토종닭 소장으로부터 가축 소화기 병원성 유해세균의 분리를 위하여 무작위 선별법과 중층-도말법을 사용하여 총130주의 유산균을 1차 분리하였다. 1차 분리한 130주를 paper disc법을 사용하여 최종적으로 살모넬라 균, 포도상구균, 대장균에 대하여 저해능이 우수한 7주를 분리하였다. 분리 균주의 동정을 위하여 1차로 API CHL kit를 사용하였고, 동정의 정확성을 높이기 위하여 2차로 16S rRNA sequencing 방법을 사용하였다. 그 결과 BD14 균주는 Pediococcus pentosaceus로 동정되었으며 나머지 6주는 Lactobacillus sp.로 동정되어 모두 안전성 있는 유산균임을 확인하였다. 여러 병원균에 가장 항균력이 큰 유산균은 L. pentosus K34이었으며, 이 유산균은 염산과 담즙산에 대한 내성에서도 가장 우수한 균주로 나타났다. 10종의 항생제에 대한 감수성을 조사한 결과 ciprofloxacin에 대하여 모든 균주가 내성을 보였고, BL 균주를 제외하고 모든 균주가 colistin, streptomycin에 대하여 내성을 보였다. 또한 BD14, BD16, K34 균주가 gentamicin에 대한 내성을 보였다.
본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 어병세균인 Gram 음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 혹은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20종의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 등에서 분리하여 어류병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, 그리고 Streptococcus sp.에 대해 항균활성이 있는 7종의 균주를 1차 선발을 하였다. pH 및 항생제 내성능을 검토하여 probiotic 균주를 분리하였다. 분리된 후보 균중 창란젓에서 분리된 BK19에서 가장 큰 항균 spectrum과 pH 내성 그리고 항생제에 대한 내성이 확인되어 최종적으로 본 실험의 공시균주로 선발하여 생화학적, 형태학적 특성 및 16S rRNA 분석을 통하여 Lactobacillus sakei BK19로 동정하였다.
Among different types of spoilage, microbial contamination can cause feed decomposition, which results in decreases in feed intake and productivity, infection, and breeding disorder. During the storage time, various microbes have a chance to inoculate with depreciation of feed and to infect the animals. We investigated bacteria that inhabit diverse feed ingredients and complete feed which have been stored for a few months. We isolated and identified 30 genera and 62 species of bacteria. Among these 62 species, 21 species were of non-pathogenic bacteria, 18 species were of pathogenic bacteria, 9 species were of opportunistic pathogens, and 14 species were of unknown bacteria. Pantoea allii and 24 species showed proteolytic enzyme activity. We also confirmed that 6 species including Pseudomonas psychrotolerans showed ${\alpha}$-amylase activity, and 29 species including Burkholderia vietnamiensis showed cellulase activity. Microbacterium testaceum and 3 species showed resistance to Ampicillin, Kanamycin, Streptomycin, Gentamicin, Carbenicillin, and Erythromycin ($50{\mu}g/mL$). Using mealworm larvae (Tenebrio molitor L.) as a model for pathogenicity, we confirmed that 8 species including Staphylococcus xylosus had pathogenicity for mealworm larvae. Especially, Enterobacter hormaechei, Staphylococcus xylosus, and Staphylococcus hominis were reported as being pathogenic for humans. This research suggests that hygienic management of animal feed is essential because beneficial and harmful bacteria can inhabit animal feed differently during storage and distribution.
본 배경 : 질염은 항생제를 복용하는 방식으로 치료를 하고 있으며, 이러한 항생제의 지속적인 치료는 내성을 유발할 수 있다. 연구 방법 : Lactic acid bacteria 2종에 에센셜 오일을 이용한 항균 활성을 보고자 한다. SE(Grapefruit Seed Extract), eucalyptus, tea tree, clove bud oil, cinnamon oil, lemongrass oil, thyme oil, ginger oil을 일정 비율로 넣어 배양 후, 병원성 미생물- E. coli, C. albicans와 Lactic acid bacteria은 균주에 맞는 배지를 사용하여 균 수를 측정하였다. 결과 : Essential oil 7종과 GSE가 병원성 미생물에 억제 효과가 있으며, 병원성균(E. coli, C. albicans)에 대한 Grapefruit seed extract(GSE)의 억제농도를 확인하였다, 병원성균은 억제하고 Lactic acid bacteria는 억제하지 않는 배합비도 확인하였다(GSE 농도가 200ppm에서 Eucalyptus globulus(EG) oil 50㎕와 Melaleuca alternifolia oil(Tea tree oil, TTO) 50㎕(pH 5.0, 5.5, 6.0)). 결론 : 본 실험에서 Essential oil은 다양한 항균 활성 가지고 있어 항생제 대안으로도 생각할 수 있으며, 장기 항생제 치료환자에 대한 보조 항균제로서도 유용할 것으로 생각된다.
This study was attempted to see more clear relationships among the enterobacteria, especially between the intestinal normal flora and pathogenic bacteria. It has been known that some intestinal normal flora produce the bactrial metabolites that are harmful to other enteric bacteria. One of the metabolites is known as colicin, the protein fraction, which possesses certain degree of inhibitory effect against other bacterial growth fraction, whih possesses certain degree of inhibitory effect against other bacterial growth. As a preliminary study for a colicin purification, the antagonistic effect of E, coli to groups of Salmonella and Shigella has been studied by means of in vitro quantitative culture method. 1. E.coli showed definite inhibitory effects aganist both Salmonella and Shigella groups in the mixture of two organisms. 2. The inhibitory effects of E.coli in the E.coli-Salmonella and the E.coli-Shigella mixture occurred from 4 hours incubation following the inoculation. 3. Even the complete inhibition of pathogenic enteric bacterial growth was noticed in the E.coli-Salmonella mixture at overnight incubation. 4. Among the diluted mixtures, 1:100, 1:1,000, and 1:10,000, survival rate of pathogenic enteric bacteria in the mixtures with E.coli showed least affected at the 1:1,000 dilution. 5. It was found that the antagonistic effect aganist groups of Salmonella-shigella was depending upon the groups of the genera.
Seeds and leaves of Raphanus raphanistrum subsp. sativus (radish) are known to contain "raphanin," which has the potential to inhibit pathogenesis associated with foodborne pathogenic bacteria and fungi. In this study, ethanol extracts from R. raphanistrum subsp. sativus (radish) powder was evaluated for antimicrobial action against 6 different foodborne pathogenic bacteria. The current study demonstrated the potential of R. raphanistrum subsp. sativus (radish) in inhibiting the growth of Salmonella enteritidis 110, Cronobacter sakazakii KCTC 2949, Bacillus cereus ATCC 10876, and Staphylococcus aureus ATCC 6538. However, these antimicrobial action were not observed against Listeria monocytogenes ATCC 51776 and Escherichia coli 23716. Hence, this study indicates that R. raphanistrum subsp. sativus (radish) could be used as a natural biopreservative with antimicrobial effects for improving food safety, and as a functional food in the commercial food industry.
손바닥선인장(Opuntia ficus-indica var. saboten Makino) 줄기 가수분해 분획물(MBT-01108)의 어병세균에 대한 in vitro 항균활성을 조사하였다. 실험에 사용한 어병세균은 Edwardsiella tarda, Listonella anguillarum, Vibrio sp., Lactococcus garvieae, L. raffinose, Streptococcus parauberis, S. iniae 등 총 18종이었다. 또한, oxytetracycline을 포함한 시판 항균제 disc를 MBT-01108의 항균활성에 대한 양성 대조군으로 하여 항균활성을 비교 조사하였다. 그 결과, MBT-01108은 실험에 사용한 어병세균들에 대하여 우수한 항균활성을 나타내었다.
The gamma-radiation sensitivity of three kinds of pathogenic bacteria to fish was investigated. $D_{10}$ values (irradiation dose required to inactivate 90% of the population) of Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum and Streptococcus faecalis were 0.08, 0.10 and 0.44 kGy, respectively. The inactivation factors were 4.50 - 24.30 and 6.75 - 36.45 at radiation doses of 2 and 3 kGy. Raw moist pellets were inoculated with Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum or Streptococcus faecalis. Inoculated feed samples were packaged in air and irradiated at 5 kGy. This dose was effective in controlling the inoculated and general bacteria in fish feed. We consider gamma-radiation to be an effective method to sterilize pathogenic bacteria in fish feed.
Probiotics are very closely related to gut microbiome and recognized as beneficial microorganisms for our health. They have various biological effects such as inhibition of pathogenic bacteria, activation of beneficial bacteria, prevention of diarrhea and constipation, enhanced immune activity etc. Prebiotics, non-digestible carbohydrates such as galactooligosaccharide and fructooligosaccharide, are utilized by beneficial gut bacteria such as bifidobacteria and lactobacilli, resulting in production of short chain fatty acids which inhibit pathogenic bacteria in the gut and function for human health. Synbiotics are introduced for synergistic effects when probiotics are combined with prebiotics and now commercially available. At the moment many functional ingredients are developed and commercialized. Probiotics, prebiotics, and synbiotics might be hot items in the functional food market and the values will increase according to the results of human gut microbiome researches. To meet the situation, systematic and scientific studies as well as marketing effects should be accompanied.
We isolated activnmycetes LAM-98-80 as strain producing an effective antibiotic for cephalosporin re-sistant pathogenic PSeudomonas sp. and identified as Streptomyces sp. LAM-98-80 from cultural and phyisological characteristics. We investigated the optimal culture conditions for producation of an anti-biotic becoming effective for cephalsporin-resistant pathogenic Pseudomonas sp. It was found that 1.5% soluble starch and 1.0% yeast extract were good as carbon and nitrogen source respectively. The pro-duction of antibiotic was also activated by 0.04% Mn2+ as 80% degree. The optimum initial pH on pro-ductio of antibiotic was pH 7.0. The culture condition for the maximal productivity of the antibiotic was at 3$0^{\circ}C$ for 5 days. The cephalosporin-resistant pathogenic Pseudomonas sp. as test bacteria was rev-ealed to resist antibiotic of cepha families but revealed to not resist those of $\beta$-lactam families ampicil-lin and amoxicillin. Parital purified antibiotic was stable for the pH from 3 to 9 and was also stable when treated at 70 $^{\circ}C$ for 1 hour, This antbiotic was effective against all gram positive and negative bac-teria but was not effective against molds and yeasts.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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