• 미생물학회지
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• 제27권3호
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• pp.188-193
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• 1989

Gene for lactose catabolism in Lactobacillus casei SW-M1 was encoded by a 60Kb metabolic plasmid. A derivative of only 10kb, pPlac 15 of recombinant plasmid, was constructed by introducing into pBR322 and was cloned into E. coli using restriction endonuclease Pst I. A 10kb insery DNA in plasmid pBR322 was identified as a gene encoded phospho-$\beta$-galactosidase by the determination of enzyme activity. Phospho-$\beta$-galactosidase was apparently expressed in E. coli. The enzyme activities of cell-free extract from transformant E. coli HB101 carrying pPLac 15 DNA were not different from that of L. casei as a donor strain on the basis of enzyme properites. However, specific activity of phospho-$\beta$-galactosidase in the cloned strain with Lac $Y^{-}$ phenotype of E. coli HB101 was lower than that in L. casei strain.

• 미생물학회지
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• 제27권3호
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• pp.181-187
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• 1989

Lactobacillus casei SW-M1으로부터 lactose 이용 pPLac Plasmid를 분리하였다. 이 plasmid에 lactose이용 유전자가 존재하는지를 확이하기 위하여 plasmid curing을 실시한 결과, acriflavin 8mg/ml 과 11 mg/ml EtBr를 처리한 후 , 3차 접종 배양의 경우에 curing 빈도가 가장 높았다. Lac와 plasmid가 cured 된 $Lac^{+}$strain의 당 이용능을 조사한 결고, glucose lactosidasedldydsmd은 불변이나, lactosedldydsmd만이 $Lac^{+}$strain에서 감소하였다 pPLac plasmid의 lactose 분해능은 $\beta$-galactosidase 에 의한 것이 아니고, phospho-$\beta$-galactosidase 에 의한 것으로 확인되었다. $Lac^{+}$strain의 carbohydrate가 막투과시 PTS과 관련이 있는가를 조사한 결과ㅏ lactose-PTS가 가장 활성이 높았으며, 그 다음이 galactose-PTS, glucose-PTS 로 나타났다. 그러므로 lactose는 lactose-PTS(lactose-phosphotransferase system)에 의하여 glucose와 galactose-6-phosphate로 분해됨을 알 수 있었다. Phospho-$\beta$-galactosidase의 induction 실험에서는 galactoserk 가장 높은 induction 효과를 보여 주었으며, lactose와 glucose는 높은 수준의 induction을 나타내었으며, IPTG는 induction 효과가 없었다. Glucosedh lactose 배지에서 L. casie는 diauxic growth나 phospho-$\beta$-galactosidase합성을 조사한 결과, catabolite repression을 받지 않는 것으로 나타났다.