Complementary DNAs (cDNAs) to the coat protein gene of an ordinary Korean strain of potato virus Y (PVY-OK) isolated from potato (cv. Superior) were synthesized and cloned into a plasmid pUC119 and sequenced. The RNA of the virus propagated in tobacco (Nicotinaa sylvestris) was extracted by the method of phenol extraction. The first strand of cDNAs to the coat protein penomic RNA of the virus was made by Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase. The cDNA were synthesized and amplified by the method of polymerase chain reaction (PCR) using a pair of oligonucleotide primers. PVYCP3P and PVYCP3M. The size of cDNAs inserted in pUC119 plasmid was estimated as about 840 bp upon agarose gel electrophoresis. Double stranded cDNAs were transformed into the competent cell of E. coli JM109. Sequence analysis of cDNAs was conducted by the dideoxynucleotide chain termination method. Homology of cDNAs of the PVY-OK coat protein genomic RNA with those of PVY-O (Japan), PVY-T (Japan), PVY-TH (Japan), PVYN (The Netherlands),and PVYY (France) was represented as 97.3%, 88.9%, 89.3%, 89.6% and 98.5%, respectively. Homology at the amino acid level turned out to the be 97.4%, 92.5%, 92.9%, 92.9% and 98.5%, respectively.
The vein necrotic strain of Potato Virus Y (PVY - VN) and black shank (Phyto-phthora parasitica var. nicotianae) are the two major diseases causing severe damages especially in burley tobacco (N. tabacum L.) area in Korea. A new tobacco variety, KB 111, resistant to PVY and black shank disease, was developed by Korea Ginseng & Tobacco Research Institute in 1997. It is a male sterile(MS) F$_1$ hybrid of the cross between MS TC 613 and KB 108. KB 111 was compared to Burley 21 on the agronomic characteristics and disease resistances in performance tests: It possessed upright growth habit and flowered two days later than Burley 21. It was resistant to both PVY and black shank and yielded about 3% more cured leaf than Burley 21, but other characteristics are very simiar to those of Burley 21. The chemical composition and physical properties of the cured leaf of KB 111 were as much acceptable as those of Burley 21 while it produced average yield of good quality leaf and appeared to resistant to PVY and black shank disease on regional farm test in 1998.
A total of 163 virus infected pepper plants(Capsicum annuum L.) collected from various pepper growing regions in Korea were investigated on the presence of tobacco mosaic virus (TMV), cucumber mosaic virus (CMV), potato virus X(PVX), potato virus Y(PVY) and alfalfa mosaic virus (AMV) by serological methods. Van Slogteren's microprecipitin test was applied for the testing of TMV, PVX and PVY from infected plants, and Ouchterlony agar double diffusion test was used for CMV and AMV. Results obtained are as follows: 1. TMV, CMV, PVX, PVY and AMV were found to occur on the pepper plants growing in Korea. 2. The prevalence of each of these viruses among the 163 pepper plants investigated was in the order of CMV: 93 plants(57.0%)>TMV: 91 plants (55.8%)>AMV: 58 plants (35.6%)>PVY: 40 plants (24.5%)> PVX:6 plants(3.7%). 3. Among the 163 plants investigated, 72 plants (44%) showed infection with one kind of virus and 91 plants (56%) showed mixed infection with more than two different viruses. In general, heavier damage of the plants was observed from mixed infection. 4. The results of serological identification of pepper viruses coincided with those results obtained by sap inoculation experiment conducted at the Horticultural Experiment Station along with present investigation. Thus the serological techniques applied in this experiment proved to be very reliable for the identification of TMV, CMV, PVX, PVY and AMV from pepper plants infected with these viruses.
담배 모자이크 바이러스(TMV)와 감자 바이러스 Y(PVY) 등 식물바이러스병은 잎담배 생산에 심한 경제적 손실을 초래하고 있다. 바이러스병 방제를 위한 여러 가지 경종적 방법은 충분한-방제 효과를 얻지 못하는 경우가 많아 바이러스의 방제에는 우수한 저항성 품종의 사용이 가장 바람직한 것으로 알려져 있다. 그러나 기존의 육종 방법이 저항성 품종 개발에 항상 바람직한 것은 아닌데 그 이유는 저항성 유전자원이 없는 경우가 많고 또한 육종을 통해 유전자원의 열등한 특성이 도입될 수 있기 때문이다. 따라서 본 연구실에서는 TMV와 PVY의 여러 가지 형태의 외피단백질(CP) (비전사부분 포함 또는 제거, 비 전사부분 등) 및 복제유전자(Nlb) (3' 및 5' 결손 유무, 돌연변이)를 상용 담배 품종인 NC 82와 Burley 21에 형질전환시켜 바이러스 저항성 개발을 시도하였다. 각각의 유전자 cDNA를 1-2개의 35S promotor를 가진 식물발현벡타에 클로닝한 후 Agrobacteriupn (upnefaciens LBA 4404를 이용하여 식물의 잎조직에 도입시킨 후 kanamycin 함유 MS 배지에서 식물체를 재닥화하였다. 재분화 식물체는 TMV와 PVY에 대한 저항성 검정을 하였다. 그 결과 TMV에 저항성인 TMV CP 형질전환 식물체와 8 가지 Nlb 형질전환 식물체 계통 중에 6 계통의 저항성 형질전환 식물체를 획득하였다. 여기에서는 TMV와 PVY의 접종시험을 통하여 각각의 바이러스에 대한 형질전환 담배의 계통별 저항성 정도를 조사하고, 저항성 형질전환 식물체에서의 도입 유전자 확인하며, 세대별 저항성의 유전 및 안정성을 살펴보고자 한다. 또한 유망 저항성 형질전환 계통의 식물체 내에서의 바이러스 증식 및 이동과 관련된 저항성 기작, 여러 가지 PVY 계통에 대한 저항성 유무, 수량, 생육 특성 및 주요 화학 성분 함량 등을 발표하고자 한다.-glucose로 구성된 다당류 이었다. 아미노산은 Asp 및 Glu의 산성 아미노산과 Ala, Leu 등의 함량이 높게 나타났으며, 비알칼리 추출물에서 Ser과 Thr의 함량이 높게 나타났다. 다당류 T-AS는 평균 분자량이 2,000 kD와 12kD에서 주 peak를 나타냈으며, 수용성 분획의 평균 분자량은 12kD이고 비수용성 분획은 36~2,000 kD의 평균 분자량 분포를 갖는 것으로 나타났다. IR과 NMR 분석 결과 890 cm-1에서 흡수 peak를 나타내어 $\beta$-(1,3)0glucan과 $\beta$-(1,6)-glucan의 구조를 갖는 다당류로 확인 되었다. T-AS 분획은 C:H:O:N의 함량비가 38.9:5.7:49.6:1.84%이며, 이 물질의 융점은 163 $^{\circ}C$로 연한 갈색을 나타낸다. 분리된 GLG의 항암활성 기전 규명을 위해, in vivo 항암실험, 항보체 활성능, 항체 생성능, serum protein 분비능, 대식세포의 탐식능과 활성능 및 세포간 물질 분비 등의 상관관계를 조사하였다. 다당류 GLG 분획물들 가운데 항보체의 활성이 높았던 분획은 sarcome 180에 대한 항암 활성이 높게 나타났다. 다당류 T-AS의 보체 활성화 기작은 classical과 alternative complement pathway의 양 경로를 통해 활성화 되었다. T-AS 분획은 mouse내의 특정 혈청단백을 증가시켰으며, 항체 생성능의 증가가 관찰되어 effect T 세포의 활성화가 나타나고 있음을 알 수 있었다. T-AS는 생체내 투여시에 대식세포의 탐식능이 증진되었으며, 대식세포 기능 저해제에 의한 대식세포의 기능 저해 현상이 회복되었다. 이와 같은 결과들로부터, T-AS의 항암 활성은 활성화된 보체 성분 및 당 수용체들이 존재하는 대식세포의 개입을 시사한다.가능성과
Potato virus Y (PVY) is an important viral disease in burley tobacco in Korea and is mostly transmitted by green peach aphid, Myzus penicae, in nature. Effects of barrier nets on the immigration of the aphid population into tobacco fields and on the control of PVY were investigated in 3 tobacco fields with 1.8 m - height polyethylene (PE) nets on their outer - sides in Iseo - Myeon, Wanju - Kun, Cheonbuk. Immigration of aphids to the tobacco yields started at late April and reached maximum at early June. The immigrating aphid population was apparently blocked by the barrier nets to be reduced by 54-73%. PVY severity was also reduced by the barrier nets. However, the control value was variable, ranging 24-67%, which suggests that effect of the PE net barrier on the prevention of aphid-borne virus might be variable depending on the location and slope of the fields.
Potato virus Y (PVY) and potato leafroll virus (PLRV) are among the most damaging potato viruses and prevalent in most potato growing areas. In this study, cryopreservation was used to eradicate PVY and PLRV using two cryogenic methods. Potato shoot tips proliferated in vitro were cryopreserved through droplet-vitrification and encapsulation-vitrification using plant vitrification solution 2 (PVS2; 30% glycerol + 15% dimethyl sulfoxide + 15.0% ethylene glycol + 13.7% sucrose) and modified PVS2. Both cryogenic procedures produced similar rates of survival and regrowth, which were lower than those from shoot tip culture alone. The health status of plantlets regenerated from shoot tip culture alone and cryopreservation was checked by reverse transcription-polymerase chain reaction. The frequency of virus-free plants regenerated directly from highly proliferating shoot tips reached 42.3% and 48.6% for PVY and PLRV, respectively. In comparison, the frequency of PVY and PLRV eradication after cryopreservation was 91.3~99.7% following shoot-tip culture. The highest cryopreserved shoot tip regeneration rate was observed when shoot tips were 1.0~1.5 mm in length, but virus eradication rates were very similar (96.4~99.7%), regardless of shoot tip size. This efficient cryotherapy protocol developed to eliminate viruses can also be used to prepare potato material for safe long-term preservation and the production of virus-free plants.
PARK, Young Doo;RONIS D.H.;DUYSEN M.E.;CHENG Z.M.;LORENZEN J.H.
식물조직배양학회지
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제24권5호
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pp.313-317
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1997
ND860-2, Norchip, Russet Norkotah, Goldrush 및 Norgueen Russet 등 5개 품종의 감자 잎 조직을 감자 바이러스 Y(PVY)의 외피단백질 (CP) 유전자를 운반하는 Agrobacterium tumefaciens을 이용하여 형질전환시켰다. ND860-2와 Norchip품종과 같은 흰색 감자에서 재분화율과 형질전환율이 높게 나타났다. 형질전환체를 선발한 후 CP의 생성을 western blot으로 확인한 결과 30 kD의 밴드가 나타났다. 온실에서 재배된 형질전환체는 한 개체를 제외하고는 표현형에 있어서는 기존의 품종과 다르지 않았다. 인위적으로 감자 바이러스 Y를 감염시킨 15일 후의 검사결과 control구는 80%의 감염율을 보인 반면 형질전환체들은 38-58%의 감염율을 보였다. 30일 후의 검사 결과는 모든 5품종의 control구에서 100%의 감염을 보였으나 형질전환체는 7개체가 저항성을 보였다. 마지막 85일 후의 검사 결과 4개의 저항개체를 발견하였으며 이 개체들은 현재 계속 연구가 진행 중에 있다.
우리나라 잎담배에 발생하고 있는 바이러스의 종류와 감염상을 조사하기 위하여 전주지방에서 Burley종 (Burley-21) 20개체, 부천연초시험장 포장에시 황색종(Hicks) 20개체를 병징별로 채집하여 혈청학적인 방법에 의해 실시했다. 검정대상 바이러스는 Tobacco mosaic virus(TMV), Cucumber mosaic virus(CMV), Alfalfa mosaic virus (AMV), Potato virus X(PVX) 및 Potato virus Y(PVY)등 5종으로 TMV, AMV, CMV는 한천내확산법으로 PVX, PVY는 미량침강법으로 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 공시이병개체중에서 TMV, CMV, AMV, P X 및 PVY 등 5종의 바이러스가 검출되었다. 2. 조사된 40개체중 각 바이러스의 감염율은 AMV $67.5\%$, CMV $60.0\%$, TMV$47.5\%$PVY$17.5\%$, PVX$10.0\%$의 순이었다. 3. Burley종에서는 TMV감염율이 $15.0\%$로 황색종의 $80.0\%$보다 현저히 낮았다. 4. 조사된 각 개체는 단독감염으로부터 2-4종의 바이러스로 다양하게 혼합감염을 나타냈으며 이 중 단독감염이 $37.5\%$, 혼합감염이 $62.5\%$이었다.
Kim, Jae-Hyun;Park, Yong-Hack;Chung, Youl-Young;Kim, Kwang-Chul;Shin, Seung-Gu;Kuem, Wan-Soo
한국연초학회지
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제31권2호
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pp.69-74
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2009
감자바이러스 Y(PVY)는 국내 황색종 산지에서 잎담배의 생육, 수량 및 품질에 있어서 매우 심한 피해를 일으키는 병으로서 이를 방제하기 위해서는 PVY 저항성 품종의 육성이 시급히 요구된다. KF120은 msKF117과 KF0007-7를 교배하여 육성된 $F_1$ hybrid 품종이다. msKF117은 NC82와 N. Africana를 교배하여 육성하였고, KF0007-7은 KF117과 NC82를 교배하여 육성하였다. KF120의 농경적 특성과 병저항성을 평가하기 위하여 2006 ~ 2007년 동안 생산력 검정시험을 수행한 결과 KF120은 KF109에 비하여 생육특성 및 수량성이 양호하였으며 수확엽수는 2매 정도 많았고 개화기는 2일정도 늦었다. KF120의 건조엽 수량은 KF109에 비하여 5% 정도 증수 되었으며 화학성분 및 물리성은 대등한 수준이었다. KF120은 KF109에 비하여 세균성 마름병과 역병에 대해서는 유사한 저항성을 가지고 있었으며, PVY에 대해서는 높은 저항성을 보였다.
The cDNAs derived from the coat protein (CP) genes of six plant RNA viruses, tobacco mosaic virus-pepper strains (TMV-P) and -ordinary strain (TMV-OM), potato virus Y (PVY), turnip mosaic virus (TuMV), cucumber mosaic virus (CMV) and potato leafroll virus (PLRV), were subcloned into the transcription vector, pSPT18, containing SP6 and T7 promoters. The digoxigenin (DIG)-labeled RNA polymerase after linearlization of the cloned pSPTs with XbaI or SacI, and were tested for their sensitivities for the detection of the six viruses. In slot-blot hybridization, dilution end points for the detection of TMV-P and TMV-OM were 10-4, while those of PVY, TuMV and CMV were 10-3. PLRV was detected at the dilution of 10-2. When each RNA probe was applied for the detection of the viruses in the preparations from the leaf disks (8 mm in diameter, and 12 to 15 mg in weight) of infected natural host plants, TMV-P, TMV-OM and TuMV could be detected from one disk, while PVY from 1 or 2 disks. CMV was detected in the preparation from two disks, and PLRV from three disks. With DIG-labeled RNA probe, PVY was detected at 5 days after inoculation, but with ELISA the virus was detected at 8 days after inoculation to tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc) plants on which symptoms appeared at 9 days after inoculation. No difference was observed in cross reaction between the RNA probes for the detection of TMV-P and TMV-OM.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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