실험에 사용한 플라나리아는 Dugesia japonia Ichikawa et Kawakatsu로서 核型分析에 의하여 種을 확인하였다. 이 種의 咽頭 및 腸을 구성하는 세포들의 세포화학적 및 미세구조적 특징을 밝히고자 본 실험을 行하였다. 세포화학적 방법으로는 hematoxylin-eosin, periodic acid-Schiff(PAS) 反應, alcian blue(pH 2.5), PAS-alcian blue 反應 그리고 methylene blue-basic fuchsin등으로 염색을 시행하고, 光學顯微鏡으로 관찰하였으며 또한 各部位의 微細構造를 透査電子顯微鏡으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 咽頭(pharynx) 內腔上皮는 遊離面에 미세융모를 가지고 있었다. 세포질에는 PAS반응에 양성을 나타내는 약 0.4$\\times$0.6 $\\mum$의 과립들이 있고, 小胞 및 液胞가 분화되어 있었다. 핵은 基底部 쪽으로 치우쳐져 있고 基底膜은 관찰되지 않았다. 咽頭外腔의 咽頭 측상피에서는 섬모와 미세융모가 발달되어 있었고 上皮內側에는 근육층이 발달되어 있었다. 咽頭外腔을 둘러싸는 壁側上皮細胞에서는 미세융모가 관찰되었고 세포질에는 전자밀도가 높은 과립들이 포함되어 있었다. 2. 腸(caeca) 腸上皮細胞는 食細胞와 顆粒性棍棒體細胞 그리고 이 세포들을 둘러싸고 있는 貯藏細胞와 幼若貯藏細胞로 구성되어 있었다. 1) 食細胞(phagocytic cell) 세포질에는 비교적 많은 lysosome을 포함하고 있었으며 無顆粒性小胞體와 mitochondria등의 細胞小器官도 잘 발달되어 있었다. 특히 無顆粒性小胞體의 cisternae는 대부분 팽윤되어 있었고 polyribosome도 풍부하게 관찰되었다. 2) 顆粒性棍棒體細胞(granular club cell) 세포질에는 PAS 반응에 강한 양성을 보이고 또 약한 eosinophilia도 나타내는 약 5 $\\mum$의 球形의 과립들을 포함하고 있었다. 특히 顆粒性小胞體가 잘 발달되어 있어TEk. 3) 貯藏細胞(storage cell) 세포질내에는 glycogen 과립들과 PAS에 각기 다른 정도의 양성반응을 보이는 다수의 中性多糖性 과립과 脂肪顆粒들이 포함되어 있었다. 4) 幼若貯藏細胞(immature storage cell) 세포질에는 PAS반응에 양성을 보이는 소수의 작은과립과 脂肪顆粒이 내포되어 있으며 세포질에 비하여 핵은 매우컸다. 핵막 주위의 세포질에서는 chromatoid body들이 관찰되었다.
Adherence of Candida albicans(C. albicans) to the surface of a denture is believed to be an initial and essential step in the formation of denture-induced stematitis. Previous studies have provided enormous infomation on the relationship between composition of palatine gland/parotid saliva and upper denture stomatitis. Relatively little information is available on the correlation between lower denture stomatitis and sublingual-submandibular ( SLSM ) saliva. The plaque samples were collected from the two sites($100mm^2$) on the inner surface of lower partial denture corresponding to the stematitis and healthy region of the lower partial dentures of 12 denture stomatitis patients and 6 nor-mal persons who wore lower partial dentures. The samples were plated to isolate C. albicans on a selective Saboraud's dextrose agar plate and the isolates were identified by germ tube test and gram staining. The subjects were divided into group I (stomatitis with C. albican), group II (lesion without C. albicans), group III (no lesion but C. albicans), and group IV (normal and healthy denture wearer). Individual SLSM saliva($20{\mu}g$ of protein) was analyzed by SDS-PAGE (SDS -poly-acrylamide gel electrophoresis) with Coomassie brilliant blue and PAS(Periodic Acid Schinff) stain-ing. The salivary proteins separated in the polyacryamide gels were subjected to immunoblot anaysis using anti-lactoferrin, anti-sIgA, and anti-secretory component of sIgA. In this study using custom made acrylic denture resin beads(5mm in diameter) coated with stimulated individual SLSM saliva, the binding ability of individual C. albicans strains to the beads was observed. Levels of C, albicans adhered to the acrylic resin beads were determined by measuring the optical density of the bound C. albicans to the beads at 580nm. The results showed that a higher number of C. albicans was observed in the lesion site than healthy site. The saliva of group I contained more high molecular weight glycoprotein(mucin, MGI) as compared to group II, III and IV. And lactoferrin and sIgA affected to the binding ability of C. albicans to acylic resin beads. Binding ability of individual C. albicans to the acrylic resin coated with respective individual saliva was found to be greater in group I than the other 3 groups. And when bound cells of C. albicans isolated from individual subject #2 to the saliva coated beads were used binding ability of subject #2 saliva coated beads was founed to be greater than the other sutjects. These results suggested that denture induced stomatitis is related to individual patient's salivary protein composition, especially MG-1. Future studies will be directed toward saliva exam-ination of patients who have general disease and analysis of pellicles formed on prosthesis with respect to oral disease.
기공의 밀도가 높은 다공성 실리콘 산화물 박막이 GaAs 기판 상에 형성이 되었다. 다공성 실리콘 산화막을 형성하기 위해서 자기조립 형태로 배열하는 블록공중합체를 사용하였다. GaAs 기판 상에 화학기상증착 (CVD)을 이용하여 실리콘 산화막을 형성하였다. 폴리스티렌 (PS) 바탕에 벌집 형태로 배열된 폴리메틸메타아크릴레이트 (PMMA)가 주기적으로 배열되어 있는 나노패턴 박막을 형성하였고 PMMA를 아세트 산으로 제거하여 PS만 남아있는 나노크기의 마스크를 형성하였다. 형성된 PS 나노패턴의 지름은 15 nm, 박막의 두께는 40 nm 였으며 이를 건식 식각용 마스크로 사용하여 화학반응성식각 (RIE) 을 진행하였고 PS의 나노패턴이 산화막 기판상에 전사되도록 하였다. 식각 시간을 조절하여 산화막에 형성된 기공이 GaAs 표면까지 연결되도록 하였고 이는 불산으로 산화막을 제거하여 확인하였다. 식각시간은 90초에서 110초였으며 산화막 상에 나노패터닝된 기공이 형성되는 식각 시간은 90초에서 100초 사이였다. 형성된 나노 패터닝된 산화막 기공의 지름은 20~22 nm였고 식각 시간에 따라서 조절이 가능함을 확인할 수 있었다.
The orbicularis oris muscle (OOM) is a very important muscle that originate from the second branchial arch and is innervated by the facial nerve. The aim of this study was to elucidate distribution types of two muscle fibers that composing OOM by using enzyme-histochemical examinations and tried to make a basis for a clinical application. The fresh frozen tissues from the superior and inferior portions of the OOM were taken from post mortem 65-year-old Korean male adult. Total five different sagittal sections were used on the midline of the philtrum, the middle portion of lower lip, the mouth corner, and each midlateral side of upper and lower mouth. We used enzyme-histochemical staining such as Periodic Acid-Schiff (PAS), Succinic Dehydrogenase (SDHase), reduced Nicotinamide Adenine Dinucleotide-Tetrazolium Reductase (NADH-TR), Adenosine Triphosphatase (ATPase) in pH 9.4, 4.6 and 4.3, and Modified Gomori Trichrome. There were about 30.24 % type 1 muscle fiber and 65.40 % type 2 muscle fiber in the midline of the philtrum (p < 0.05). Enzyme-histochemical staining is very useful and innovative method to elucidate characteristics of muscle fibers. We expect that chiloplasty and reconstruction of the lip portions for cleft lip patients, based on these results, are better to recovery function and aesthetic. However, we have some problems as an intramuscular variability and the inter-individual variation etc. Therefore we have to make progress these studies continuously to overcome these problems.
본 연구는 오리엔탈 나리 'Casa Blanca' 의 기내인편에서 저반부가 비대된 자구를 형성하고, 형성된 자구절편을 배양하여 저반부가 비대된 자구의 증식 및 자구를 비대시키는, 5 L의 생물반응기를 이용한 일련의 대량생산 체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 5 L airlift 생물반응기를 이용한 액체배양에서는 저반부가 비대된 자구의 형성 및 증식은 전혀 이루어 지지 않았으며, 인편엽만 무성하게 자랐다. 재료가 배지에 일시적으로 침지되는 ebb & flood형의 생물반응기에서 저반부가 비대된 자구 절편체를 배양한 결과, 저반부가 비대된 자구들이 증식하였다. 광은 자구의 증식에 영향을 미치지 않았으나, 명배양에서는 인편엽의 발생률이 높았으며, 저반부가 비대된 자구 증식은 MS 배지에 BA 2.0 mg/L와 IAA 0.3 mg/L가 첨가된 배지에서 양호하였다. 5L airlift 생물반응기에서 저반부가 비대된 자구 절편체로부터 자구비대는 MS 배지에 sucrose 70 g/L가 첨가된 배지에서 액체배양하는 것이 양호하였으며, 16주 배양기간 동안 배양 8주 후에 배지를 교체하는 것이 자구비대에 효과적이었다. 또한 5 L의 생물반응기에 3 L 액체배지에는 절편체를 15 g을 주입하는 것이 자구비대에 적절하였다.
The proteins of the ruminant erythrocyte membranes were analysed by polyacrylamide gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate, and their relations to the slow erythrocyte sedimentation rate(ESR) of the ruminants were investigated by treating the erythrocytes with proteinases such as trypsin, chymotrypsin and pronase, and glycosidases such as neuraminidase and galactosidase. Protein content in the erythrocyte membrane was $2.85{\pm}0.28$ in human, $3.60{\pm}0.41$ in Korean cattle, $3.71{\pm}0.36$ in Holstein, $4.13{\pm}0.83$ in Korean native goat and $3.94{\pm}0.56mg/ml$ in sheep, showing higher in ruminant animals than in human(p<0.01). Although the general protein profiles of the ruminant erythrocyte membranes were almost similar to that of human, all the ruminant erythrocyte membranes showed one additional protein band, called band-Q in the previous report on proteins of bovine erythrocyte membrane, which migrated electrophoretically to the mid position between band-2 and band-3 in human erythrocyte membranes. The glycoprotein profiles of ruminant erythrocyte membranes revealed by periodic acid Schiff(PAS) stain showed a marked difference from that of human. The PAS-1(glycophorin) and PAS-2(sialoglycogrotein) present in human erythrocyte membranes were almost absent from the ruminant animals. Instead, a strong PAS-positive band near the origin of the electrophorograms, which was named as PAS-B in the previous report on proteins of bovine erythrocyte membranes, was shown in the ruminant animals except sheep. In addition, the erythrocyte membranes of Korean native goat and sheep showed a moderate PAS-negative band near the tracking dye of the electrophorograms, which was named as PAS-G in this study. In the erythrocyte treated with the enzymes, the migration of each protein fracture of erythrocyte membranes in response to each enzyme was diverse according to different species or breed of ruminant animals. Among others, band-Q present in ruminants was slightly or moderately decreased by trypsin-, chymotrypsin-, and pronase- treatments of the erythrocytes, but not only in sheep. It was particularly noticeable that PAS-B, a fraction of glycoprotein, present in ruminants except sheep, was better digested by proteinases than by glycosidases, showing remarkable increase(p<0.01) of the ESR in accord with complete digestion(disappearance) of the PAS-B band by pronase, trypsin or chymotrypsin treatment of erythrocytes. In sheep, there was almost no any response to the various enzymes in general protein and glycoprotein profiles of the erythrocyte membranes except PAS-G, which was markedly decreased by pronase treatment of the erythrocytes. Nevertheless, the ESRs were accelerated in erythrocytes treated with pronase, trypsin, chymotrypsin and neuraminidase. Erythrocyte osmotic fragility was increased in erythrocytes treated with only pronase among five enzymes in all the human and ruminant animals used in this study.
The authors has observed the histopathologically and histochemically on the effect of the garlic and garlic oil to the liver and kidney of rats. In order to confirm the histochemical changes of the metabolism of polysaccarides, the periodic acid Schiff reaction was applied. The 30 albino adult male rats weighing about 150 grames from the National Institute of Health were housed individualy and devide into 3 experimental groups: Group C: stock diet group Group B: stock diet-garlic group Group A: stock diet-garlic oil group Group C was fed with stock diet only through out this experimental period, Group B was fed with stock diet supplemented with garlic homogenator to be 1%, and Group A was fed with stock diet supplemented with the garlic oil to 0.05%. The garlic oil used in this experiments was extracted by author. And all rats was fed during 10 weeks. The histopathological and histochemical results were shown in each figure. According to the all results, the following concIusions were drawn. 1) In the garlic oil administrated groups, congestion of the sinusoid was subsided and the liberation of the Kupffer's cells were observed. 2) In garlic administrated groups, fatty metamorphosis in hepatic cells, and slight liberation of Kupffer's cells in sinusoidal walls were observed. Connective tissue proliferation and collagen bundle were observed. 3) The connective tissue and blood vessel wall in portal area Were reacted intensely with PAS stain. The hepatic cells Were reacted intensely with PAS stain in control group and moderately or slightly in garlic and garlic oil administrated group. 4) There were no significant differences in collecting and Henle's loops in each groups, but narrowing of lumen of the distal tubules were observed in garlic oil administrated group. 5) The basement membrane of the tubules and the connective tissues of the vessel wall in Kideny were reacted intensely with PAS stain in each groups. In control and garlic administrated groups. the brush border of the proximal tubules were reacted intensely with PAS stain, but epithelium of the Heine's loop, proximal, distal and collecting tubules were reacted moderately. In garlic oil administrated-group, there were tendency of decreasing of PAS stain in each tubules.
BACKGROUND/OBSECTIVE: Airway inflammation by eosinophils, neutrophils and alveolar macrophages is a characteristic feature of asthma that leads to pathological subepithelial thickening and remodeling. Our previous study showed that oxidative stress in airways resulted in eosinophilia and epithelial apoptosis. The current study investigated whether glutathione-containing dry yeast extract (dry-YE) ameliorated eosinophilia, goblet cell hyperplasia and mucus overproduction. MATERIALS/METHOD: This study employed $2{\mu}g$/mL lipopolysaccharide (LPS)- or 20 ng/mL eotaxin-1-exposed human bronchial epithelial cells and ovalbumin (OVA)-challenged mice. Dry-YE employed in this study contained a significant amount of glutathione (140 mg in 100 g dry yeast). RESULTS: Human bronchial epithelial cell eotaxin-1 and mucin 5AC (MUC5AC) were markedly induced by the endotoxin LPS, which was dose-dependently attenuated by nontoxic dry-YE at 10-50 ${\mu}g$/mL. Moreover, dry-YE inhibited the MUC5AC induction enhanced by eotaxin-1, indicating that eotaxin-1-mediated eosinophilia may prompt the MUC5AC induction. Oral supplementation with 10-100 mg/kg dry-YE inhibited inflammatory cell accumulation in airway subepithelial regions with a reduction of lung tissue level of intracellular adhesion molecule-1. In addition, ${\geq}50$ mg/kg dry-YE diminished the lung tissue levels of eotaxin-1, eosinophil major basic protein and MUC5AC in OVA-exposed mice. Alcian blue/periodic acid schiff staining revealed that the dry-YE supplementation inhibited goblet cell hyperplasia and mucus overproduction in the trachea and bronchiolar airways of OVA-challenged mice. CONCLUSIONS: Oxidative stress may be involved in the induction of eotaxin-1 and MUC5AC by endotoxin episode and OVA challenge. Dry-YE effectively ameliorated oxidative stress-responsive epithelial eosinophilia and mucus-secreting goblet cell hyperplasia in cellular and murine models of asthma.
The proteins of the bovine erythrocyte membrane were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate, and their relations to the slow sedimentation rate of bovine erythrocytes were investigated by treating the erythrocytes with trypsin. The erythrocyte sedimentation rates of bovine erythrocytes from Holstein and Korean native cattle were very slow compared with the human one (1/7 as slow as the human one) as reported previously. However, when human and Holstein erythrocytes were treated with trypsin (0.2 and 0.5 mg/ml) for 1 hour at ${37^{\circ}C}$, their sedimentation rates were markedly accelerated while the sedimentation rate of Korean native cattle's erythrocytes were not affected. Although the general protein profiles of the bovine erythrocyte membranes were almost similar to that of human, bovine erythrocyte membranes showed one additional protein band, called band Q in this study, which migrated electrophoretically to the mid-position between band 2 and band 3 in human erythrocyte membranes. Treatment of Holstein and human erythrocytes with trypsin caused a decrease or disapperance of the band Q from the erythrocyte membrane. Although the band Q in Korean native cattle's erythroyte membrane was decreased by trypsin treatment of the erythrocytes, the magnitude of the decrement was not so pronounced as in the case of human and Holstein erythrocytes. The glycoprotein profiles of the bovine erythrocyte membranes revealed by periodic acid-Schiff stain showed a marked difference from that of human. The PAS-1 (glycophorin) and PAS-2 (sialoglycoprotein) present in human erythrocyte membrane were almost absent from the bovine erythrocyte membranes. Instead, the bovine erythrocyte membranes showed a strong PAS-positive band near the origin of the electrophorograms, which is named as PAS-B in this study. The PAS-B band was disappered completely by the trypsin treatment of Holstein erythrocytes whereas the PAS-B band in Korean native cattle's erythrocyte membrane still remained after the trypsin treatment. The trypsin treatment of Korean native cattle's erythrocytes, however, led to the appearance of small molecular weight peptides, indicating that the high molecular weight glycoproteins were degraded by trypsin as in human and Holstein ones. These results suggest that the slow sedimentation rate of bovine erythrocytes is due in part to the presence of band Q protein fraction and PAS-B glycoprotein in the bovine erythrocytes.
The protein of the bovine, horse and dog erythrocyte membrane were analyzed by polyacrylamide gel eletrophoresis in sodium dodecyl sulfate and their relation to the sedimentation rate of animal erythrocytes were investigated by treating the erythrocytes with proteinases such as trypsin and chymotrypsin. Protein content in erythrocyte membrane was in human, in Jindo dog, in cattle and in horse, showing similar in among. The erythrocyte sedimentation rates bovine erythrocytes from Hostein and Korean native cattle were very slow compared with the human one(1/7 as slow as the human one) as reported previously. Although the general protein profiles of the bovine erythrocyte membranes were almost similar to that of human, bovine erythrocyte membranes showed one additional protein band, called band Q in this study, which migrated electrophoretically to the mid-position between band 2 and band 3 in human erythrocyte membranes. The erythrocyte sedimentation of race horse were very fast compared with the human one are reported previously. Although the general protein profiles of the race horse erythrocyte membranes were almost similar to that of human, band 3 content was showing higher in race horse(34.7%) than in human(25.3%). The general protein profile of the Jindo dog erythrocyte membrane was almost similar to the human patterns, Jindo dog erythrocyte membranes showed one absent protein band. It was band 7. The glycoprotein profiles of the bovine erythrocyte membranes revealed by periodic acid-Schiff(PAS) stain showed a marked difference from that of human. The PAS-1(glycophorin) and PAS-2(sialoglycoprotein) present in human erythrocyte membrane were almost absent from the bovine erythrocyte membranes showed a strong PAS-positive band near the origin of the electraphorograms, which is named as PAS-B in this study. The PAS-1 and PAS-2 present in human erythrocyte membrane were almost absent from race horse erythrocyte membranes, but PAS-2 was more in only race horse from that of human. The PAS-1 and PAS-2 were absolutely absent from the Jindo dog erythrocyte membrane. These results suggest the slow sedimentation rate of bovine erythrocytes is due in part to the presence of band Q protein fraction and PAS-B glycoprotein in the bovine erythrocytes, and that the fast sedimentation rate of race horse erythrocyte is due in part to the presence of more band 3 protein fraction and PAS-E glycoproteins in the race horse erythrocytes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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