To investigate the prevalence of Toxoplasma gondii in pork on the market in Korea, an in-house enzyme-linked immunosorbent assay for tissue fluid (CAU-tf-ELISA) was developed using a soluble extract of T. gondii RH strain tachyzoites. As the standard positive controls, the piglets were experimentally infected with T. gondii: Group A (1,000 cysts-containing bradyzoites), Group B (500 cysts-containing bradyzoites) and Group C ($1.0{\times}10^3$ or $1.0{\times}10^4$ tachyzoites). The CAU-tf-ELISA demonstrated infection intensity-dependent positivity toward tissue fluids with average cut-off value 0.15: 100% for Group A, 93.8% for Group B and 40.6% for Group C. When tissue-specific cut-off values 0.066-0.199 were applied, CAU-tf-ELISA showed 96.7% sensitivity, 100% specificity, 100% positive and 90.0% negative predictive values. When compared with the same tissue fluids, performance of CAU-tf-ELISA was better than that of a commercial ELISA kit. Of the 583 Korea domestic pork samples tested, anti-T. gondii antibodies were detected from 9.1% of whole samples and 37.9% from skirt meat highest among pork parts. In the 386 imported frozen pork samples, 1.8% (skirt meat and shoulder blade) were positive for anti-T. gondii antibodies. In Korea, prevalence of anti-T. gondii antibodies in the pork on retail markets appeared high, suggesting that regulations on pig farming and facilities are necessary to supply safe pork on the tables.
The soybean cyst nematode, Heterodera glycines, is a major plant-parasitic nematode that has caused important economic losses to Korea's soybean production. Four species of cyst nematodes, H. schachtii, H. glycines, H. trifolii, and H. sojae, all belong to schachtii group are coexist in field soil in Korea. The rapid identification of the nematode is crucial for preventing crop damage and in decision making for controlling this nematode. This study aimed to develop a species-specific primer set for quantitative PCR (qPCR) assay of H. glycines. The specific primer set (HGF1 and HGR1) for H. glycines was designed based on the cytochrome c oxidase subunit I (COI) sequence of mitochondrial DNA. After optimization, it is possible to identify the H. glycines using a qPCR assay with DNA extracted from a single cyst and single second-stage juvenile (J2). The specificity was confirmed by the absence of SYBR fluorescent signals of three other Heterodera species. A serial dilution of DNA extracted from a single cyst was obtained for the sensitivity test. The result showed that the standard curve of the test had a highly significant linearity between DNA concentration and Ct value (R2 = 0.996, slope = -3.49) and that the detection limit concentration of DNA of the primer set was 10 pg of DNA per reaction. Our findings suggested that H. glycines could be distinguished from H. sojae and other Heterodera species when a qPCR assay is used with a specific primer set.
Chikungunya fever is an arboviral disease caused by the Chikungunya virus (CHIKV). The disease has similar clinical manifestations with other acute febrile illnesses which complicates differential diagnosis in low-resource settings. We aimed to develop a rapid test for CHIKV detection based on the nucleic acid lateral flow immunoassay technology. The system consists of a primer set that recognizes the E1 region of the CHIKV genome and test strips in an enclosed cassette which are used to detect amplicons labeled with FITC/biotin. Amplification of the viral genome was done using open-source PCR, a low-cost open-source thermal cycler. Assay performance was evaluated using a panel of RNA isolated from patients' blood with confirmed CHIKV (n = 8) and dengue virus (n = 20) infection. The open-source PCR-NALFIA platform had a limit of detection of 10 RNA copies/ml. The assay had a sensitivity and specificity of 100% (95% CI: 67.56% - 100%) and 100% (95% CI: 83.89% - 100%), respectively, compared to reference standards of any positive virus culture on C6/36 cell lines and/or qRT-PCR. Further evaluation of its performance using a larger sample size may provide important data to extend its usefulness, especially its utilization in the peripheral healthcare facilities with scarce resources and outbreak situations.
조직기생충증인 스파르가눔증은 우리 나라를 비롯하여 동양 여러 나라에서 드물지 않게 발생하고 있으므로 보조진단법으로서 쳔청학적 진단이 필요하다. 그러나, 현재 진단에 사용하는 항원인 스파르가눔의 생리식염수 추출액은 그 단백질 구성이 복잡하고, 낭미충중, 포충증, 폐흡충증 등과 혈청학적 교차반응을 일으키는 경우가 있어 개선의 여지가 많다. 이 실험은 스파르가눔 생리 식염수 추출액의 구성단백질 중 항원성이 높고, 교차반응이 적은 구성단백질 분회만을 단세포군항체를 이용하여 친화성 크로마토그래피로 분리하고 그 항원성을 평가하고자 하였다. 먼저 Sephacryl S-300 Superane을 통과시켜 스파르가눔 생리 식염수 추출액을 5 분획으로 나눈 결과, 분자량이 90kDa 이상으로 구성된 제1, 2 분획은 항원성은 높았으나 교차반응을 많이 일으키고 있었다. 제 3분획 의 주요 구성성분은 스파르가눔증 환자 혈청과의 SDS-PAGE/EITB를 통해 가장 민감한 반응을 보였던 36, 29 kDa 단백질이었다. 이어 스파르가눔 추출액으로 면역시킨 BALB/C mice 비장세포에서 기린한 단세포군항체 중 36,29 kDa에 반응하는 단세포군항체를 리간드로 친화성 크로마토그래피를 실시하여 36, 29 kDa 단백질을 순수하게 분리하였다. 이 두 단백질은 같은 항원결정 기를 지니고 있는 것으로 판단하였다. 순수분리한 항원의 항원성을 스 파르가눔 감염자 28명과 기타 질환자 및 건강 대조군 99명의 혈청으로 평가한 결과, 이 항원은 조항원(스파르가눔 추출액)에 비해 민감도는 같았으나(96.4%) 특이도는 86.8%에서 96.9%로 개선되었다.
일반적으로 겨우살이라고 하는 공중기생식물들에 대한 연구는 주로 생태학적 측면과 농업적 측면에서 이루어져 왔다. 그러나 최근 약용자원 측면에서 관심이 높아져 우리나라에 분포하고 있는 겨우살이에 관한 연구도 활발해지고 있다. 본 연구는 앞으로 겨우살이를 산업적으로 이용하기 위한 연구가 진행될 것에 대비하여 한국에 분포하는 겨우살이를 중심으로 지금까지의 분류학 및 생태학 분야의 연구내용을 고찰하고자 수행했다. 겨우살이는 교목이나 관목의 가지에 기생하는 단향목에 속하는 현화식물로서 우리나라에는 단향과의 겨우살이 [Viscum coloratum (Komarov) Nakai f. coloratum], 붉은겨우살이[Viscum coloratum (Komarov) Nakai f. rubroaurantiacum (Makino) Kitagawa], 동백나무겨우살이[Korthalsella japonica (Thunb.) Engl.] 등 3분류군과 꼬리겨우살이과의 꼬리겨우살이(Loranthus tanakae Franch. et Sav.)와 참나무겨우살이[Taxillus yadoriki (Sieb. ex Maxim.) Danser] 등 2분류군을 합하여 2과 4속 5분류군이 분포하고 있다. 그런데 이 종들에 대한 분류학적 연구가 아직까지는 미진하였으며, 분포범위 또한 광범위하기 때문에 종 내의 형태변이에 대한 관찰도 추가적으로 이루어져야할 것이다. 겨우살이의 분포는 숙주 특이성과 숙주간의 거리, 환경조건, 그리고 숙주식물의 형태, 전파 매개자 섭식특성과 서식지 선택 특성에 따라 결정되었다.
유구낭미충 항원에 대한 단세포군항체를 제조하여 그 특성을 분석하고, 이를 효소면역억제측정법 (ELISA-inhibition test)에 응용함으로써 통상적인 효소면역측정법(ELISA)의 특이도를 더욱 높이고자 하였다. 유구낭미충의 두절항원으로 면역한 BALB/c 마우스의 비장세포와 형질세포종세포를 융합하여 림프잡종세포를 만들고, 이 중에서 유구낭미충 항원에 대한 특이 단세포군 항체를 생성하는 4개의 림프잡종세포군을 선택하였다. EITB상 Cya-1 단세포군항체는 25.5 kDa, Cya-7은 28 kDa, Cya-28은 87.5 kDa, Cya-31은 12.5 kDa 항원대에 각각 반응하는 것을 알 수 있었다. 간접면역 형광항체법으로 Cya-1는 칼슘소체에, Cya-7은 실질조직에, Cya- 28과 Cya-31은 충체 표피에 주된 반응을 나타내고 있었다. 유구낭미충 항원을 사용한 효소면 역측정법으로는 유구낭미충 감염자 28명의 혈청 중 23명 (82. l%)이 양성 반응을 보였으며 폐흡충 감염자 31명 중 6명(19.4%), 스파르가눔 감염자 9명 중 1명(11. l%)이 교차 반응을 보였다 반면, 특이 단세포군항체 Cya-7를 이용한 효소면역 억제측정법으로는 유구낭미충 감염자는 28명 중 19명 (67.9%)이 양성반응을 보였고, 다른 기생충 감염자 혈청과의 교차 반응은 관찰되지 않았다.
Amoebophrya는 숙주생물에 기생하여 이들을 단기간에 사멸시키는 내부기생성 진핵와편모류로서 숙주 특이성과 숙주 생물의 개체군 동태에 미치는 막대한 영향으로 인해 오래 전부터 유해적조생물에 대한 생물학적 제어 가능성이 제기되었다. 그 동안 숙주 - 기생생물 시스템 배양이 어려워 수 십 년간 연구가 답보상태에 빠졌으나, 최근 소수 종의 숙주 - 기생생물 시스템 배양에 성공하여 새로운 전기를 맞았다. 본 연구는 Amoebophrya가 숙주생물의 개체군 동태에 미치는 영향을 탐색하기 위한 예비연구로서 진해만에서 2년 동안 숙주 와편모류에 기생하는 Amoebophrya spp.의 출현 시기를 관찰하고 Heterocapsa triquetra의 숙주 - 기생생물 시스템 배양을 통하여 이들의 숙주특이성을 평가하였다. 연구기간 동안 9종의 와편모류, Akashiwo sanguinea, Ceratium fusus, Dinophysis acuminata, Heterocapsa triquetra, Oblea sp., Prorocentrum minimum, P. triestinum, Scrippsiella spinifera, S. trochoidea에서 내부기생 Amoebophrya에 의한 감염을 관찰하였으며, 이 중 무각 와편모류 A. sanguinea와 유각 와편모류 H. triquetra 2종에 대한 숙주 - 기생생물 시스템의 실내 배양체 확립에 성공하였다. 연구해역이나 이전에 Amoebophrya가 관찰 또는 보고된 6종의 숙주생물에 H. triquetra에 기생하는 Amoebophrya를 교차 접종하여 이들이 다른 와편모류보다 자기 숙주에 매우 큰 선호도를 가짐을 확인하였다. 앞으로도 우리나라 주변 해역에 출현하는 기생성 와편모류 Amoebophrya를 탐색하여 다양한 숙주 - 기생생물 시스템 배양체를 지속적으로 확보할 필요가 있다. 이러한 기생성 와편모류 Amoebophrya에 대한 생리 생태 특성 연구를 통하여 해양생태계 내에서 그들의 역할을 이해하고 생물학적으로 적조를 제어하는 데에 크게 도움을 얻을 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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