목 적: 고식적 체외수정시술과 세포질내정자주입법을 사용하여 체외성숙 난자를 수정시키고 수정률과 배발달율을 비교하고자 하였다. 연구방법: 2007년 1월부터 2008년 8월까지 난소과자극과 체외수정시술을 받은 59명의 여성에서 135개의 배아소포 단계의 미성숙난자만을 얻어 75 mIU/mL rFSH, 0.5 IU/mL rhCG, 10 ng/mL rEGF가 포함된 체외성숙용 배양액에서 최대 48시간까지 배양하였다. 체외성숙된 난자는 고식적 체외수정방법 (n=41) 또는 세포질내정자주입법 (n=94)을 이용하여 수정시켰으며 이후 배발달율을 관찰하였다. 결 과: 고식적 체외수정군과 세포질내정자주입군에서 체외성숙률은 각각 51.2%와 59.6%였고, 수정률은 각각 71.4%와 80.4%로 두 군간에 통계적으로 유의한 차이는 없었다. 배발달율도 두 군에서 비슷하게 관찰되었다. 결 론: 난소과자극을 통해 얻은 미성숙난자는 고식적 체외수정법을 사용하더라도 세포질내정자주입법과 동등한 수정률과 배발달율을 보임을 확인하였다.
Objective: We evaluated the fertilization potential of immature oocytes obtained from controlled ovarian hyperstimulation cycles of patients undergoing ICSI. Methods: We retrospectively analyzed 463 ICSI cycles containing at least one immature oocyte at oocyte denudation. ICSI was performed on mature oocytes at oocyte denudation (metaphase-II [MII] oocytes) and the oocytes that extruded the first polar body between oocyte denudation and ICSI (MI-MII oocytes). Fertilization and early embryonic development were compared between MII and MI-MII oocytes. To investigate the pregnancy potential of MI-MII oocytes, the pregnancy outcome was analyzed in 24 ICSI cycles containing only immature oocytes at retrieval. Results: The fertilization rate of MI-MII oocytes (37.0%) was significantly lower than that of MII oocytes (72.3%). The rates of delayed embryos and damaged embryos did not significantly differ. Eighty-one immature oocytes were retrieved in 24 cycles that retrieved only immature oocytes and 61 (75.3%) of them were in the MI stage. ICSI was performed on 36 oocytes (59.0%) that extruded the first polar body before ICSI and nine MI-MII oocytes (25.0%) were fertilized. Embryo transfers were performed in five cycles. Pregnancy was observed in one cycle, but it ended in biochemical pregnancy. Conclusion: In ICSI cycles, oocytes that extruded the first polar body between denudation and ICSI can be used as a source of oocytes for sperm injection. However, their fertilization and pregnancy potential are lower than that of mature oocytes. Therefore, ovarian stimulation should be performed carefully for mature oocytes obtained at retrieval, especially in cycles with a small number of retrieved oocytes.
Kim, Chung-Hoon;You, Rae-Mi;Kang, Hyuk-Jae;Ahn, Jun-Woo;Jeon, Il-kyung;Lee, Ji-Won;Kim, Sung-Hoon;Chae, Hee-Dong;Kang, Byung-Moon
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제38권4호
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pp.228-233
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2011
Objective: To investigate the effectiveness of GnRH antagonist multiple-dose protocol (MDP) with oral contraceptive pill (OCP) pretreatment in poor responders undergoing IVF/ICSI, compared with GnRH antagonist MDP without OCP pretreatment and GnRH agonist low-dose long protocol (LP). Methods: A total of 120 poor responders were randomized into three groups according to controlled ovarian stimulation (COS) options; GnRH antagonist MDP after OCP pretreatment (group 1), GnRH antagonist MDP without OCP pretreatment (group 2) or GnRH agonist luteal low-dose LP without OCP pretreatment (group 3). Patients allocated in group 1 were pretreated with OCP for 21days in the cycle preceding COS, and ovarian stimulation using recombinant human FSH (rhFSH) was started 5 days after discontinuation of OCP. Results: There were no differences in patients' characteristics among three groups. Total dose and days of rhFSH used for COS were significantly higher in group 3 than in group 1 or 2. The numbers of mature oocytes, fertilized oocytes and grade I, II embryos were significantly lower in group 2 than in group 1 or 3. There were no significant differences in the clinical pregnancy rate and implantation rate among three groups. Conclusion: GnRH antagonist MDP with OCP pretreatment is at least as effective as GnRH agonist low-dose LP in poor responders and can benefit the poor responders by reducing the amount and duration of FSH required for follicular maturation.
본 연구는 동해남부해역의 수하식 우렁쉥이 양식장에서 양식되고 있는 2년산 우렁쉥이, Halocynrhia roretzi의 생식세포 및 생식소 발달과 성숙 조사를 위하여 1996년 5월부터 1997년 4월에 걸쳐 조사되었다. 우렁쉥이는 자웅동체형으로 난생이었다. 난소는 체벽에 평행하게 붙어 좌측에 6~8개, 우측에 8~10개의 가는 생식수관을 가진 구조이며, 정소는 난소 사이에 불규칙 한 많은 낭상 구조를 가진 복합 생식소이었다. 난원세포는 직경이 11.7~15.6 ${\mu}m$이었고, 초기성장기의 난모세포는 직경 39.6~47.6 ${\mu}m$이었으며, 핵경은 10.0~25.0 ${\mu}m$이었다. 난소를 대부분 차지하는 난황형성중인 난모세포는 158.6~210.0 ${\mu}m$에 이르렀다. 성숙 난모세포는 210.0~230.9 ${\mu}m$로 피질부에서 test cell들이 관찰되었다. 정소는 한 개의 정소낭에 여러 개의 곡정세관이 밀집되어 그 내부 생식상피를 따라 일반적인 정자형성과정을 보이고 있었다. 첫 산란은 수온이 1$0^{\circ}C$이하로 떨어진, 3년생이 되는 1997년 1월에서 2월에 주로 이루어졌다.
서해 군산연안에 서식하는 풀망둑의 생태 연구를 위해 1994년 5월부터 1995년 6월까지 매월 표본을 채집하였으며, 서식환경, 난소의 성숙과정과 산란기, 포란수, 자어의 출현과 착저(着底)시기, 성장, 먹이생물 등을 분석하였다. 본 종의 난소 발달과정은 $10\~11$월의 난원세포기, $12\~2$월의 성장기, $2\~4$월의 성숙기, 4월-5월 초의 완숙 및 산란기로 구분되었다. 4월 하순부터 산란을 시작하여 5월 중순에 대부분 산란을 종료하였고, 산란성기는 5월 초${\cdot}$중순이었다. 포란수는 전장에 유의한 차이를 보였으며 약 $8,600\~49,000$ 여개를 포란하고 있었다. 성숙란을 포함하는 최소 성체는 전장 225mm(체장 180mm)였다. 5월 중순 이후 6월 초까지 전장 10mm 미만의 자어가 출현하였으며, 5월 말부터는 전장 $13.0\~15.0mm$의 개체들이 조간대 부근의 천해역에서 저서생활을 시작하였다. 이들은 빠른 속도로 성장하여 10월 무렵에는 평균 전장 141.7 mm에 달하였는데, 이후 12월부터는 천해역에서 자취를 감추고 이듬해 산란기까지 조하대로 이동하여 생활하였다. 본 연구에서 채집된 풀망둑의 최대 전장은 산란 직전인 4월에 채집된 것으로 수컷이 531mm, 암컷이 472mm 였다. 위내용물은 어린 개체들의 경우 요각류와 기타 무척추동물의 유생을 섭식하였고, 성체에 있어서는 게, 어류, 새우류, 두족류, 갯지렁이류 등을 다양하게 섭식하였으며, 특히 새우류의 섭식량이 많았다.
포유류의 난소내 여포의 폐쇄기작을 알아보기 위하여 본 실험을 행하였다. 정상과 폐쇄를 형태적으로 판정한 돼지의 난소내 개개 중여포의 여표액내 스테로이드 호르몬과 단백질을 방사면역측정법과 SDS-전기영동으로 각각 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Progesterone은 여포성숙기의 여포액내 폐쇄여포에서 높은 농도를 나타내었고testosterone의 경우 황체기의 정상여포 및 여포성숙기의 폐쇄여포에서 높은 농도를 나타내었다. estradiol은 여포성숙기의 폐쇄여포에서 정상여포에 비해 현저히 낮았다. 여포액내 존재하는 단백질의 SDS-PAGE 결과, 혈청에 존재하지 않는 4종의 단백질을 확인하였다. 난소주기에 따라 112K, 141K의 단백질이 확인되었고, 폐쇄여포액내 특이하게 존재하는 23K, 24K의 단백질도 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 보아 난소주기에 따라 여포액재에 존재하는 스테로이드 호르몬의 농도와 단백질의 조성이 서로 같지 않음을 알 수 있었으며 여포의 폐쇄기작에 있어서도 난소주기에 따라 분명한 차이가 있음을 알 수 있었다. 그러나 이들 폐쇄여포에 존재하는 단백질들의 생리적인 역할을 이해하기 위하여는 많은 연구가 수행되어야 한다고 사료된다.
본 연구에서는 nonylphenol(NP)과 2,2',4,6,6'-pentachlorobiphenyl(PCB104)이 성숙한 그물베도라치의 난소 스테로이드 대사과정에 미치는 영향을 조사하였다. 그물베도라치의 성숙란을 방사 표지된 스테로이드 전구물질인 $[^3H]-17{\alpha}$-hydroxyprogesterone($[^3H]-17{\alpha}OHP$)와 함께 NP와 PCB104를 각각 100 ng/$m{\ell}$의 농도로 첨가하여 배양하였다. 배양 후 배양액과 난모세포로부터 스테로이드 호르몬을 추출하여 박막 크로마토그래피를 통해 분리 및 동정하였으며, 주요 스테로이드 대사물질로는 testosterone(T)과 estradiol-$17{\beta}$(E2)로 확인되었다. NP는 난경 1.1, 1.3 그리고 1.4 mm인 난모세포에서 T로의 대사를 저해하였으나, 난경 1.2, 1.3 그리고 1.4 mm인 난모세포에서는 E2로의 대사를 저해하였다. PCB104는 모든 난경의 난모세포에서 T로의 대사를 저해하였으며, 난경 1.2, 1.3 그리고 1.4 mm인 난모세포에서는 E2로의 대사를 저해하였다. 결론적으로, NP와 PCB104는 그물베도라치의 난모세포 성숙 과정에 있어 $[^3H]-17{\alpha}OHP$로부터 T와 E2로의 전환을 저해시키는 것으로 사료된다.
Choi, Min Hye;Lee, Sun Hee;Kim, Hye Ok;Cha, Sun Hwa;Kim, Jin Young;Yang, Kwang Moon;Song, In Ok;Koong, Mi Kyoung;Kang, Inn Soo;Park, Chan Woo
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제39권4호
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pp.166-171
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2012
Objective: We compared the assisted reproductive technology (ART) outcomes among infertile women with polycystic ovary syndrome (PCOS) treated with IVM, conventional IVF, GnRH agonist, and GnRH antagonist cycles. Methods: The prospective study included a total of 67 cycles in 61 infertile women with PCOS. The women with PCOS were randomized into three IVF protocols: IVM/IVF with FSH and hCG priming with immature oocyte retrieval 38 hours later (group A, 14 cycles), GnRH agonist long protocol (group B, 14 cycles), and GnRH antagonist multi-dose flexible protocol (group C, 39 cycles). IVF outcomes, such as clinical pregnancy rate (CPR), implantation rate (IR), miscarriage rate (MR), and live birth rate (LBR), were compared among the three groups. Results: Age, BMI, and basal FSH and LH levels did not differ among the three groups. The number of retrieved oocytes and 2 pronucleus embryos was significantly lower in group A compared with groups B and C. The CPR, IR, MR, and LBR per embryo transfer showed no differences among the three groups. There was no incidence of ovarian hyperstimulation syndrome in group A. Conclusion: The IR, MR, and LBR in the IVM cycles were comparable to those of the GnRH agonist and GnRH antagonist cycles. The IVM protocol, FSH and hCG priming with oocyte retrieval 38 hours later, is an effective ART option that is comparable with conventional IVF for infertile women with PCOS.
극동산 뱀장어의 자연 수정란을 이용하여 $23{\pm}0.5^{\circ}C$의 여과 해수가 공급되는 실내수조에서 난발생과 pre-leptocephalus 자어발달을 관찰하였다. 친어 관리에 있어서 암컷은 연어 뇌하수체 추출물(20 mg/fish)과 수컷은 HCG (1 IU/g BW)를 매주 복강 주사하여 인위적인 성성숙 및 자연산란을 유도하였다. 수정란은 직경 1.0 mm 정도의 분리 부성란으로, 전형적인 반상분할(discoidal cleavage)을 통해 분할이 이루어졌다. 부화는 $23^{\circ}C$의 여과 해수에서 수정 후 38시간부터 개시되었다. 부화 직후의 자어는 전장 약 3.0 mm, 근절수는 평균 42개였다. 부화자어의 입과 항문은 부화 후 4.5일째에 열렸고, 난황은 부화 후 6.5 일째에 거의 흡수되었다. 자어는 14.5일 동안 생존하였고, 이때 전장 $5.87{\pm}0.25mm$, 근절은 98개였다. 그러나 수정란과 prelaptocephalus 자어발생의 형태학적 특징은 자연수정과 건식법에 의한 인공수정과 큰 차이점은 없었다.
본 실험은 preantral 난포를 antral 단계까지 성숙시 비교, 또 난포 성숙, 수정 및 배발달을 유도할 수 있는 체외배양체계를 개발하고자 시행되었다. 협막세포로 둘러쌓인 소 preantral난포 (150 $\pm$ 1.2 $\mu\textrm{m}$)를 1 mg/$m\ell$ collagenase와 0.2 mg/$m\ell$ DNase I가 포함된 Leibovitz L-15 배양액에서 효소적 방법과 물리적 방법으로 난소조직으로부터 분리하였고, 체외난포 성숙 배양액인 $\alpha$MEM을 기본 배양액으로 여러 농도의 FSH와 LH를 첨가하여 25일간 배양하였다. FSH (10~150 ng/$m\ell$) 첨가군의 성숙율과 생존율은 대조군의 그것보다 유의하게 높았으나(P < 0.001), LH (1~125 ng/$m\ell$) 첨가군들과 대조군 사이에서는 유의차가 없었다. FSH (90 ng/$m\ell$)와 LH (25 ng/$m\ell$)를 공동첨가군의 생존율 (40%)과 성숙율 (244$\pm$0.5 $\mu\textrm{m}$)은 대조군의 그것 (25%, 160 $\pm$0.5 $\mu\textrm{m}$)보다 양호하였다. 결과적으로, preantral 난포를 25일간 체외배양한 후, 50%의 건강한 antral 난포를 획득할 수 있었고, 이들 난포중 60%가 제 1극체가 있는 완전한 감수분열을 이루었고 (18.1%), 10.0%가 배발달을 하여 배반포 단계에 이르렀다. 이런 결과는 협막세포가 있는 소 preantral 난포는 상기의 체외배양체계에 의해 antral 단계까지 성장할 수 있고, 체외에서 성숙된 소 preantral 난포의 난자는 분열능을 획득하고 수정 및 배발달이 가능하다는 것을 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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