activity. In heat-treated spinach chloroplast thylakoids, the inhibitory effect of 3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea (DCMU) on the electron transport activity of the PSII reaction center from diphenyl carbazide to dichlorophenolindophenol became reduced approximately 3.8 times and [$^{14}C$]-labeled DCMU binding on the D1 polypeptide decreased to 25~30% that of intact thylakoid membranes, implying that the conformational changes of the DCMU binding pocket, residing on the D1 polypeptide, occur by heat treatment. The accessibility of trypsin to the $NH_2$-terminus of the cytochrome b-559 ${\alpha}$-subunit, assayed with Western blot using an antibody generated against the synthetic peptide (Arg-68 to Arg-80) of the COOH-terminal domain, was also increased, indicating that heat-treatment caused changes in the structural environments near the stromal side of the cytochrome b-559 ${\alpha}$-subunit, allowing trypsin more easily to cleave the $NH_2$-terminal domain. Therefore, the structural changes in the electron donor side of the PSII reaction center complexes could be one of the reasons why the oxygen evolving activity of the heat-treated thylakoid membranes decreased.
기질 분자로서 6-bromobenzo-[4,5]imidazo[$1,2{\alpha}$]pyridin-8,9-diones 유도체의 photosystem II의 저해활성에 관한 3차원적인 정량적 구조와 활성과의 관계(3D-QSARs)들을 비교 분자장분석(CoMFA)과 비교분자 유사성 지수분석(CoMSIA) 방법으로 각각 검토하였다. CoMFA 모델은 CoMSIA 모델보다 높은 예측성과 상관성을 갖는 모델이었다. 또한 최적화된 CoMFA 2 모델의 기여도는 입체장(90.4%)에 가장 의존적이었다. CoMFA 등고도 분석으로부터, 치환기(R)로서 모체로 연결되는 탄소원자(ipso carbon)에 곁가지를 가진 치환체가 도입될수록 저해활성이 증가할 것으로 보인다. 또한, imidazol 고리와 pyridine 고리 사이의 위치에 양하전을 가질수록 활성이 높을 것으로 예상되며 친수성을 띄는 선 형태의 치환기가 도입되는 경우에 활성이 개선될 것으로 판단되었다.
iso-Butanol이 엽록체의 광합성 전자전달 활성에 미치는 영향을 연구하기 위하여 암조건하에서 시금치의 엽록체에 iso-butanol을 처리한 후 대조구와 비교하여 광계 II 활성과 광계 I 활성을 조사하였으며, 또한 iso-butanol이 틸라코이드 막단백질에 미치는 영향을 알아보기 위해 전기영동으로 틸라코이드 막단백질의 변화를 조사하였다. 광계 I 활성은 iso-butanol이 저농도(1-4%)일 때는 증가하였으나 고농도(5-9%) 에서는 감소되었다. 광계 II 활성은 iso-butanol의 농도가 0.6, 0.8, 1%에서는 각각 75%, 55% 및 25%로 활성이 감소하였다. Butanol 중에서 탄소수는 같으나 OH 기의 위치가 다른 1-butanol, sec-butanol, tert-butanol, iso-butanol이 광계 II의 전자전달계에 미치는 영향을 비교해 본 결과 OH 기를 중심으로 탄소의 배열이 직선상 일 때 저해효과가 크다는 것을 알 수 있었다. iso-butanol이 1차적으로 광계 II에 미치는 억제 부위는 0.8% iso-butanol 처리구에 DPC 첨가했을 때 DCIP 환원율이 93%로 증가하는 것으로 보아 광계 II의 산화 부위임을 알 수 있다. 0.8% iso-butanol 처리구에 외부에서 망간과 칼슘을 첨가하였을 때 광계 II 활성이 각각 83%와 79%로 보호된 것으로 보아 광계 II 활성 억제는 망간의 소실과 관계 있는 것으로 생각된다. 또한 1% iso-butanol 처리한 엽록체를 20배 희석하였을 때 활성이 78%로 회복되었다. iso-Butanol은 1% 이하의 저농도에서 광계 II 활성을 감소시킨데 비해 1% iso-butanol 처리구의 틸라코이드 막단백질의 SDS-PAGE에 의한 band pattern은 대조구와 유사하며 2% 처리구에서는 52 Kd 부근에서 미세한 band pattern의 차이가 있으며 5%의 iso-butanol 처리구의 틸라코이드 막단백질의 band는 전체적으로 많이 소실되었다. 이것으로 보아 iso-butanol은 가역적으로 광계 II의 산화부위에 관여하는 단백질에 영향을 주어 $Ca^{2+}와\;Mn^{2+}$ 이온의 친화력을 저하시켜 광계 II 활성을 억제시키고 또한 알코올의 R-group의 틸라코이드 막에 침투하여 막구조를 변형시키므로 광계 I 활성이 증가하며 고농도(5-9%)에서는 비가역적으로 막구조를 변경하여 광계 I 활성이 감소한 것으로 사료된다.
분리한 시금치 엽록체에 $Cd^{2+}$을 처리하였을 때 광계 I에 비해서 광계 II의 활성이 낮은 농도의 $Cd^{2+}$에 의해 억제되었다. 그러므로 $Cd^{2+}$에 의해 1차적으로 광계 II 활성이 저해되었다는 것을 알 수 있다. 광계 II의 전자공여체인 diphenylcarbazide를 첨가했을 때 대조구에 비해 활성이 크게 증가하였다. $Cd^{2+}$ 처리시 $Mn^{2+}과\;Ca^{2+}을$ 외부에서 첨가했을 때 광계 II 활성은 회복되었지만 회복되는 정도가 15%로 낮았다. $50\;\mu\textrm{M}\;Cd^{2+}$ 처리구에서 광계 II 활성은 크게 감소하였으나 Fv/Fm는 미소하게 감소하였으며 $100\;\mu\textrm{M}\;Cd^{2+}$ 처리구에서 Fv/Fm는 크게 감소하였다. 광계 I활성은 $Cd^{2+}$의 처리 농도가 증가함에 따라 감소하였으나 세척하였을 경우 0.2 mM의 $Cd^{2+}$ 처리구에서 대조구보다 활성이 증가하였으며 농도가 높아짐에 따라 활성의 회복 정도가 컸다.
Effects of HgCl$_2$-treatment on electron transport, chlorophyll a fluorescence and its quenching were studied using isolated barley (Hordeum vulgare L. cv. Albori) chloroplasts. Depending on the concentration of HgCI$_2$, photosynthetic oxygen-evolving activities of photosystem II (PS II) were greatly inhibited, whereas those of photosystem I (PS I) were slightly decreased. The inhibitory effects of HgCl$_2$ on the oxygen-evolving activity was partially restored by the addition of hydroxyamine, suggesting the primary inhibition site by HgCl$_2$2-treatment is close to the oxidizing site of PS tl associated with water-splitting complex. Addition of 50 $\mu$M HgCI$_2$ decreased both photochemical and nonphotochemical quenching of chlorophyll fluorescence. Especially, energy dependent quenching (qE) was completely disappeared by HgCl$_2$-treatment as observed by NH$_4$CI treatment. In the presence of HgCI$_2$, F'o level during illumination was also increased. These results suggest that pH gradient across thylakoid membrane can not be formed in the presence of 0 $\mu$M HgCl$_2$. In addition, antenna pigment composition might be altered by HgCl$_2$-treatment.
The response of the freshwater microalga, Chlorella vulgaris, to heavy metal stress was examined based on chlorophyll fluorescence analysis to assess the toxic effects of heavy metals in freshwater ecosystems. When toxic effects were analyzed using regular chlorophyll fluorescence analysis, photosystem II activity($F_v/F_m$) decreased significantly when exposed to $Cu^{2+}$ and $Hg^{2+}$ for 12 h, and decreased in the order of $Hg^{2+}>Cu^{2+}>Cd^{2+}>Ni^{2+}$ when exposed for 24h. The effective photochemical quantum yield(${\phi}{\prime}_{PSII}$), chlorophyll fluorescence decrease ratio($R_{Fd}$), minimal fluorescence yield($F_o$), and non-photochemical quenching(NPQ), but not photochemical quenching(qP), responded sensitively to $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, and $Cd^{2+}$. These results suggest that $F_v/F_m$, as well as ${\phi}{\prime}_{PSII}$, $R_{Fd}$, $F_o$, and NPQ could be used to assess the effects of heavy metal ions in freshwater ecosystems. However, because many types of heavy metal ions and toxic compounds co-occur under natural conditions, it is difficult to assess heavy metal toxicity in freshwater ecosystems. When Chlorella was exposed to heavy metal ions for 12 or 24h, $F_v/F_m$ and maximal fluorescence yield($F_m$) changed in response to $Hg^{2+}$ and $Cu^{2+}$ based on image analysis. However, assessing quantitatively the toxic effects of several heavy metal ions is challenging.
Since the efficiency of wastewater treatment using microalgae differs depending on the metabolic characteristics of the species, it is important to understand the characteristics of target algae prior to the application in wastewater treatment. In this study, for the application of Arthrospira platensis to wastewater treatment, which is a filamentous alkaliphilic cyanobacteria, basic species specificity was identified and the possibility of application to wastewater treatment was investigated. As a result of the species specificity investigation, the specific growth rate between pH 7.0 and 11.0 showed the highest value near pH 9 at 0.25/day. The reason for the relatively low growth(0.08/day) at pH 11 was thought to be the CA(carbonic anhydrase) enzyme that is involved in carbon fixation during photosynthesis has the highest activity at pH 8.0 to 9.0, and at pH 11, CA activity was relatively low. In addition, A. platensis showed optimal growth at 400 PPFD(photosynthetic photon flux density) and 30℃, and this means that cyanobacteria such as A. platensis have a larger number of PS-I(photosystem I) than that of PS-II(photosystem II). It was speculated that it was because higher light intensity and temperature were required to sufficiently generate electrons to transfer to PS-I. Regarding the applicability of A. platensis, it was suggested that if a system using the synergistic effect of co-culture of A. platensis and bacteria was developed, a more efficient system would be possible. And different from single cocci, filamentous A. platensis expected to have a positive impact on harvesting, which is very important in the latter part of the wastewater treatment process.
Using a squash plant, a chilling-sensitive species, and a spinach plant, a chilling-resistant one, effects of chilling temperature on the photosynthetic machinery were studied in terms of chlorophyll fluorescence. When thylakoid membranes were isolated and subjected to incubation at different temperatures, spinach showed stable photosystem II activity at the low temperature side, in contrast to squash which showed quite severe inactivation at low temperature. When parameters of chlorophyll fluorescence were examined, chilling in darkness did not affect either Fv/Fm or photochemical and non-photochemical quenching, in both types of plants. However, chilling of squash plants under irradiance of medium intensity caused a specific decrease in Fv/Fm accompanied by a decline in energy-dependent quenching. Contrastingly, photosystem li of spinach plants were not much affected by light-chilling. When the pool size of zeaxanthin was examined after exposure to high light at different temperatures, squash plants was shown to have a much lower content of antheraxanthin + zeaxanthin, as compared to spinach plants, during low-temperature photoinhibition. These results suggest that chilling-sensitive plants have low capacity to dissipate excitation energy nonradiatively, when they are exposed to low-temperature photoinhibition, and, as a consequence, more vulnerable to photoinhibitory, damage to the photosynthetic apparatus.
The room temperature fluorescence induction of chloroplasts was utilized as a probe to locate the site of inhibition by mercury, copper and zinc on PS II by mercury. Inhibitory effect of Hg2+ on electron transport activity was notable as compared with Cu2+ and Zn2+. At concentrations of HgCl2 over 50 $\mu$M, activities of PS II and whole-chain electron transport decreased more than 70%, while that of PS I decreased about 10~30%. This suggests that PS II is more susceptible to Hg2+ than PS I is. In the presence of diphenylcarbazide (DPC), 50 $\mu$M HgCl2 inhibited the reduction of dichlorophenolindophenol (DCPIP) about 50%. Addition of heavy metals induced marked decrease in maximal variable fluorescence/initial fluorescence [(Fv)m/Fo], but no changes in Fo. With various concentrations of heavy metals, changes of chlorophyll a fluorescence emitted by PS II showed gradual decrease in photochemical quenching (qQ), which indicates an increase in reduced state of electron acceptor, QA. Especially, the addition of HgCl2 caused a notable decrease of qQ. In the presence of 50 $\mu$M CuCl2, energy-depended quenching (qE) was completely reduced, whereas in the presence of 50 $\mu$M CuCl2 and ZnCl2 it was still remained. The above results are discussed on the effects of mercury in relation to water-splitting system and plastoquinone (PQ) shuttle system.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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