우리나라 버섯 생산량의 약 80%를 차지하는 느타리버섯(Pleurotus ostreatus)의 유통 중에 발생하는 갈변을 방지하기 위한 기초 조사로 갈변원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리 정제하여 그 특성을 조사하였다. 느타리버섯으로부터 3개의 PPO isoforms(PO-I, PO-II-1, PO-II-2)을 분리하였으며, gel-filteration을 이용한 분자량 확인 결과 PO-II-1은 void volume(70 kDa), PO-I과 PO-II-2는 include volume(6 kDa)에서 분리되는 것으로 보아 PO-II-1은 70 kDa 이상, PO-I과 PO-II-2는 6 kDa 이하인 것으로 확인되었다. 분리된 3개의 PPO isoform들을 partially denatured-PAGE 후, activity staining을 이용하여 분석한 결과, 비록 이들 PPO isoforms PO-II-1과 PO-II-2에 다수의 단백질들이 들어있기는 하지만 PPO 활성을 보이는 band가 하나로 나타남으로써 분리된 PPO isoform들이 실제 PPO 활성을 갖고 있는 단백질로 확인되었으며 다른 PPO isoform이 혼합되지 않은 단일 PPO isoform으로 분리되었음을 알 수 있다. Hydrophobic interaction chromatography에서 분리된 isoform PO를 이용하여 특성을 조사한 결과 최적 반응온도와 pH는 일반적인 다른 과채류와는 달리 $50{\sim}55^{\circ}C$, pH 5.5에서 높은 활성을 나타내었으며, 열 안정성 실험에 있어서는 $60^{\circ}C$에서 45분간 가열 처리 시 약 40%의 PPO activity가 남아있는 반면, $80^{\circ}C$에서 30분간 가열 처리 시 PPO가 완전히 불 활성화되었다. 그리고 chlorogenic acid와 pyrogallol에 대하여 높은 기질 특이성을 보였다.
Polyphenol oxidase (PPO) activity in 200×g (cell wall), 4,000×g (plastid), 100,000×g (mitochondrial) and soluble fractions of the perilla leaves was monitored in the upper, middle and lower sections of the plant. In the course of plant growth, PPO activities in plastid and mitochondrial fractions were decreased, while those in cell wall fraction were maintained. During growing process, specific activities and PPO activities of each fraction were decreased, while total phenol content were decreased in middle (middle) and then increased in later stage (lower). Cell wall, plastid, mitochondrial (pellet) and soluble fraction had slightly different pH optima and substrate specificities. Isoenzyme patterns were identical in two bands for PPO activity in different subcellular fractions. Their molecular weights were 37KD and 48KD respectively.
Seven different strains of Beauveria bassiana were used in a bioassay on Pieris rapae larvae. The results showed that an B. bassiana strain showed relatively high pathogenicity towards P. rapae larvae. The adjusted mortality rate was 92.86 %, and the infection rate was 85.71 % in 10 days post inoculation. Molecular identification was performed to identify the unknown strain. Internal Transcribed Spacer sequence analysis showed that the polymerase chain reaction amplicon length of the unknown strain of Beauveria sp. was 573 bp, and sequence similarity to the known B. bassiana sequences in the NCBI database was 99 %. The B. bassiana strain was named Bb01. The changes of proteins and PPO of P. rapae larvae infected by B. bassiana Bb01 strain at different times was determined. The activity of PPO increased in 1-6 d and decreased in 7 d again after inoculation. The B. bassiana invaded into the insect body affected the balance of the proteins and PPO.
한국의 민간요법에서 감자와 당근의 주스 혼합액이 위궤양의 치료에 사용되어져 왔다는 사실을 근거로 전보에서 당근이 감자의 갈변에 어떤 영향을 미치는지를 알아보았다. 본 논문에서는 감자의 갈변을 저해하는 감자속의 어떤 물질의 효과를 배제시키기 위하여 감자에서 polyphenolics만을 추출하여 여기에 효소를 가한 뒤 당근을 첨가하여 갈변화를 측정하였고 감자의 PPO활성에 베타-카로틴이 어떤 영향을 미치는지를 살펴 보았다. 그 결과 시료로 사용한 총 polyphenolics의 함량은 1. 854mg/g D.W.였고 PPO활성도는 100unit이였다. 감자에서 추출한 polyphenolics의 delta 'L'값은 급격히 감소하였으나 당근주스의 혼합액은 조금씩 감소하였다. Polyphenolics와 합성 베타-카로틴을 섞은 용액은 반응 50분 후에 약간의 감소를 보였다. 동시에 감자에서 추출한 polyphenolics를 당관에서 추출한 카로틴 혹은 베타-카로틴을 가한 후 갈변차를 알아본 결과 당근에서 추출한 카로틴 용액을 섞은 것은 delta 'L'값이 증가하였고 1 시간 후 합성 베타-카로틴과 비슷하게 감소하였다. 한편 감자에서 추출한 PPO의 갈변화에 기질과 효소의 농도가 어떤 영향을 미치는지를 알아본 결과 기질농도 10%일때 최적효소의 농도는 10%였으며(대조군의 농도비는 완충액 2.6 : 기질 0.3 : 효소액 0.1이었음). 효소농도 3.3%일때 최적 기질의 농도는 13.3%이었고 베타-카로틴의 농도는 PPO활성도에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
저온 또는 건조 처리에 따른 토마토 유묘의 생육과 부위별 항산화효소의 반응 양상을 분석한 결과, 토마토 유묘의 생체중은 처리 후 12일째에 대조구에 비해 각각 69.5% 와 50.6% 감소하였다. SOD와 POD의 활성은 대조구에 비해 저온 또는 건조 처리에서 높은 활성을 보였는데, 저온 처리시에는 뿌리에서 더 높은 활성을 보였고 건조 처리에서는 잎과 줄기에서 높은 활성을 보였다. 이러한 결과는 동위효소의 발현양상에서도 일치하였다. GR의 활성은 저온 또는 건조 처리시 대조구보다 높은 활성을 보였는데, 잎과 줄기에서는 저온과 건조 처리간의 차이는 없었지만, 뿌리에서는 건조 처리가 높은 경향을 보였다. GR 동위효소 발현양상은 저온과 건조처리시에는 GR-3 밴드가 잎에서는 발현되어 대조구와 차이가 있었지만, 줄기와 뿌리에서는 큰 차이가 없었다. PPO 활성은 잎에서는 모든 처리에서 차이가 없었지만, 줄기와 뿌리에서는 저온 또는 건조 처리에서 대조구보다 높은 경향을 보였다. 특히 줄기의 PPO 활성은 저온 처리보다 건조처리에서 높았고 뿌리의 PPO 활성은 건조 처리보다 저온 처리에서 높았다. 동위효소의 발현양상에서도 건조처리에서는 줄기에서, 저온 처리에서는 뿌리에서 높은 밀도를 보여 불량 환경에 따른 부위별 반응 차이를 잘 반영해 주었다.
천연 갈변저해 소재 발굴을 위해 황금을 열수와 EtOH로 추출한 후, 각각의 추출물에 사과 슬라이스를 침지하여 외관의 변화를 관찰한 결과 황금의 열수와 에탄올 추출물이 사과의 갈변억제에 효과적이었다. 이에 열수와 EtOH 추출물을 각각 상법에 따라 분획하여 $CHCl_3$, EtOAc, $H_2O$ 분획물로 총 6가지 분획물을 얻었다. 이 분획물에 대한 총 페놀과 플라보노이드 함량 및 라디칼 소거능과 환원력 측정, 금속이온 chelating 등을 통하여 항산화 효과와 PPO(polyphenol oxidase) 저해 활성을 측정하였다. 대체적으로 EtOH 추출의 분획물이 열수 추출의 분획물보다 페놀과 플라보노이드 함량 및 항산화 활성이 뛰어났다. 총 페놀의 경우 EtOAc 분획물에서, 플라보노이드의 경우 $CHCl_3$ 분획물에서 가장 높은 함량을 나타내었다. DPPH와 ABTS radical 소거능, FRAP assay 결과 EtOAc 및 $CHCl_3$ 분획물에서 높은 항산화능을 보여 총 페놀 및 플라보노이드 함량과 유사한 경향을 나타내었다. 금속이온 chelating 활성은 특이적으로 $H_2O$ 분획물에서 높은 활성이 나타났으나 다른 분획물들 또한 ascorbic acid에 비해 약 3배 이상의 우수한 활성을 나타냈다. PPO 저해 활성의 경우 $CHCl_3$ 분획물에서 높은 저해활성을 나타내어 다른 항산화 측정 결과와 유사한 경향을 보였으며, ascorbic acid에 비해 우수한 PPO 저해 활성을 보였다. 따라서 황금의 EtOAc 및 $CHCl_3$ 분획물은 우수한 항산화 및 PPO 저해 활성으로 인해 갈변저해제로서 효과적이라 판단된다.
감자 슬라이스를 CaCl$_2$ 용액과 chitosan 용액에 침지 하거나 혹은 이들 용액의 존재하에서 예열처리 한 후 냉장저장하여 침지 및 예열처리가 감자 슬라이스의 갈변정도, 페놀 함량, PPO 활성의 변화에 대한 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 감자 슬라이스의 L값은 감소하는 경향을 나타내었으나, CaPS는 2주까지 L값이 증가하였고, ChPS는 4주간 L값이 증가하였다(p < 0.05). 또한 예열처리에 의 한 병용 효과에 의해 L값이 가장 증가하였다(p < 0.05). 2. CaPS를 제외한 각 처리군은 total phenol 함량이 감소하였으며(p < 0.05) 예열처 리 한 감자 슬라이스의 total phenol 함량이 더욱 감소하였다(p < 0.05). chloro-genic aicd 함량은 HCaPS를 제외하고 total phenol 함 량의 변화와 같은 경향을 나타내었다. 3. PPO 활성은 침지 및 예열처리를 통하여 감소하였는데 예열처리에 의한 감자 슬라이스의 PPO 활성 이 더욱 감소하였다 이로부터 CaCl$_2$,및 chitosan 용액에 침지 및 예열처리가 갈변억제에 효과적인 것으로 생각되어지며 L값 은 증가하고 페놀함량과 PPO 활성이 감소하였다. 이 러한 효과는 열처리군에서 더 크게 나타났다.
Polyphenol oxidase in Yam was partially purified through ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose column chromatography. The specific activity of purified PPO was 138.22 unit/mg protein. The optimum pH and temperature of purified PPO were respectively 7.0 and 30$^{\circ}C$. The heat treatment at 80$^{\circ}C$ for 6 min, decreased PPO activity to 50%. The enzyme showed high substrate specificity toward catechol. The Km value for catechol was 5 mM. In the Ames test using S. typhimurium TA98 and TA100 catechol-YEBRP, pyrogallol-YEBRP, chlorogenic-YEBRP showed strong antimutagenicity on sodium azide and MECF excepting hydroquinone-YEBRP showed killing effect on both strains.
Belluzzo, Ana Silvia Fidelis;Fleuri, Luciana Francisco;Macedo, Juliana Alves;Macedo, Gabriela Alves
Food Science and Biotechnology
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제18권4호
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pp.878-883
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2009
In Brazil canned 'Biuti' peach is a very popular form of this sub-tropical fruit. This production represents an important economic agro-activity in Minas Gerais, Brazil during the summer period, in preparation for the Christmas celebrations. The aim of this work was to characterize the 'Biuti' peach polyphenoloxidase (PPO), since peach products show enzymatic oxidation of the polyphenols by oxidative enzymes, which affects the products during their shelf life. Two different hypothesis for the browning problem in processed peaches were studied: the inadequacy of the blanching treatment and the presence of a latent phenolase in the peaches. The PPO was characterized: pH optimum (5.5) and stability (5.5-6.5); optimum temperature at $20^{\circ}C$ and 80% of the activity retained after 30 min at $15-40^{\circ}C$. The test for the presence of latent PPO in the processed and canned peaches was negative. Ascorbic acid, ${\beta}$-mercaptoethanol, sodium metabisulfite, and cysteine were efficient in inhibiting the PPO.
감자로부터 polyphenol oxidase를 추출하여 열안정성에 영향을 주는 요인을 식품의 제조공정에 유용한 정보를 제공하기 위해 연구를 하였다. 감자의 PPO는 pH 7.0에서 가장 안정하였고, 이 효소는 8$0^{\circ}C$에서 1분간의 열처리로 효소 활성이 70% 저해되었다. 감자 PPO의 열안정성은 sodium chloride의 첨가로 감소되었으며, 2-mercaptoethanol과 dithiothreitol과 같은 환원제의 첨가로 역시 효소활성이 저해되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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