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Conformational change of organic cofactor PLP is essential for catalysis in PLP-dependent enzymes

  • Ngo, Ho-Phuong-Thuy;Nguyen, Diem Quynh;Park, Hyunjae;Park, Yoon Sik;Kwak, Kiwoong;Kim, Taejoon;Lee, Jang Ho;Cho, Kyoung Sang;Kang, Lin-Woo
    • BMB Reports
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    • 제55권9호
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    • pp.439-446
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    • 2022
  • Pyridoxal 5'-phosphate (PLP)-dependent enzymes are ubiquitous, catalyzing various biochemical reactions of approximately 4% of all classified enzymatic activities. They transform amines and amino acids into important metabolites or signaling molecules and are important drug targets in many diseases. In the crystal structures of PLP-dependent enzymes, organic cofactor PLP showed diverse conformations depending on the catalytic step. The conformational change of PLP is essential in the catalytic mechanism. In the study, we review the sophisticated catalytic mechanism of PLP, especially in transaldimination reactions. Most drugs targeting PLP-dependent enzymes make a covalent bond to PLP with the transaldimination reaction. A detailed understanding of organic cofactor PLP will help develop a new drug against PLP-dependent enzymes.

The Effect of Allium Vegetable Intake on the Redistribution of Pyridoxal 5'-phosphate Levels in Exercising Rats

  • Cho Youn-Ok;Yoon Mi-Kyung
    • Nutritional Sciences
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    • 제8권3호
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    • pp.169-174
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    • 2005
  • This study investigated the effect of allium vegetable intake on the storage and utilization of energy substrates before, during, and after exercise in tissues of rats. Ninety mts were fed either a control diet or a diet with added allium sativum (AS), allium cepa (AC), allium fistulosum (AF), or allium tuberosum (AT) for 4 weeks and then subdivided into 3 groups: before-exercise (BE) during-exercise (DE) after-exercise (AE). The DE group exercised on treadmill for 1 hour just before being sacrificed at the end of the 4th week of the dietary treatment Rats in the AE group were allowed to recuperate for 2 horns after being exercised like the DE group. Pyriooxal 5'-phospwe (PLP) levels were compared in plasma, liver and skeletal muscle of rats. There was no difference between AS animals and control animals in plasma PLP levels regardless of exercise. The plasma PLP levels of AC animals were higher than those of control animals before exercise but this PLP was decreased with exercise and lower than that of control animals after exercise. The plasma PLP levels of AF animals were higher than those of control animals during exercise but there was no difference before and after exercise. The plasma PLP levels of AT animals were higher than those of control animals regardless of exercise. Compared to those of control mts, the PLP levels of liver and muscle were significantly lower in AS, AC, AF and AT mts before exercise. The levels of liver PLP were significantly decreased in control mts while not changed in AS, AC, AF and AT mts during exercise. The levels of liver PLP tended to decrease in AS, AC and AF mts after exercise. The levels of muscle PLP were significantly decreased in control rats, while not changed in AS, AC and AF mts during exercise. The levels of muscle PLP were decreased in control mts but not changed in AS, AC and AF mts after exercise. Thus, it is suggested that the changes of PLP concentrations in plasma and tissues induced by exercise are affected by allium vegetable diet and demonstrated that allium vegetable intake induced an alteration in the redistribution of PLP among tissues.

High Intensity Exercise Induced a Redistribution of Pyridoxal 5-Phosphate Levels with Different Vitamin $B_6$ Status in Rats

  • Cho, Youn-Ok
    • Nutritional Sciences
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    • 제3권1호
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    • pp.31-35
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    • 2000
  • The purpose of this study was to compare the changes in PLP concentrations induced by regular, moderate, and abrupt, high-intensity exercise in the plasma and tissues of vitamin B6 deficient and normal rats. Forty-eight rats were fed either a vitamin B6 deficient (-B6) diet or a normal (+B6) diet for 5 weeks and were subdivided into 4 groups:non-exercise(NE) group: regular, moderate-intensity exercise (RME) group; abrupt, high-intensity exercise (AIE) group; abrupt, high-intensity exercise and recuperation(IRE) group. The RME group was exercised on treadmill ($10^{\circ}$, 0.5-0.8km/h) for 2 hours just before sacrifice at the end of 5th week on the diet and the IER group was recuperated for three days on the diet after being exercised like the AIE group. Pyridoxal 5 -phosphate(PLP) levels were compared in the plasma, liver and skeletal muscle of the rats. Plasma PLP concentration tended to decrease in -B6 rats and tended to increase in +B6 rats with AIE. Plasma PLP concentration in both +B6 rats with AIE and no change in both -B6 and +B6 rats with RME. Muscle PLP concentration decreased in +B6 rats, showed no change in -B6 rats with AIE. Muscle PLP concentrations in both +B6 and -B6 rats did not change with RME. Plasma PLP, liver PLP and muscle PLP concentration of IER returned to those of NE in both +B6 and -B6 rats. These results suggest that changes in PLP concentration in plasma, liver and muscle occur with exercise and are affected by exercise intensity and vitamin B6 status. These changes may be due to interorgan redistribution of PLP.

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Control of Trophoblast Gene Expression and Cell Differentiation

  • 천종윤
    • 대한생식의학회:학술대회논문집
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    • 대한불임학회 2001년도 제2차 연수강좌
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    • pp.195-205
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    • 2001
  • 태반 영양배엽 (trophoblast)은 포유동물의 발생과정 중 가장 먼저 분화되는 세포로서, 자궁환경내에서 배아가 착상, 발생, 및 분화하기 위해서 반드시 필요한 태반을 형성하는 색심적인 세포이다. 영양배엽 세포의 분화과정중의 결함은 배아의 사산이나 임신질환 등의 치명적 결과를 초래한다. 하지만, 영양배엽 세포의 분화를 조절하는 분자생물학적인 메카니즘은 아직 규명되지 않고 있다. 영양배엽 세포의 분화를 조절하는 경로를 규경하기 위한 선결과제는 분화된 영양배엽 세포에서만 발현하는 많은 유전자들이 밝혀져야만 한다. 본 연구팀은 최근에 분화된 영양배엽 세포에서만 발현하는 두 종류의 새로운 유전자들을 찾았다. 한 종류는 homeobox를 보유하고 있는 조절 유전자 Psx이고, 다른 한 종류는 임신호르몬인 태반 프로락틴 라이크 단백질 유전자 PLP-C${\beta}$이다. 본 연구과제의 목표는 이들 유전자의 기능과 조절 메카니즘을 규명함으로써, 영양배엽 세포의 분화를 조절하는 조절경로를 밝히는 것이다. 이를 위하여 다음과 같은 일련의 연구를 수행할 것이다. 1) Psx 유전자가 분화된 영양배엽 세포에서만 발현케 하는 조절 메카니즘을 규명하기 위해 functional assays, in vitro footprinting, gel mobility shift assays, 생쥐형질전화, UV crosslinking, Southwestern blot 등의 방법을 통해 Psx 유전자의 cis-acting 요인과 trans-acting factor를 밝혀 분석한다. 2) 영양배엽 세포의 분화조절 경로를 규명하기 위해 random oligonuclotide library screening, DD-PCR, subtractive screening 등의 방법을 이용하여 Psx 유전자에 의해 조절되는 하부유전자를 밝힌다. 3) Psx 유전자를 knock-out시켜 영양배엽 세포가 발달 및 분화하는데 미치는 역할을 밝힌다. 4) Yeast two-hybrid screening방법을 이용하여 태반 프로락틴 유전자의 수용체를 찾아 이들의 신호전달 기전을 밝힌다. 제1차년 연구결과로서, mouse와 rat으로부터 각각 Psx 유전자의 genomic DNA를 클로닝하여, 유전자 구조를 비교한 결과, mouse Psx (mPsx2)는 4개의 exons으로 이루어져 있는 반면에, rat Psx (Psx3)는 3개의 exons으로 구성되어 있었다. 즉, rPsx3는 mPsx2의 exon1이 없었다. Notrhern blot과 in situ hybridization 분석에 의해 mouse와 rat에서 Psx 유전자가 다르게 발현 조절되는 현상을 밝혔다. 실제로 mPsx2와 rPsx3의 5'-flanking지역을 클로닝하여 염기서열 분석 결과 전혀 homology를 찾을 수 없었다. 또한, 이들 각각 promoter의 activity를 luciferase reporter를 이용하여 조사한 결과 Rcho-1 trophoblast cells에서 각기 다른 activity를 보여 주는 것을 발견하였다. Psx 유전자의 transcription start sites는 Primer extension에 의해 밝혔다. 또한 Psx2 유전자를 knock-out 시키기 위해 targeting vector를 Osdupde1에 제작하였다. 본 과제를 시작할 때 새로운 프로락틴 유전자 하나를 클로닝하여 이 유전자를 PLP-I라고 이름을 붙였다. 이 후 이 유전자 (PLP-I)는 PLP-C${\beta}$라고 이름을 붙이게 되었다. Mouse PLP-C${\beta}$ 유전자의 counterpart를 rat에서 찾아 염기서열을 비교한 결과 mouse와 rat에서 PLP-C${\beta}$유전자의 homology는 약 79% (amino acid level)였다. 본 연구과정을 통해 또 하나의 새로운 PLP-C subfamily member를 mouse로부터 클로닝 하였고, 이 유전자를 PLP-C${\gamma}$라 하였다. PLP-C${\beta}$와 PLP-C${\gamma}$의 발현 유형은 Northern blot과 in 냐셔 hybridization 분석에 의해 태반의 제한된 spongitrophoblast와 trophoblast giant cells에서만 발현하는 것을 밝혔다. 놀랍게도 이들 두 새로운 유전자는 alternative splicing에 의해 두 종류의 isoform이 있음을 밝혔다. PLP family member 유전자로서 splicing에 의한 isoforms을 보여 주는 유전자로는 PLP-C${\beta}$와 PLP-C${\gamma}$가 최초이다. 이들 isoform mRNAs의 발현 유형은 RT-PCR 방법을 이용하여 규명하였다. 또 하나의 새로운 발견은 PLP-C${\beta}$와 PLP-C${\gamma}$가 독특한 유전자 구조를 갖고 있었다. 즉, PLP-C${\beta}$는 exon3의 alternative splicing에 의해 5개 혹은 6개의 exons을 갖는 two isoforms이 생긴다. 반면에 PLP-C${\gamma}$는 exon2가 alternative splcing이 되면서 7개의 exons을 갖거나 6개의 exons을 갖는 isoforms을 만든다. 그리고, PLP-C${\gamma}$의 promoter activity를 trophoblast Rcho-l${\gamma}$ 세포주를 이용하여 PLP-C${\gamma}$ 의 1.5 kb 5'-flanking 지역이 trophoblast-specific promoter activity를 갖고 있음을 밝혔다. PLP-C${\gamma}$ 유전자의 transcription start site는 Primer extension에 의해 밝혔다. 제 1차 년도의 연구결과를 토대로, 2차년에서는 다음단계의 연구를 수행하고자 한다. 즉, 1) mPsx2와 rPsx3의 promoter를 비교분석 함으로서 mouse와 rat에서 Psx 유전자가 다르게 조절되는 메카니즘 규명, 2) Psx와 PLP-C 유전자의 promoter에 있는 cis-acting elements 탐색, 3) Psx2와 Psx3의 단백질을 이용하여 이들이 binding하는 target sequence 규명, 4) 제작한 Psx2 targeting vector를 이용하여 ES cells에서 Psx2 유전자 knock-out, 5) Psx 유전자를 과발현시키는 세포주를 만들고 Psx에 의해 조절되는 유전자 탐색, 6) 새로 밝히 PLP-C members 유전자들의 조절기전을 Rcho-1 세포주를 이용하여 여러 거지 성장인자와 다른 호르몬에 대한 반응을 탐색, 7) Psx와 PLP-C${\gamma}$ 유전자의 chromosomal mapping 등을 밝힐 것이다.

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Molecular Conformation-Dependent Complexation between Acidic- and Basic-Polypeptides via Hydrogen Bonding in Solution

  • 장천학;김현돈;조병기;이장우
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제16권1호
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    • pp.42-47
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    • 1995
  • Interpolymer complex formation between basic polypeptide poly(L-proline) Form Ⅱ (PLP(Ⅱ)) and acidic polypeptides poly(L-glutamic acid) (PLGA) and poly(L-aspartic acid)(PLAA) has been studied in water-methanol (1:2 v/v) mixed-solvent by viscometry, potentiometry, light scattering and circular dichroism (CD) measurements. It has been found that polymer complexes between PLP(Ⅱ) and PLGA (or PLAA) are formed via hydrogen bonding with a stoichiometric ratio of PLP(Ⅱ)/PLGA (or PLAA)=1:2 (in unit mole ratio) and that PLP(Ⅱ) forms polymer complex more favorably with PLGA than with PLAA. In addition, the minimum (for pH 5.0) and the maximum (for pH 3.2) in reduced viscosity of dilute PLP(Ⅱ)-PLGA mixed solutions are observed at 0.67 unit mole fraction of PLGA (i.e., [PLP(Ⅱ)]/[PLGA]=1/2). These findings could be explained in terms of molecular structure (or conformation) of the complementary polymers associated with the complex formation.

수소 결합을 통한 Helix 폴리 펩타이드사이의 복합체 형성 (Intermacromolecular Complex Formation between Helix Strilctilral Polypeptides through Hydrogen Bonding)

  • 조병기;김창규
    • 대한화장품학회지
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    • 제18권1호
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    • pp.99-132
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    • 1992
  • 물-알코올 용액에서 염기성으로 작용하는 폴리펩타이드와 산성으로 작용하는 폴리펩타이드 사이에 수소결합을 통한 복합체 형성에 관한 연구를 점도, PH, 빛산란, 원편광이색성, 광회전도 등으로 조사했다. 얻어진 결과는 여러가지 복합체 시스템 모두가 1:2 조성으로 복합체 형성을 한다는 것을 알 수 있었으며, 우선성 헬릭스를 가지는 폴리펩타이드와 좌선성 헬릭스를 가지는 폴리펩타이드, 즉 반대방향성의 헬릭스 구조를 가지는 폴리펩타이드들 사이에 강한 상호작용을 나타내고, 반면, 같은 방향성의 헬릭스 구조를 가지는 폴리펩타이드의 형태가 복합체 형성에 매우 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다. 즉, 입체선택적 복합체 형성을 보인다. 또한 구조적으로 유연한 구조를 가지는 폴리펩타이드가 강한 상호 작용을 나타낸다. 즉, PHPL보다 PLP(I)이, PLP(I)보다 PLP(II)가, PAA보다 PGA가 더 강한 상호작용을 나타낸다. 이런 상호 복합체 형성이 일어나면 형태전이가 일어난다는 것도 확인할 수 있었다. 위의 결과를 근거로 하여, 좌선성 헬릭스 구조의 모발의 케라틴에 PLP(I, II)와 PHLP를 흡착시킨 후, 흡착량을 HPLC로 측정한 결과, PLP(II)보다 PLP(I)이, PHLP보다 PLP(II)가 더 많이 흡착되었다. 결론적으로, 모발에 폴리펩타이드를 사용시, 좌선성헬릭스 구조의 폴리펩타이드 보다 우선성헬릭스 구조의 폴리펩타이드가 더 많이 흡착되고, rigid conformation의 폴리펩타이드보다 foexible conformation의 폴리펩타이드가 더 많이 모발에 흡착되어, 효과가 좋다는 것을 알 수 있다.

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심리 음향 켑스트럼 평균 차감법을 이용한 이동 전화망에서의 음질 평가 (Speech Quality Measure in a Mobile Communication System Using PLP Cepstral Distance with CMS)

  • 윤종진;박상욱;박영철;윤대희;차일환
    • 음성과학
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    • 제6권
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    • pp.163-179
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    • 1999
  • For the set up, management and repair of a mobile communication system, continuous estimation of speech quality is required. Speech quality measurement can be conducted by listener's judgement in a subjective test such as MOS (Mean Opinion Score) test. However, this method is laborious, expensive and time-consuming, it is advisable to predict subjective speech quality via objective measures. This paper presents a robust objective speech quality measure, PLP-CMS (Perceptual Linear Predictive-Cepstral Mean Subtraction), which can predict subjective speech quality in mobile communication systems. PLP-CMS has a high correlation with subjective quality owing to PLP (Perceptual Linear Predictive) analysis and shows a robust performance not being influenced by PSTN (Public Switched Telephone Network) channel effects due to CMS (Cepstral Mean Subtraction). To prove the performance of our proposed algorithm, we carried out subjective and objective quality estimation on speech samples which are variously distorted in a real mobile communication system. As a result, we demonstrated that PLP-CMS has a higher correlation with subjective quality than PSQM (Perceptual Speech Quality Measure) and PLP-CD (Perceptual Linear Predictive-Cepstral Distance).

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깻잎 분말 첨가와 도체등급이 돈육소시지의 품질 및 기호성에 미치는 영향 (Effects of Addition of Perilla Leaf Powder and Carcass Grade on the Quality and Palatability of Pork Sausage)

  • 정인철;강세주;김종기;현재석;김미숙;문윤희
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.350-355
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    • 2003
  • 본 연구는 깻잎 분말의 첨가와 도체 등급이 돈육소시지의 품질 및 기호성에 미치는 영향을 규명하기 위하여 일반성분, pH, 칼로리, 보수력, 아질산 잔류량, 표면색깔, 조직 특성, 아미노산 조성 및 관능적 특성을 실험하였다. 수분 줄 조회분 함량은 소시지들 사이에 유의한 차이가 없었으나, 조지방은 B등급육 소시지가 E 등급육보다 높았고, 깻잎 분말을 첨가한 B 등급육 소시지가 깻잎 분말을 첨가하지 않은 것보다 낮았다. 그리고 조단백질 함량은 E 등급육 소시지가 B 등급육보다 높았다. 돈육소시지의 pH는 깻잎 분말을 첨가한 E 등급육 소시지가 6.19로 가장 높았으며, 칼로리는 깻잎 분말을 첨가하지 않은 B 등급육 소시지자 2,473 cal/g으로 가장 높았다. 보수력은 깻잎 분말의 첨가와 관계없이 B등급육 소시지가 E 등급육 소시지보다 유의하게 높았다. 아질산 잔류량은 깻잎 분말을 첨가한 돈육소시지가 첨가하지 않은 것보다 낮았다. 돈육소시지의 $L^{*}$ (명도)은 B등급육이 E등급육보다, 깻잎 무첨가구가 깻잎 첨가구보다 높았으며, $a^{*}$ 값(적색도)는 B 등급육보다 E 등급육이, 깻잎 무첨가구가 깻잎 첨가구보다 높았고, $b^{*}$ 값(황색도)은 깻잎 첨가구가 무첨가구보다 높았다. 조직적 특성에서 경도, 탄성, 응집성 및 씹힘성은 소시지들 사이에 유의한 차이가 없었으나, 뭉침성은 깻잎을 첨가한 E등급육 소시지가 644 g으로 가장 낮았다. 그리고 총아미노산 함량은 소시지들 사이 에 유의한 차이가 없었다. 관능적인 색깔 및 조직감은 B 등급육 소시지가 E 등급육 소시지보다 우수하였으나, 향기 및 맛은 등급과 깻잎 분말의 첨가에 영향을 받지 않았고, 전체적인 기호성은 깻잎 무첨가 소시지가 우수하였다.X>9t가 trans 지방산 이성 체중 가장 높은 함량을 보였으며, 냉동피자의 C18:1 $\Delta$9t 함량은 30%를 초과하는 높은 함량을 보였다. 슈크림 빵은 높은 C18:2t 함량을 보였으며(8.26%), 불고기버거와 피쉬버거의 C18:2t trans 지방산 함량은 3.26%와 3.34%로 비슷한 수준이었다. 육가공품 및 튀김류 중 냉동 닭튀김과 냉동 감자튀김의 trans 지방산 함량이 15%~l9%의 수준으로 높았으며, C18:1$\Delta$9t과 C18:2t가 그 주된 성분이었다. 돼지고기구이 (목살)에서는 C18:1$\Delta$9t는 확인되지 않았으며, 냉동감자튀김에서는 C16:1 $\Delta$9t이 검출되지 않았다. 1회 분량 당 trans지방산 함량이 높은 식품은 팝콘, 냉동피자, 감자튀김과 닭튀김, 빵류 등의 순으로 나타났다. 이러한 세 집단을 하나의 제도의 틀로 통합하기 위해서는 국가의 총허용어획량(TAC)을 총 어촌 허용어획량(TAIVCs)과 총 허용 유어 어획량(TARCs) 및 총허용 상업적 어획량 (TACCs)의 세부문으로 나눌 것을 제안한다. 그리하여 다시 TAFVCs와 TARCs, 그리고 TACCs는 어촌별 어획량(ITCQs), 개별 유어 회사별 어획량(IRCQs), 그리고 양도 가능한 개별 상업적 어획량(ITCQs)으로 나누어 관리하도록 한다. 이와 같이 중국의 국가 총허용어획량(TAC)을 IFVQs와 IRCQs, 그리고 ITQCQs의 세부문으로 구분하여 할당하고, 여기에 기초하여 어업을 관리하는 것은 중국에 있어서 사회적 형평성과 경제적 효율성과의 상충관계를 고려하여 고안된 것으로, 중국에 있어서 수산업을 통한 경제적 및 사회적 효과를 동시에 기대할 수 있을 것이다.

금식 또는 Vitamin$B_6$ 보충급식이 흰쥐의 Vitamin B6 대사에 미치는 영향 (The Effect of Fasting and Vitamin B6 Repletion on Vitamin$B_6$ Metabolism in Rats)

  • Cho, Youn-Ok
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제28권5호
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    • pp.426-434
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    • 1995
  • The purpose of this study were to investigate the effect of fasting and vitamin B6 repletion on tissue concentration of pyridoxal 5-phosphate and urinary excreteion of 4-pyridoxic acid in vitamin B6 deficient rats. Sixty six rats(6 per group) were fed either a vitamin B6 deficient diet (-B6) or a control diet (+B6) for 6 weeks and then rats were repleted with +B6 diet for 2 weeks. Rats were fasted for 1 and 3 days and for 3 days after repletion. Pyridoxal 5-phosphate (PLP) concentration in plasma, liver, skeletal muscle, and heart muscle and urinary 4-pyridoxic acid (4-PA) excretion were compared. Fasting resulted in a significant increase in PLP concentration in the plasma, liver and heart muscle of rats fed the -B6 diet. Skeletal muscle PLP concentration was significantly decreased in +B6 rats but not in -B6 rats. Following vitamin B6 repletion, PLP concentration in the plasma, liver and heart muscle in previously -B6 rats was similar to the respective concentration in +B6 rats while PLP concentration in the skeletal muscle of previously -B6 rats increased, but it was not reached to that of +B6 rats. At day 1 and 2 of the fast, urinary 4-PT excretion increased in both +B6 and -B6 rats although there was no supply of vitamin B6 due to fasting. These results suggest that vitami B6 is redistributed as PLP when there is a caloric deficit and PLP is supplied by an endogenous source, possibly PLP bound to skeletal muscle glycogen phosphorylase.

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Effects of different anesthetic techniques on the incidence of phantom limb pain after limb amputation: a population-based retrospective cohort study

  • Cho, Hyun-Seok;Kim, Sooyoung;Kim, Chan Sik;Kim, Ye-Jee;Lee, Jong-Hyuk;Leem, Jeong-Gill
    • The Korean Journal of Pain
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    • 제33권3호
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    • pp.267-274
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    • 2020
  • Background: General anesthesia (GA) has been considered the anesthetic technique which most frequent leads to phantom limb pain (PLP) after a limb amputation. However, these prior reports were limited by small sample sizes. The aims of this study were to evaluate the incidence of PLP according to the various anesthetic techniques used for limb amputation and also to compare the occurrence of PLP according to amputation etiology using the Korean Health Insurance Review and Assessment Service for large-scale demographic information. Methods: The claims of patients who underwent limb amputation were reviewed by analyzing the codes used to classify standardized medical behaviors. The patients were categorized into three groups-GA, neuraxial anesthesia (NA), and peripheral nerve block (PNB)-in accordance with the anesthetic technique. The recorded diagnosis was confirmed using the diagnostic codes for PLP registered within one year after the limb amputation. Results: Finally, 7,613 individuals were analyzed. According to the recorded diagnoses, 362 patients (4.8%) developed PLP after amputation. Among the 2,992 patients exposed to GA, 191 (6.4%) were diagnosed with PLP, whereas 121 (4.3%) of the 2,840 patients anesthetized with NA, and 50 (2.8%) of the 1,781 patients anesthetized under PNB developed PLP. The relative risks were 0.67 (95% confidence interval [CI], 0.53-0.84; P < 0.001) for NA and 0.43 (95% CI, 0.32-0.59; P < 0.001) for PNB. Conclusions: In this retrospective cohort study, using large-scale population-based databases, the incidence rates of PLP after limb amputations were, in the order of frequency, GA, NA, and PNB.