• 한국수의병리학회지
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• 제5권2호
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• pp.57-62
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• 2001

Recently various molecular diagnostic techniques have been used to identify rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV), a causative agent responsible for acute hepatitis and disseminated intravascular coagulation in rabbit. But they were hard to perform and time consuming. To detect RHDV in a rapid and easy way, we developed biotinylated oligonucleotide probe within ORF 1 region encoding the polyprotein of RHDV in formalin-fixed and paraffin-embedded tissues from various tissues of 20 rabbits naturally infected with RHDV, Our in situ hybridization (ISH) was quickly carried out within two hours by MicroProbe capillary action system. The ISH produced a positive reaction in liver, kidney and lung. In conclusion, ISH with a biotintlated oligonucleotide probe provided a useful diagnostic method for detecting RHDV.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제28권11호
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• pp.1923-1924
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• 2007

• 한국정보과학회논문지:시스템및이론
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• 제36권1호
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• pp.1-8
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• 2009

생물정보분야에서 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)를 제작하는 문제는 시간을 많이 소모하는 문제이다. 이 문제를 해결하기 위하여 해시를 이용한 가속계산이 주로 쓰이고 있고 BLAST란 프로그램이 대표적으로 생물정보분야에서 사용되고 있다. BLAST류의 프로그램들은 DNA서열의 특성에 따라 시드를 변형하여 해시를 개선하는 알고리즘을 적응하여 서열간의 유사도가 높은 부분을 찾는다. 그러나 이 프로그램들은 원래 올리고뉴클레오타이드 제작을 위해서가 아닌 지역정렬 문제를 해결하기 위한 방법들로써 발전하여 왔으므로 본 문제에 효율적인가에 대한 검증이 아직까지 이루어지지 않았다. 우리는 BLAST류의 프로그램에서 사용된 시드(seed)들이 올리고뉴클레오타이드 제작에 효과적인가를 판단할 수 있는 효율적이고 차별적인 잣대를 제시하고 이에 따라 다섯 종류의 대표적인 시드를 평가하였다. 평가에서 spaced seed라는 시드가 가장 좋은 결과를 보임을 정량적으로 계산할 수 있었다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제3권1호
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• pp.64-70
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• 2000

DNA probes for the l6S rRNA have been designed for the detection of Edwardsiella tarda. In order to accomplish this purpose, the l6S rRNA gene from E. tarda has been cloned and sequenced. Two highly feasible oligonucleotide probe sites have been determined by the database analysis programs presented by PCGENE and BLAST. These two probes have been evaluated by slot blot hybridization analysis. Hetero- and homo-trimeric templates have been synthesized using these two probe sites. The templates have been further multimerized by PCR to generate between 150 and 300 bp long DIG-11-dUTP labeled probes. Unlike 3' end labeled oligonucleotide probes or templates, multimerized probes showed no cross­hybridization in the given experimental condition. Furthermore, a significant increase in sensitivity has been observed with these probes. This method, we presented here, may be useful for the designing of probes for the detection of other fish pathogenic microorganisms also.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제50권1호
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• pp.29-41
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• 2001

결핵환자에 있어 rpoB 유전자 염기서열 돌연변이로 인해 생겨나는 rifampin(RIF)내성은 화학요법치료에서 나타나는 다제내성의 표지자로서 많은 연구가 되어 있으며 rifabutin(RIB)은 이러한 RIF의 내성을 보이는 일부 점돌연변이에 대하여 감성 또는 내성을 보이는 것으로 보고되고 있다. 그러므로 본 연구에서는 mycobacteria rpoB 유전자의 특정 DNA 서열(17 bp)을 고정한 올리고뉴클레오티드 칩을 개발하여 rpoB 유전자의 점돌연변이으로 인한 RIF과 RIB의 감수성을 조사하고자 하였다. 방법 : 사용된 올리고뉴클레오티드 칩은 RIF 내성 프로브 및 RIB 감성 프로브를 포함하도록 고안되었으며, 각각의 돌연변이에 상응하는 야생형 프로브를 동일한 염기서열에서 선정하여 형광 시그날 세기의 직접비교에 의해 보다 정확한 탐지를 가능하게 하였다. 결과 : 15개의 임상 분리체를 검사한 결과 RIF 내성으로 밝혀진 돌연변이중 13개의 임상 분리체에서 RIB 감수성 돌연변이 종류를 판별할 수 있었다. 결론 : 올리고뉴레오티드 칩으로 rpoB 유전자에 대한 점돌연변이 연구는 결핵환자에 대한 RIF과 RIB 약제내성 유무를 판단케 함으로써 효과적인 화학요법치료를 가능케 할 것이며 기존 방법과 비교시 효율 및 재현성이 매우 높다고 판단되었다.

• 대한전기학회논문지:전기물성ㆍ응용부문C
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• 제51권6호
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• pp.265-270
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• 2002

The determination of DNA hybridization reaction can apply the molecular biology research, clinic diagnostics, bioengineering, environment monitoring, food science and application area. So, the improvement of DNA hybridization detection method is very important for the determination of this hybridization reaction. Several molecular biological techniques require accurate predictions of matched versus mismatched hybridization thermodynamics, such as PCR, sequencing by hybridization, gene diagnostics and antisense oligonucleotide probes. In addition, recent developments of oligonucleotide chip arrays as means for biochemical assays and DNA sequencing requires accurate knowledge of hybridization thermodynamics and population ratios at matched and mismatched target sites. In this study, we report the characteristics of the probe and matched, mismatched target oligonucleotide hybridization reaction using thermodynamic method. Thermodynamic of 5 oligonucleotides with central and terminal mismatch sequences were obtained by measured UV-absorbance as a function of temperature. The data show that the nearest-neighbor base-pair model is adequate for predicting thermodynamics of oligonucleotides with average deviations for $\Delta$H$^{0}$ , $\Delta$S$^{0}$ , $\Delta$G$_{37}$ $^{0}$ and T$_{m}$, respectively.>$^{0}$ and T$_{m}$, respectively.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제45권4호
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• pp.358-364
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• 2017

Asymmetric PCR preferentially amplifies one DNA strand for use in DNA hybridization studies. Linear-After-The-Exponential-PCR (LATE-PCR) is an advanced asymmetric PCR method which uses innovatively designed primers at different concentrations. This study aimed to optimise LATE-PCR parameters to produce single-stranded DNA of Candida spp. and Aspergillus spp. for detection via probe hybridisation. The internal transcribed spacer (ITS) region was used to design limiting primer and excess primer for LATE-PCR. Primer annealing and melting temperature, difference of melting temperature between limiting and excess primer and concentration of primers were optimized. In order to confirm the presence of single-stranded DNA, the LATE-PCR product was hybridised with digoxigenin labeled complementary oligonucleotide probe specific for each fungal genus and detected using anti-digoxigenin antibody by dot blotting. Important parameters that determine the production of single-stranded DNA in a LATE-PCR reaction are difference of melting temperature between the limiting and excess primer of at least $5^{\circ}C$ and primer concentration ratio of excess primer to limiting primer at 20:1. LATE-PCR products of Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis and Aspergillus terreus at up to 1:100 dilution and after 1 h hybridization time, successfully hybridised to respective oligonucleotide probes with no cross reactivity observed between each fungal genus probe and non-target products. For Aspergillus fumigatus, LATE-PCR products were detected at 1:10 dilution and after overnight hybridisation. These results indicate high detection sensitivity for single-stranded DNA produced by LATE-PCR. In conclusion, this advancement of PCR may be utilised to detect fungal pathogens which can aid the diagnosis of invasive fungal disease.

• 한국수의병리학회:학술대회논문집
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• 한국수의병리학회 2002년도 추계학술대회초록집
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• pp.142-142
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• 2002

돼지의 주요 장염 유발 바이러스인 돼지 전염성 위장염 바이러스 (transmissible gastroenteritis virus; TGEV), 돼지 유행성 설사증 바이러스 (porcine epidemic diarrhea virus; PEDV), 돼지 칼리시 바이러스 (porcine enteric calicivirus; PECV), 돼지 로타바이러스 A 형과 C 형 (porcine rotavirus; PRY, group A and C)을 동시에 감별 진단 할 수 있는 신속하고 정확한 oligonucleotide microarray 진단법을 개발하였다. 이 진단법은 유리슬라이드에 각각의 바이러스에 특이적인 부위에서 제작된 oligonucleotide probe를 찍은 DNA chip을 제작하여 여기에 각각의 바이러스를 역전사하고 cy5-dCTP를 포함한 multiplex PCR을 수행한 다음 hybridization 하였다. 이후 hybridization 결과는 fluorescence scanner를 이용하여 확인하였다. 이 새로운 microarray system은 RT-PCR과 같은 기존의 진단방법보다 소량의 바이러스를 민감하게 검사할 수 있을 뿐 아니라 hybridization을 통해 검사결과의 정확성을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 개발한 microarray system은 돼지의 설사 유발 바이러스를 진단하는데 매우 유용한 진단 방법임을 확인하였다.

• 한국진공학회:학술대회논문집
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• 한국진공학회 2014년도 제46회 동계 정기학술대회 초록집
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• pp.402.1-402.1
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• 2014

Photonic force microscopy (PFM) is an optical tweezers-based scanning probe microscopy, which measures the forces in the range of fN to pN. The low stiffness leads proper to measure single molecular interaction. We introduce a novel photonic force microscopy to stably map various chemical properties as well as topographic information, utilizing weak molecular bond between probe and object's surface. First, we installed stable optical tweezers instrument, where an IR laser with 1064 nm wavelength was used as trapping source to reduce damage to biological sample. To manipulate trapped material, electric driven two-axis mirrors were used for x, y directional probe scanning and a piezo stage for z directional probe scanning. For resolution test, probe scans with vertical direction repeatedly at the same lateral position, where the vertical resolution is ~25 nm. To obtain the topography of surface which is etched glass, trapped bead scans 3-dimensionally and measures the contact position in each cycle. To acquire the chemical mapping, we design the DNA oligonucleotide pairs combining as a zipping structure, where one is attached at the surface of bead and other is arranged on surface. We measured the rupture force of molecular bonding to investigate chemical properties on the surface with various loading rate. We expect this system can realize a high-resolution multi-functional imaging technique able to acquire topographic map of objects and to distinguish difference of chemical properties between these objects simultaneously.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권3호
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• pp.177-184
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• 1996

흰쥐의 폐조직 절편에서 실험적으로 유발시킨 폐포자충을 검출하고자 조직내교잡법 (in situ hybridization)을 수행하였다 흰쥐는 methylprednisolone(데포-메드롤)을 10 mg/kg의 양으로 주 1회 피하주사하여 면역억제시켰고. 6 8 및 9주에 희생시켜 폐를 적출한 후 포르말린에 고정하였다. 폐포자충의 5S rRNA에 상보적인 22 base길이의 oligonucleotide probe를 주문제작(한국 생공)하였고 3' 부위에 biotin을 부착하였다 조직내교잡법은 Microp「obi stainin료 system과 manual capillary action법을 이용하여 1시간 이내에 수행하였다 폐포자충은 주로 폐포세포의 내강면. 폐포내 삼출물 및 세기관지의 분비물 등에서 검출되었다 6주 면역억제시 양성반응은 주 로 폐단면의 가장자리 부위에서 부분적으로 간찰되었으나. 8 내지 9주에서는 전체적으로 관찰되었 나. Grocott의 methenamine silver 염색법에 비하여 조직내 교잡법은 폐포자충을 신속하게 검출 할 수 있호 영양형의 검출에는 특히 유리하며. 다른 알려진 병원성 진균 및 원충류와의 교차반응이 없어. 실험적으로 유발시킨 폐포자충에 의한 폐렴의 진단에도 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.