• 대한의생명과학회지
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• 제6권4호
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• pp.261-268
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• 2000

할미송이버섯으로부터 혈전용해효소 (FE-2)를 DEAE-cellulose, Mono-S column으로 분리 정제하였다. 이 효소는 분자량이 18.2 kDa 이었으며, ICP-MS (inductively coupled plasma mass spectrometer) 분석 결과 $Zn^{2+}$을 포함하고 있었다. 15번째까지의 N-terminal amino acid 서열은 A-L-Y-V-G-X-S-P-X-Q-Q-S-L-L-V이고, pH 7.5에서 활성이 가장 큰 염기성 단백질 분해효소로, EDTA와 1,10-phenanthroline에 의해 활성이 감소되는 metalloprotease였다. $Mg^{2+}$, $Zn^{2+}$, Fe$^{2+}$, Co$^{2+}$의 첨가 시 활성이 증가하였으나 Hg$^{2+}$의 경우 활성이 완전히 소멸되었다. 이 효소 (FE-2)는 단백질 분해효소 저해제인 E-64 (trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)-butane), PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride), pepstatin 과 2-mercaptoethanol의 영향을 받지 않으며, 섬유소원 (fibrinogen)과 반응 시 $A\alpha$ chain과 B$\beta$ chain은 분해시키지만 $\gamma$ chain과는 반응하지 않았다.

• 한국수산과학회지
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• 제22권5호
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• pp.363-369
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• 1989

산업적으로 속성젓갈을 대량 생산하기 위하여, 우선 시중 젓갈에서 단백질분해력이 강한 균주 4 종을 분리하여 속성 분해정도와 분해 생성물의 풍미를 비교 검토한 결과 B. subtilis p-4 및 B. licheniformis p-5 균이 가장 양호하였으며, 이들 균주와 그 pretense의 특성은 다음과 같다. pH 7.0, $40^{\circ}C$ 식염$1\%$ 농도에서 균체 및 조효소 활성이 가장 양호하였으며, 이때의 비증식속도는 p-4 균 및 p-5 균이 각각 0.48/hr, 0.49/hr이었고, 최대 효소활성 농도는 p-4 는 30시간 후 335n mole-Tyr/min.ml, p-5는 28시간 후 300n mo1e-Tyr/min.ml이였다. 그리고 sephadex G-100 겔 여과에 의한 효소 정제도는 조효소에 비해 비활성이 p-4 및 p-5 균 protease의 경우 각각 25.4배, 8.6배씩 증가하였으며, pH 7.0, $50^{\circ}C$에서 활성이 가장 높았다. 또한 겔여과에 의한 분자량은 p-4가 18,000, p-5 protease가 30,000이었고, 저해제의 효과에서는 두 Protease 모두 $Ni^{2+},\;Cu^{2+}$ 이온과 EDTA, o-phenanthroline에 의해 강하게 활성이 소실되는 것으로 보아 metal chelator sensitive neutral protease에 속하는 것으로 추정되었다.

• 미생물학회지
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• 제23권1호
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• pp.13-19
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• 1985

제한효소 Acc I을 정제하고 그 효소적 특성을 연구하였다. 300g(wet weight)의 Acinetobacter calcoaceticus 로부터 얻은 crude extract를 sample로 하여 ammonium sulfate fractionation을 거쳐 Heparin-agarose, DEAE-se-phades, Affi,-gel Blue, phosphoceIIulose, hydroxylapatite의 순서로 chromatography를 수행한 결고 0 .28mg의 AccI 제한효소를 얻었다. 효소의 specific activity는 mg당 $1.1{\times}10^{s}$ unit 이었다. 정제된 Acc [제한효소는 10% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis에서 한개의 band로 나타났으며 그 분자량은 45,000~1,000이었다. 이 효소는 $MgCl_2$ 존재하에, pH 8.0에서 11.0사이에서 최대의 활성을 보였다. NaCl은 이 효소의 활성에는 필요하지 않았으나 150mN이상에서는 급격한 효소 활성의 감소가 있었다.

• Natural Product Sciences
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• 제7권1호
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• pp.1-4
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• 2001

The antioxidant activity of Pinus densiflora was determined by measuring the radical scavenging effect on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radicals. The methanol extract of P. densiflora showed strong antioxidant activity, and thus fractionated with several solvents. The antioxidant activity potential of the individual fraction was in the order of ethyl acetate>n-butanol>water>dichloromethane> n-hexane fraction. The ethyl acetate soluble fraction exhibiting strong antioxidant activity was further purified by repeated silica gel column chromatography. Antioxidant (+)-catechin was isolated as one of the active principles from the ethyl acetate fraction, together with the inactive components, dihydrokaempferol and 1-O-benzoylglucose. The radical scavenging effect of (+)-catechin on DPPH radical exceeded to that of L-ascorbic acid which is a well known antioxidant.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권2호
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• pp.196-205
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• 2015

A Sulfolobus-E. coli shuttle vector for an efficient expression of the target gene in S. acidocaldarius strain was constructed. The plasmid-based vector pSM21 and its derivative pSM21N were generated based on the pUC18 and Sulfolobus cryptic plasmid pRN1. They carried the S. solfataricus P2 pyrEF gene for the selection marker, a multiple cloning site (MCS) with C-terminal histidine tag, and a constitutive promoter of the S. acidocaldarius gdhA gene for strong expression of the target gene, as well as the pBR322 origin and ampicillin-resistant gene for E. coli propagation. The advantage of pSM21 over other Sulfolobus shuttle vectors is that it contains a MCS and a histidine tag for the simple and easy cloning of a target gene as well as one-step purification by histidine affinity chromatography. For successful expression of the foreign genes, two genes from archaeal origins (PH0193 and Ta0298) were cloned into pSM21N and the functional expression was examined by enzyme activity assay. The recombinant PH0193 was successfully expressed under the control of the gdhA promoter and purified from the cultures by His-tag affinity chromatography. The yield was approximately 1 mg of protein per liter of cultures. The enzyme activity measurements of PH0913 and Ta0298 revealed that both proteins were expressed as an active form in S. acidocaldarius. These results indicate that the pSM21N shuttle vector can be used for the functional expression of foreign archaeal genes that form insoluble aggregates in the E. coli system.

• The Plant Pathology Journal
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• 제23권2호
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• pp.113-115
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• 2007

A kind of naphthoquinone, plumbagin was purified and identified from the leaves of Nepenthes $ventricosa\;{\times}\;maxima$ through solvent extraction, silica gel column chromatography, and recrystallization. The yield (0.51%) was higher than that of the root of Plumbago scandens (0.26%), P. capensis (0.15%), and N. thorelii (0.092%). It exhibited antifungal activity against all plant pathogenic fungi tested, Alternaria alternata, Aspergillus niger, Bipolaris oryzae, Fusarium oxysporum, Phytophthora capsici, Rhizoctonia solani, Rhizopus stolonifer var. stolonifer and Sclerotinia sclerotiorum. The minimum inhibitory concentration values ranged from about 4.8 to $56.6\;{\mu}g/ml$ against the above eight fungi and R. solani was the most sensitive.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권5호
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• pp.420-426
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• 1998

Glutamic acid의 분해능이 뛰어난 aminopeptidase를 생산하는 세균을 토양으로부터 분리하였다. 이 균은 형태적 생리적 특성으로부터 Bacillus licheniformis로 동정되었다. 이 균을 최적 배지에 접종하고 37$^{\circ}C$에서 진탕배양한 후 균이 생산한 aminopeptidase를 ammonium sulfate 침전, Phenyl Sepharose CL-4B, Resource Q, Superose 12HR column을 통해 분리하여서 20.6%의 수율로 17.6배 정제된 glutamyl p-nitroanilide을 기질로 했을 때 9.2unit/mg의 순수효소를 얻었다. SDS-PAGE와 Native-PAGE로 부터 이 효소의 분자량이 42,000Da와 22,000Da으로 구성된 헤테로다이커로 약 64,000Da임이 밝혀졌고 효소의 등전점은 5.2로 나타났다. 이 효소의 반응 최적 온도는 55$^{\circ}C$, 반응최적 pH는 8.0이었고, EDTA와 1,10-phenanthroline에 의해서 효소활성이 저해되는 metalloenzyme으로 판명되었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제41권1호
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• pp.26-32
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• 2012

국내산 정제염, 천일염과 유럽산 천일염 등의 SEM에서의 형태, 무기질 성분, 보돌연변이와 암세포 in vitro 항암 기능성을 측정하였다. 정제염은 SEM을 이용한 관찰 시 구조가 규칙적이었고 천일염은 불규칙한 표면 구조를 가지고 있었다. 천일염의 크기도 차이가 있었고 프랑스 천일염과 한국천일염I은 다른 천일염보다 크기가 작았다. 무기질 함량은 프랑스 천일염과 한국 천일염I이 Ca, K, Mg 등의 함량이 다른 소금보다 더 많았다. pH도 프랑스 천일염과 한국 천일염I이 가장 높았다. 한국산 두 가지의 천일염은 무기질 함량에 따라 물리적 특성의 차이를 보였고 한국 천일염I은 프랑스 천일염과 비슷한 무기질 함량을 가지고 있었다. 소금은 보돌연변이 효과가 있었지만 특히 무기질 함량이 높았던 프랑스 천일염과 한국산 천일염I은 다른 소금보다 낮은 보돌연변이 효과를 나타내었다. HCT-116과 AGS 암세포에 대한 in vitro 항암 효과에서도 보돌연변이 효과와 비슷한 경향을 나타내었고 많은 무기질을 함유한 프랑스 천일염과 한국산 천일염I의 암세포 성장 억제효과와 암세포의 apoptosis 유도 효과가 가장 높았다. 이상의 결과로부터 소금의 기능성은 무기질 함량이 많은 천일염이 정제염보다 좋으며 천일염 중에도 Ca, K 등의 무기질 함량이 높을수록 기능성도 증가하는 것으로 나타났다.

• 한국균학회지
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• 제28권1호
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• pp.60-65
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• 2000

할미송이버섯으로부터 3단계를 거처 분자량이 각각 18 kDa(FE-1)과 18.2 kDa(FE-2)인 두 개의 혈전용해효소를 분리 정제하였다. 이 효소들은 지금까지 알려진 혈전용해 효소의 질량에 비해 비교적 작았고 두 효소(FE-1과 FE-2)의 15번째까지의 N-terminal amino acid서열은 A-L-Y-V-G-X-S-P-X-Q-Q-S-L-L-V로 같았다. FE-1은 ICP-MS의 결과 $Zn^{2+}$을 mole당 0.98 mole 포함하고 있는 metalloprotease로 pH 7.5와 $55^{\circ}C$에서 가장 큰 활성을 나타내고, 1,10-phenanthroline의 첨가 시 저하된 활성은 $Zn^{2+}$나 $Co^{2+}$의 첨가에 의해 재생되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권1호
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• pp.218-223
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• 1998

우유 casein단백질을 alcalase로 가수분해시켰을 때, 생성되는 peptide 중 철분과 결합력이 있는 peptide인 IBP가 $immobilized\;Fe^{3+}\;affinity\;chromatography$에 의하여 용이하게 분리되었다. IBP의 분자량은 2,175 dalton이었으며 $pH\;6,\;37^{\circ}C$에서 1시간동안 일정량의 철분과 항온처리하였을 경우, 25, 50, 100 g/mL의 IBP는 각각 4.2, 5.7, 7.1 g의 철분을 가용화시키는 능력을 보였다. IBP는 proline (24.5 Mol%), lysine (15.7 Mol%), glutamic 또는 glutamine (14.9 Mol%) 등의 아미노산으로 구성되어 있었으며 이들의 N-terminal sequence는Met-Ala-Pro-Lys-His의 순으로 이루어져 있었다. 분자량, 아미산 조성, N-terminal sequence등의 결과를 종합해 보면 IBP는 casein 중 -casein의 아미노산 서열 $102{\sim}119$에 해당하는 18개의 아미노산으로 구성된 peptide임을 알 수 있었다.