• 한국식품과학회지
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• 제39권3호
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• pp.299-303
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• 2007

본 연구에서는 L. monocytogenes를 신속하게 분석할 수 있는 면역크로마토그래피법을 개발하고자 하였다. 먼저 L. monocytogenes에 대한 단크론성 항체(FKLM-3B12-37)를 개발하여 직경 40nm로 제작된 colloidal gold와 합성한 후 conjugate pad에 처리하였고 nitrocellulose membrane 상의 test line과 control line에 단크론성 항체와 anti-mouse IgG를 각각 처리하여 면역크로마토그래피법을 개발하였다. 개발된 면역크로마토그래피법의 검출한계는 $10^{5}$ cell/mL 수준까지 검출이 가능했으며 다른 식중독 세균과는 교차 반응이 없는 것으로 나타났다. 임으로 오염시킨 식품시료의 경우 증균과정 없이 $10^{4}$ cell/25g까지 바로 분석하는데 어려움이 있으며 24시간의 증균과정을 거친 후에는 $10^{4}$ cell/25g까지 검출할 수 있었다. 본 연구에서 개발된 면역크로마토그래피법은 24시간의 증균 만으로 식품에 오염되어있는 L. monocytogenes를 검출할 수 있는 것으로 사료되었고, 기존의 식중독균 진단방법에 비해 신속하고 간편하게 그 결과를 확인할 수 있었다.

• 한국식품과학회지
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• 제35권3호
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• pp.386-392
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• 2003

포도 착즙액의 당도를 $24^{\circ}Brix$로 조절하여 $25^{\circ}C$에서 2주간 발효하여 제조한 후 $15^{\circ}C$에서 14주간 숙성과정을 거친 포도주의 이화학적 성분 및 미생물의 변화를 살펴보았으며 한외여과 후의 포도주의 이화학적 특성의 변화를 관찰하였다. 총 세균수는 발효 초기 $3.3{\times}10^2\;CFU/mL$에서 2주간의 발효 후에는 $2.3{\times}10^6\;CFU/mL$로 증가한 후 숙성과정을 거친 후에는 $1.9{\times}10^3\;CFU/mL$로 다시 감소하였다. 효모의 경우에는 발효 초기 $2.8{\times}10^2\;CFU/mL$에서 발효 후에는 $2.2{\times}10^7\;CFU/mL$로 증가한 후, 숙성과정을 거친 후에는 $1.6{\times}10^4\;CFU/mL$로 역시 감소하는 경향을 보였다. 탁도, pH, 총당, 환원당, 고형물 함량은 발효가 진행됨에 따라 감소하였고, 산도, 알코올 함량은 증가하는 경향을 나타내어 발효가 완료된 후의 산도는 0.64%, 알코올 함량은 8.4%의 값을 보였다. 숙성과정 중에는 대부분의 이화학적 성질은 크게 변화하지 않았다. 포도주를 $0.45{\mu}m$ nitrocellulose 미세여과막을 이용하여 여과한 후 재질과 공경이 서로 다른 한외여과막을 사용하여 한외여과한 결과 Biomax 100K 막이 초기 flux가 $100\;liter/m^2/h$ (LMH)로 가장 높아 한외여과공정의 최적 한외여과막으로 선정하였다. 한외여과에 의해 포도주 내에 존재하는 미생물은 완벽하게 제거되었으며 환원당 함량과 고형물 함량은 약간 감소하였으나 그 이외의 이화학적 특성은 크게 변화하지 않았다. 포도주를 $30^{\circ}C$에서 12주간 저장하였을 경우 저장기간동안 미생물이 전혀 검출되지 않았으며 이화학적 특성도 변화하지 않았다.

• 전기화학회지
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• 제1권1호
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• pp.40-44
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• 1998

pH변화를 정밀하게 측정하기 위하여 빠른 응답특성과 높은 감도를 갖는 전기화학적 전위차를 이용한 LAPS(Light-Addressable Potentiometric Sensor) 소자 및 시스템을 제작하여 그 기초 특성을 조사하였다. 먼저 pH 변화에 따른 LAPS의 정전기적 인 변화특성 및 소자의 변수를 LAPS 등가회로 모델을 이용한 모의실험을 통해 검증하고 이러한 모의 실험을 바탕으로 하여 LAPS 소자 및 시스템을 제작하였다. 제작된 LAPS 시스템은 pH 2-11 사이에서 56 mV/pH의 선형적인 감도를 보였다. 구성된 LAPS 시스템의 다양한 응용성을 도모하기 위한 시도로서 먼저, 일반적인 urea 센서가 가지는 긴 응답시간의 단점을 극복하기 위해 nitrocellulose membrane 에 urease가 고정화된 막을 LAPS에 부착하여 측정한 결과 urease 농도 $50{\mu}g/ml,500{\mu}g/ml$에 대하여 각각 0.29mV/sec, 0.816 mV/sec의 매우빠른 응답특성을 얻을 수 있었다. 또한 환경적 측면에서 중요한 우라닐 이온의 감지를 위하여 우라늄 인식 매체를 LAPS의 감지부에 부착하고 수용액 속에 녹아 있는 우라늄 이온을 측정한 결과 $10^{-11}\~10^{-4}M$의 넓은 농도 범위에서 25mV/decade 감도를 보였다

• BMB Reports
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• 제30권5호
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• pp.315-319
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• 1997

It was discovered that monoclonal anti-erythropoietin (EPO) antibody CFC-6 can neutralize EPO-induced cell activation. To know the binding site of CFC-6, recombinant human erythropoietin (rhEPO) was digested with Glu-C, followed by a separation using high performance liquid chromato graphy (HPLC). Each HPLC fraction was blotted on the nitrocellulose membrane and the membrane was treated with anti-EPO antibody CFC-6 and anti-mouse antibody which is modified with peroxidase. Only one spot showed the color and the fraction was sequenced by Edman degradation. The results suggest that CFC-6 recognizes amino acid sequence V63-W-Q-G-L-A-L-L-S-E72 which is a part of helix II of the EPO molecule. Binding of CFC-6 to EPO may inhibit EPO binding to its receptor, which implies that the antibody binding site and the receptor binding site are close or overlapping.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제37권3호
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• pp.157-162
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• 1999

Serum from mouse orally ingested with tissue cyst forming stain (Me49) of Toxoplasma gondii was assayed by Western blot and immunofluorescene assay (IFA) to establish early responses in antigenicity of the parasite in mouse model of foodborne toxoplasmosis. Sera were collected weekly to blot the RH antigen transferred onto nitrocellulose paper after being separated by 12% SDS-PAGE. With the second week serum, 34 kDa protein (p34) was detected uniquely, and all antigens of T.gondii were detected with the sera from 3 or 4 weeks. p34 was not a member of the major surface membrane proteins and confirmed to be localized in the rhoptry by IFA. It was secreted into parasitophorous vacuolar membrane (PVM) during the entry into host cells. 10.3% of sera detected p34, while all the ELISA positive sera detected the band. It has diagnostic usefulness of presumed T.gondii infection. We suggest the name of the p34 protein as ROP9.

• 농업과학연구
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• 제39권3호
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• pp.421-425
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• 2012

식중독을 일으키는 대표적인 원인균인 살모넬라를 검출하기 위해 측방 유동형 간이진단 키트를 제작하였다. 또한, 제작된 간이진단 키트의 검출한계를 향상시키고 살모넬라 균수를 정량적으로 분석하기 위해 이미지 분석 시스템을 적용하였다. 그 결과 간이진단 키트의 검출한계는 $10^6\;cfu/mL$에서 $10^5\;cfu/mL$로 향상시킬 수 있었다. 살모넬라 균수의 정량적 분석을 위해 $T_{peak}/C_{peak}$와 $T_{area}/C_{area}$값을 이용하여 다중회귀분석을 수행하였으며 개발된 다중회귀방정식 중에서 가장 단순하고 결정계수가 높은 다중회귀방정식을 선정하였다. 추가로 제작된 간이진단 키트를 이용하여 개발된 다중회귀방정식을 검증한 결과 결정계수가 0.9393으로 우수한 선형성을 나타내었다. 본 연구에서 개발된 다중회귀방정식을 이용하여 더 정확하게 간이진단 키트에서 측정된 살모넬라 균수를 예측하는 것이 가능하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제31권5호
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• pp.705-709
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• 2021

Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) is a major bacterial pathogen that causes periodontitis, a chronic inflammatory disease of tissues around the teeth. Periodontitis is known to be related to other diseases, such as oral cancer, Alzheimer's disease, and rheumatism. Thus, a precise and sensitive test to detect P. gingivalis is necessary for the early diagnosis of periodontitis. The objective of this study was to optimize a rapid visual detection system for P. gingivalis. First, we performed a visual membrane immunoassay using 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB; blue) and coating and detection antibodies that could bind to the host laboratory strain, ATCC 33277. Antibodies against the P. gingivalis surface adhesion molecules RgpB (arginine proteinase) and Kgp (lysine proteinase) were determined to be the most specific coating and detection antibodies, respectively. Using these two selected antibodies, the streptavidin-horseradish peroxidase (HRP) reaction was performed using a nitrocellulose membrane and visualized with a detection range of 10³-10⁵ bacterial cells/ml following incubation for 15 min. These selected conditions were applied to test other oral bacteria, and the results showed that P. gingivalis could be detected without cross-reactivity to other bacteria, including Streptococcus mutans and Escherichia fergusonii. Furthermore, three clinical strains of P. gingivalis, KCOM 2880, KCOM 2803, and KCOM 3190, were also recognized using this optimized enzyme immunoassay (EIA) system. To conclude, we established optimized conditions for P. gingivalis detection with specificity, accuracy, and sensitivity. These results could be utilized to manufacture economical and rapid detection kits for P. gingivalis.

• Animal cells and systems
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• 제7권1호
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• pp.89-92
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• 2003

Immunoassays have become indispensable tools and achieved great importance in scientific and medical research. However, typical immunoassays are time-consuming and use complex, multi-step procedures. In this study, we introduce a new immunoassay system for the quantification of several analytes at a time without any washing steps. It is comprised of a detector solution with fluorescence-labeled antibodies and a test strip with immobilized capture antibodies. Using a micro-array scanner, the antigen-antibody complex was quantitatively determined by measuring the intensities of fluorescence on the capture lines or dots of nitrocellulose membrane. This method demonstrated its rapid quantitative determination of analytes without many processing steps as well as specific identification of multiple analytes in biological specimens.

• 한국임상수의학회지
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• 제21권1호
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• pp.20-22
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• 2004

개의 아토피성 피부염의 주된 세균성 감염은 Staphylococcus intermedius에 의해 발생한다. 본 연구의 목적은 아토피성 피부염을 가지고 있는 환견의 혈청과 정상견의 혈청을 이용하여 체액성 면역반응을 유발하는 주된 세균단백질을 규명하는데 있다. 건국대학교 수의과대학 부속동물병원에 내원한 아토피성 피부염 및 표재성 세균성 농피증을 앓고 있는 환견의 혈청 및 정상견의 혈청을 분리하여 본 실험에 사용하였으며 아토피성 피부염을 가지고 있는 환견에서 S. intermedius 균을 분리하였다. Brain heart infusion 액체배지 조건 및 $37^{\circ}C$ 배양조건에서 호기상태로 증균시켰으며 증균후 포도상구균을 PBS완충액에 부유시킨후 원심분리하고 최종적으로 lysostaphin을 이용하여 세균단백질을 분리하였다. 수거한 세균단백질은 SDS-PAGE을 이용하여 단백질을 전기영동하였으며 영동후 nitrocellulose membrane을 이용하여 단백질을 이동시켰다. Western blot은 anti-dog-IgG, 아토피성 피부염의 혈청 및 정상혈청을 이용하였다. 결론적으로 아토피성 피부염의 혈청을 이용해 확인한 S. intermedius의 주요 세균단백질은 18, 31, 75, 및 110 kDa이였다. 현재의 연구결과로 볼 때 아토피성 피부염에 감염된 대부분의 환견은 S. intermedius의 세균단백질에 대한 체액성 면역반응이 유발된다고 생각된다.

• Mycobiology
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• 제39권2호
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• pp.79-84
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• 2011

Nuclear distribution within the extra-radical fungal structures and during spore production in the arbuscular mycorrhizae fungus Glomus intraradices was examined using an in vitro monoxenic culture system. A di-compartmental monoxenic culture system was modified using a nitrocellulose membrane and a coverglass slip for detailed observations. Nuclear distribution was observed using the fluorescent DNA binding probes SYBR Green I and DAPI. Both septate and non-septate mycelial regions were observed, but cytoplasmic contents were only found within non-septate mycelia. Nuclear fluorescent staining revealed that the non-septate hyphal region contained nuclei only with cytoplasm, and that nuclear distribution was limited by septa. Swollen hyphal bodies were often associated with septate and empty-looking hyphae. Cytoplasmic contents filled the swollen hyphal body from the non-septate hyphal region following removal of the septa. As a consequence, the swollen body developed into a new spore. These observations provide understanding about the distribution of AM fungal nuclei within extra-radical mycelia and during spore formation. The results suggest a mechanism by which the development of a cytoplasm-containing mycelium is controlled by the formation or removal of septa to efficiently maintain and proliferate essential contents. This mechanism may provide a survival strategy to the fungus.